姓名：肖峰学号： B0704002班级： 07生物技术（1）班指导老师：莫廷辉时间： 2009年11月目录实验一、培养基母液的配制实验二、培养基的配制与灭菌实验三、香蕉吸芽的组织培养实验四、烟草叶片的组织培养实验五、柱花草的组织培养实验六、木薯的组织培养实验七、桉树的组织培养实验八、玉米不成熟胚的培养实验九、花生成熟胚培养实验十、水稻盾片的培养实验十一、芦荟的组织培养（自选材料实验）实验一、培养基母液的配制一、实验目的掌握培养基母液的配制。
在配置培养基之前，为了方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。
当配置培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液。
二、实验原理培养基是植物细胞、组织和器官吸取营养的场所。
在植物细胞的分裂和分化过程中，需要各种营养物质，这些营养物质包括无机营养成分、有机营养成分、植物生长调节物质等。
在对植物的器官、组织和细胞进行离体培养时，只是切取植物体的一小部分，它们无法象整体植株那样合成生长发育所需的全部物质。
而自然界的植物千差万别，每一种植物都有自己独特的生理代谢过程和各自的营养需求，没有哪一种培养基能够适用于所有植物。
因此，对培养基组成成分的筛选是非常重要和必不可少的程序。
目前对植物进行组培时，人们所使用的培养基只几十种，其中MS培养基应用最为广泛。
说明MS 培养基的无机盐成分对许多植物种均是适宜的，它的无机盐含量较高，微量元素种类较全，浓度也较高。
三、实验试剂与仪器设备1、药品试剂：母液、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA、IAA、2，4-D等。
2、仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。
四、实验内容（一）母液的配制MS培养基母液方案配制如下表：具体配制步骤如下：1、大量元素母液的配制无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大20倍，用感量为0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解.溶解时在每只烧杯中加入30-40mL重蒸馏水，置于酒精灯上,加热使其溶解(注意温度不可过高，60-70℃)。
溶解后，在1000mL量筒中，混合后用重蒸馏水定容到1000mL。
其中CaCl2单独配制。
在加入母液时CaCl2应最后加入，以免形成沉淀。
将配好的混合液倒入细口瓶中，贴好标签保存于冰箱中。
配制培养基时，配1000mL培养基取此母液50mL。
2、微量元素母液的配制无机盐中微量元素母液，按照培养基配方用量的200倍，用微量0.0001g的电光分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解。
混合定容于100ml容量瓶中保存于冰箱中,配制培养基时，每配制1000mL培养基取此母液5mL.3、铁盐母液的配制无机盐中铁盐母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力分析天平，分别用50mL 烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取此母液10mL。
4、有机元素的配制无机盐中有机元素母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力天平，分别用50mL 烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取此母液10mL。
五、实验结果经过大家的集体分工，很快就配制好了母液。
母液澄清，无沉淀，说明配制成功，可以储存起来。
六、注意事项1、配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042-，Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。
2、配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。
3、药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。
4、药品的称量及定容都要准确。
各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。
5、一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，其中维生素氨基酸类可以分别配制，也可以混在一起。
5、母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。
