临床标本收集及保存
水平室温离心分离PBMC,4℃低温洗涤。
分离后单个核细胞加入细胞冻存液,混匀后进行分装,每管。
单个核细胞:4℃,24h内进行分离、分装。
分装后≤-150℃液氮中保存。
组织样本
样本采集严禁影响临床病理诊断。肿瘤直径≤1cm^3不建议采集或在病理医生指导下采集,采集部位应与用于石蜡切片相一致。
样本采集应在离体后30min内完成采集,采集时应避免坏死区及纤维化区,肿瘤细胞应>50%。
依据科研需求确定样本份数。
分离提取血浆、血清、白细胞层、血凝块进行分装,每例样本不少于3份。
血清/血浆:分装3管,管。
血凝块:分装2管,ห้องสมุดไป่ตู้cm^3/管。
EDTA抗凝:用于DNA提取、淋巴母细胞系建立和蛋白组学研究。分装3管、管
血清:室温血凝后≤30min内进行分离、分装;4℃,24h内进行分离、分装。
冷冻采集后的样本
依据科研需求确定样本份数。
采集量≥30g。
分装3管,10g/管。
冷冻干燥保存。
2≤-80℃长期保存.
胆汁样本
采集容器应无菌、干燥、洁净、具有防漏瓶盖。
采集清晨胆汁、采集时尽量选择与其他常规检验同时进行。
胆汁保存应加入细胞培养液(RPMI1640)
胆汁内细胞采集分离方法同血液样本。
依据科研需求确定样本份数。
血浆:4℃,24h内进行分离、分装。
全血/血清/血浆/血凝块≤-80℃长期保存。
外周血单个核细胞样本
血液样本用EDTA抗凝采集
全血样本采集后应尽快用淋巴细胞分离液分离单个核细胞
分离后的单个核细胞应加入细胞冻存液,并利用程序降温仪或程序降温盒进行梯度降温。
冻存液配置为90%FCS+10%DMSO
依据科研需求确定样本份数。
临床标本收集及保存
临床样本的收集与保存
样本类型
采集方法
处理方法
保存方法
血液样本
根据研究需要采集治疗前,治疗中及治疗后的空腹外周静脉血。
采集时尽量选择与其他常规检验同时进行
分别采集抗凝血(依据研究目的选择抗凝剂)和非抗凝(干燥或促凝)血液样本
肿瘤血液样本采集英确保放/化疗前有进行
血浆样本分离应进行两次离心
尿液样本可处理为:全尿。
常温保存:≤4h
0-4℃≤24h。
全尿≤-80℃长期保存.
细胞≤-150℃长期保存。
粪便样本
粪便应取新鲜标本,盛器应洁净,不得混有尿液,不可有消毒剂及污水。
采集标本时应用干净的竹签选取含有粘液、脓血等病变成分的粪便;外观无异常的粪便需从表面、深处及粪端多处取材,其量至少指头大小。
尿液样本含有细胞碎片等杂质,应进行离心。
尿液内细胞采集/分离方法同血液样本。
不同时段尿样研究方向:首次晨尿:白细胞、红细胞和激素浓度较高;随机尿样:适合常规筛查和细胞学检测;分级尿样:适用于分析物浓度;定时尿样:可用于比较生物分子排泄模式。
依据科研需求确定样本份数。
尿液样本≤100ml。
分装5管,1ml/管。
依据科研需求确定样本份数。
2.采集量≥3ml。
3.分装3管,管。
样本置于液氮内转运。
2.上清液-80℃长期保存。
3.分离细胞≤-150℃长期保存。
唾液样本
使用蛋白酶抑制剂处理样本
进行离心、分离上清和可能存在物质、采集上清和颗粒物。
依据科研需求确定样本份数。
分装3-5管,管。
样本置于液氮内转运。
≤-80℃长期保存。
样本采集时应在洁净环境中操作,保存RNA时应尽量在无菌环境下进行;采集不同样本时应更换采集器材、防止交叉污染。
4.采集顺序:标明“远癌-近癌-癌灶”顺序,正常组织(距癌灶边缘>3cm或最远端)→癌旁组织(距离癌灶边缘<3cm)→癌组织
采集后样本置于液态液氮中应使用内旋式冻存管,置于气相液氮或-80℃冰箱中可使用外旋式冻存管。
采集量≥10ml。
胆汁/RPMI1640比例为:1/25。
分装5管,2ml/管。
采集后4℃保存,时间≤12h内进行分装。
≤-150℃长期保存。
脑脊液
样本采集后应转入含有EDTA和氯化钠混合液中。
2.如果含有红细胞或颗粒物时应低温离心。
3.采集细胞应使用专业采集方法。
4.脑脊液保存应加入保护剂(DMSO)并使用程序降温仪进行梯度降温。
石蜡样本置于中性福尔马林中常温转运,尽快制成蜡块。
RNA later样本常温转运(≤24h),≤-20℃保存。
OCT样本≤-20℃保存。
新鲜组织样本置于液氮中保存。
培养细胞样本
采集容器应无菌、干燥、洁净、具有防漏瓶盖。
吸出培养皿培养液,用PBS冲洗2次,加入胰蛋白酶37℃消化1min。
除去胰蛋白酶,加入5ml培养液混匀后取出细胞液进行离心。
除去上清液后加入细胞保护剂,胎牛血清及DMSO混匀放入内旋式冻存管内,进行程序降温。
干细胞保存加入特定细胞培养液及高浓度胎牛血清。
依据科研需求确定样本份数。
每皿细胞对应1个冻存管保存。
传代细胞建议取处于指数生长期、较大瓶皿培养的80%-90%汇合单层细胞。
收集培养液时,1000g/min离心5-10min。
加入胰蛋白酶后需放入恒温箱37℃恒温1min。
样本置于液氮内转运。
≤-150℃长期保存。
尿液样本
采集容器应无菌、干燥、洁净、具有防漏瓶盖。
进行毒理分析时应使用高密度聚丙烯类容器。
检测特殊分析物时应在分管前加入EDTA或焦亚硫酸钠等防腐剂。
避免经血、白带、精液、前列腺液、粪便污染。
特殊样本应避光保存
建议采集首次晨尿。
每份肿瘤样本应有配对的血液样本。
依据科研需求确定样本份数。
肿瘤、瘤旁及非瘤(正常)组织各2-3份。
石蜡/OCT样本1份或5张组织切片,用于形态学对照。
需留取质控样本()留取份数依据科研目的而定)
每份样本应≥^3或300mg或1*10^7细胞。
石蜡样本不小于**。
样本/福尔马林液比例应≥1/5。
样本置于液氮内转运。