高中生物选修三专题一1.2
1.2 基因工程的基本取
目的基因主要是指 编码蛋白质的结构基因 目前被广泛提取使用的目的基因有:苏云 金杆菌抗虫基因、植物抗逆性基因(抗病毒、 抗细菌)、人胰岛素基因等的基因 3)人工合成
1.常用菌: 大肠杆菌 2.微生物作受体细胞原因: 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对少 处理细胞→ 感受态 细胞 →表达载体与感受态细胞混合→ _________ 感受态 细 胞吸收DNA分子。 3.转化方法: Ca2+
(四)目的基因的检测与鉴定
检测: 是否插入目的基因
—— DNA分子杂交
是否转录
真核细胞的基因结构
编码区是间隔的、不连续的。 其中,能够编码蛋白质的序列叫做外显子,一般不 能够编码蛋白质的序列叫做内含子。
真核生物基因表达的调控
• 信使RNA的加工:
编码区上游 转录 编码区下游
初级转录物
加工
剪切内含子转录部分 拼接外显子转录部分
成熟的信使RNA如何从基因中得到我们所需的目的 基因?根据基因的有关信息:如基因核苷酸序列或表达的 产物或基因的功能等等。(课本p9)
2)利用PCR技术扩增目的基因
原理: DNA双链复制
前提: 要有一段已知 目的基因的脱 氧核苷酸序列 ,以便合成引 物。
5/G—G 5/
引物Ⅱ
/ 3 T—C 3/ A—G 5/
3/
引物Ⅰ
G — G 3 / C —C
G —A 5 /
(二)基因表达载体的构建 —— 核心 基因表达载体的组成:
a、目的基因 b、启动子
c、终止子 d、标记基因
(三)将目的基因导入受体细胞
受体细胞 内,并且在 转化——目的基因进入_________ 稳定 和_____ 表达 的过程 受体细胞内维持_____
(三)将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法 导入植物细胞 方法 基因枪法
反转将含有某种生物不同基因的很多的DNA片段,导入到 受体菌群中储存,每个受体出来,选 用适当的限制酶,将DNA切成一定大小的DNA 片段,然后将这些片段分别与载体连接起来, 导入受体菌中储存,这个群体包含了这种生 物的所有基因。
花粉管通道法
导入动物细胞 ——显微注射法 导入微生物细胞 —— 感受态细胞吸收 DNA分子
1.农杆菌特点:易感染双子叶植物和裸子植物,
植物体损伤分泌酚类化合物,吸引农杆菌。Ti质粒 的T-DNA可转移至受体细胞的染色体DNA上.
将目的基因导入受体细胞(动物细胞)
• 显微注射法
将目的基因导入微生物细胞
1. 加热至90-95度:DNA解链,氢键断裂; 2.冷却至55-60度:引物结合到互补DNA链;
3.加热至70-75度: Taq酶从引物起始进行互补链 的合成
利用PCR技术扩增目的基因
3)人工合成 如果基因比较小,核苷酸序列又已知,也可 以通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。 反转录法 化学合成法
通过对受体 菌的培A反转录产生的 多种互补DNA片段(也叫cDNA),与载体连接后储 存在一个受体菌群聚合酶的作用是催化DNA转录为RNA。
——分子杂交
是否翻译
——抗原-抗体杂交
个体 鉴定: 抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等
如果显示出杂交带,就表明待测样品含有 目的基因或目的基因已经转录。
例:用棉铃饲喂棉 铃虫,如虫吃后不出现 中毒症状,说明未摄入 目的基因或摄入目的基 因未表达。如虫吃后中 毒死亡,则说明摄入了 抗虫基因并得到表达。 若不能表达,要对抗虫 基因再进行修饰。