土壤植酸酶的测定
1 分析意义植酸酶参与土壤含磷化合物的主要部分—植酸及其衍生物的脱磷酸化作用。
水解作用产物是植物的磷源。
2 测定原理土壤植酸酶催化肌醇六磷酸化合物,水解成肌醇和六个分子的磷酸。
测定植酸酶常以植酸钠为基质,以酶解所产生的无机磷量表示酶活性。
3 试剂配制
(1)植酸钠
(2)甲苯
(3)钼酸铵溶液25g钼酸铵加热溶于200mL蒸馏水中。
另取1L容量瓶加500mL水,再慢慢加入280mL浓硫酸,再将钼酸铵溶液加入,随加随摇匀,定容至1L,贮于棕色瓶中。
(4)(NH4)2SO4-H2SO4溶液取3g(NH4)2SO4加20mL 0.1N H2SO4,溶于1L 蒸馏水中。
(5)氯化亚锡溶液取2.5gSnCl2·2H2O溶于100mL10%HCl中。
(6)磷的标准溶液准确称取0.4392gKH2PO4,溶于1L水中即成标准液。
再稀释10倍得1mL含0.01mg磷的工作液。
标准曲线的绘制分别取1,3,5,7,9和10mL磷的工作液于50mL容量瓶中,加30mL 蒸馏水和2mL钼酸铵溶液,摇匀加入3滴氯化亚锡液,显色后稀释至刻度,摇匀并在分光光度计上于650nm处比色测定。
4 操作步骤称5g土壤置于100mL三角瓶中,加1mL甲苯,15min后再加10mL 植酸钠溶液,于37℃恒温箱中放置24h。
培养结束后,加50mL(NH4)2SO4-H2SO4溶液在振荡机上振荡50min。
过滤后吸取10mL滤液,置于50mL容量瓶中。
按绘制标准曲线的显色方法比色测定。
由标准曲线求出磷的含量(P2O5mg)表示植酸酶活性。