实验二、培养基的配制与灭菌一、各培养基配制1、香蕉培养基：诱导培养基：MS＋BA 3.0 mg／L继代培养基： MS＋BA 3.0 mg／L生根培养基： MS＋NAA0.5mg／L2、烟草叶片培养基：诱导培养基： MS＋BA 1.0 mg／L继代培养基： MS＋BA 1.0 mg／L＋NAA 0.5 mg／L生根培养基： MS＋NAA 0.2 mg／L3、柱花草培养基叶片愈伤组织诱导培养基：M S+BA4mg/L+NAA1.0mg/ml继代培养基：M S+ BA4 mg/L+ NAA0.01mg/ml芽伸长培养基：M S+BA0.4+ NAA 0. 1mg/ml4、木薯外植体培养基：诱导培养基：MS + GA3 0.02 mg/L + NAA 0.02 mg/L继代培养基：MS + GA3 0.02 mg/L + NAA 0.02 mg/L生根培养基：MS + NAA 0.02 mg/L5、桉树外植体培养基：芽的诱导培养基：1／2 MS＋BA 0.5 mg／L＋IBA 1.0 mg／L芽的增殖培养基：MS＋BA 0.5 mg／L＋IBA 0.2 mg／L生根培养基： 1／2 MS＋NAA 0.2 mg／L6、花生胚培养基：1／2 MS7、玉米胚培养基：1／2 MS8、水稻盾片培养基：水稻发芽培养基：MS诱导培养基：MS＋2，4-D 2.0 mg／L＋BA 1.0 mg／L分化培养基：MS＋BA 2.0 mg／L生根培养基：MS＋NAA 1.5 mg／L9、自选材料—芦荟培养基芽诱导培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L继代增殖培养基：MS+ BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L生根培养的培养基配：1/2MS+NAA0.1mg/L二、培养基的配制及消毒：（1）按照MS培养基的配方（以配制1LMS培养基为例）取大烧杯加入先前配制好的母液其中包括：大量元素50ml、微量元素5ml、铁盐10ml、有机元素10ml，最后加钙盐50ml充分混匀。
再加入30g食用白糖，加入适量的去离子水使总量将近1L，混匀后调PH值（调至5.8-6.2），用1000ml量筒定容，最后向培养基中添加8.0g卡拉胶混匀。
注意事项：○1配制MS时，钙盐一定要最后加入；○2调好PH值后再加卡拉胶（或琼脂）。
（2）培养基配制好后分装到培养瓶中每瓶约30ml，盖好瓶盖帖上标签。
需要加入激素的培养基在定容到1000ml后加入所需的激素。
混匀后调PH值（调至5.8-6.2），用1000ml容量瓶定容，最后向培养基中添加8g卡拉胶，混匀后进行分装，然后装入高温高压灭菌锅进行灭菌（一般培养基用0.1MPa，121.5℃，15～30分钟可达到彻底灭菌的目的）。
灭菌好后取出冷却备用。
（3）培养环境条件：培养温度为28（-1、+1）℃，光照强度2000—3000LX，光照时间为12h/d，每隔7天观察一次。
三、超净操作台的消毒消毒时先用75%的酒精对超净台的各处进行消毒，点燃酒精灯放于超净台右侧，再对实验工具进行灼烧灭菌，后放于架上冷却待用。
并依次将实验中所用培养基瓶及所需试剂瓶进行消毒，置于超净台左侧，注意实验中要用75%的酒精对手进行消毒。
实验三、香蕉吸芽的组织培养摘要：香蕉是热带、亚热带地区的重要水果，也是华南四大名果之一，在果树栽培中占有相当的比重。
香蕉栽培具有速生快长、投产早、产量高、效益好、供应期长等优点。
传统的繁殖方法多是采用吸芽分株法，这种方法的繁殖系数低，速度慢，难以满足当前大规模的栽培生产，且容易传播疾病。
利用组织培养的技术来对香蕉优质品种进行无性繁殖，这样不但可以保持香蕉的优良性状，加快繁殖速度，而且，试管苗不带病虫害和病毒病，并且，利用组织培养技术得到的幼苗生长比较一致，有利于田间的管理和采收。
本实验利用香蕉的吸芽作为外植体，诱导培养基为MS＋BA 3.0 mg／L，继代培养基为MS＋BA 3.0 mg／L，生根培养基为MS＋NAA0.5mg／L。
关键词：香蕉吸芽诱导继代生根培养外植体1、材料和方法:1.1材料(1)香蕉吸芽：从农学院基地挖取品种优良无病虫害的香蕉吸芽(2)实验采用MS基本培养(3)诱导培养基： MS＋BA3mg／L(4)继代培养基： MS＋BA3mg／L(5)生根培养基： MS＋NAA0.5mg／L(6)PH： 5.8-61.2方法1.2.1外植体消毒方法用自来水冲洗吸芽表面的泥土，剥离外假茎，只留下茎和假茎各2-3cm长，假茎的的直径有2-3cm，然后，用洗衣粉清洗一遍，用自来水冲洗，转入0.1%升汞浸泡15-20min，其间不断搅拌，弃去升汞用无菌水洗3遍（无菌水漂洗：将从升汞中取出的香蕉吸芽组织块转入无菌水中漂洗，不断摇动使漂洗干净）留在瓶中备用。
1.2.2诱导培养将香蕉吸芽放到无菌工作台的无菌纸上，用消毒刀将外植体的假茎的最外层剥掉，以及有消毒刀将已经变色的茎外面一小层也切掉，然后从外植体茎中间一分为四，接入诱导培养基，共8瓶。
7天后观察，发现诱导培养基中香蕉吸芽组织裂开并且有转绿现象。
1.2.3继代培养14天后，将已经启动培养的香蕉材料从培养室内取出，在超净工作台上将生长良好的香蕉芽丛分开，切去顶部叶片部分，削去底部褐化部分，将芽丛接种于香蕉继代增殖培养基中。
继代增殖培养中每瓶培养基的接种香蕉芽丛数2代内可为1-2块，3-4代可为3-4块。
继代增殖培养代数视整个细胞工程实验时间而定，一般每2-3周继代一代，可继代增殖培养3-4代。
1.2.3根的诱导等到分化出来的芽长到1-2cm长后，将其从香蕉吸芽组织中切下来，接入生根培养基中，诱导其生根。
1.2.4炼苗和移栽（略）1.2.5培养条件：培养温度为28（-1、+1）℃，光照强度2000—3000LX，光照时间为12h/d（注意香蕉吸芽诱导期无需光照）,每个星期观察一次。
2、实验结果与分析：2.1 对香蕉的吸芽进行诱导培养时，共接种了8瓶，褐化现象不是很严重，诱导率为100%，污染率为0，说明用0.1%的升汞对香蕉的吸芽消毒15-20min的时间控制比较合理，消毒的效果也很好。
2.2 第一次继代培养时获得了7瓶香蕉苗，有1瓶香蕉苗由于褐化现象比较严重而死去。
可能是因为在继代的培养过程中，用刀切去褐化部分时切去的过多，使香蕉基部受伤严重而死亡。
第二次继代培养获得了7瓶香蕉苗，污染率为0，生长状况良好，其中1瓶已经分化出2个芽。
第三次继代培养时，将其中明显分出多个芽的香蕉苗进行分割，共获得了10瓶香蕉苗，污染率为0。
附录2、继代培养实验结果统计表2.3将增殖后的香蕉幼苗接种至生根培养基中，培养7天后观察，发现没瓶中的香蕉苗都有不同长度的根产生，生根率达100%，根的平均长度约为2cm。