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文档之家› 超高效液相色谱(UPLC)课件
超高效液相色谱(UPLC)课件
• 光学及/或质谱检测器 • 可调紫外或光电二极管矩阵 • 为UPLC™专门优化的流动池 • 高速检测
色谱柱管理:
• 创新的枢轴转动设计 • 置色谱柱出口直接到检测器
样品管理器:
• 低扩散XYZZ’形式 • 快速进样周期 • 低交叉污染 • 样品盘及/或样品瓶 • 可选样品组织器
两元溶剂管理:
• 高压混合 • 两元梯度 • 四溶剂选择 • 在线脱气 • 低扩散设计 • UPLC的耐压能力
如化妆品中违禁品的检测
高分辨串联质谱QTOF micro
灵敏度高(pg-fg级)
和选择性强得到的
质谱谱图数据完整、 品质高。因而,在
天然产物,新药开
发,药代研究和蛋 白质组学领域的定
性、定量分析研究
方面占有重要地位。
从HPLC-MS到UPLC-MS 灵敏度明显提高
Ultra Performance LC™
AU
0.50
1.00
1.50
2.00
2.50 M inutes
3.00
3.50
4.00
4.50
5.00
0.012 0.010 0.008 0.006
0.004 0.002 0.000 -0.002 0.00
UPLC™ 1.7µm
0.50 1.00 1.50 2.00 2.50 M inutes 3.00 3.50 4.00 4.50 5.00
15.40 22.61 20.51 2.60 0.62 9.39 11.13 13.75
23.86 33.22 32.78 18.21
44.46 45.79 48.06 43.88 34.96 35.89 42.52 36.99 39.51 52.14
56.48 59.42 61.06 61.54 65.85 53.99
AU AU
对流出时间接近的色谱峰有更好的分离度及更高的灵敏度
2.理论基础
在高效液相色谱速率理论中, Van Deemter方程式的简
化表达式:
如果仅考虑固定相的粒度 对 的影响,其简化方程式可表 达为:
更小的颗粒度……
van Deemter 曲线带来的承诺
如果填料的颗粒继续演变……
填料颗粒尺寸的演变
60% 更快 30% 更灵敏 70% 更高分离度
5.0 µm
15.00
1.7 µm
7.00
在改进获得信息质量的前提下提高分析速度
Ultra Performance LC™
速度、灵敏度与分离度的结合
生产力:每次实验得到更多信息
HPLC 3.5µm
0.012 0.010 0.008 0.006
AU
0.004 0.002 0.000 -0.002 0.00
前景: 2.1×100mm色谱柱 1.7µm杂化填料颗粒 可达到15,000psi 通常有每米200,000理论 塔板数的柱效
0.040
0.020 AU 0.000
0.00
0.20
0.40 Minutes
0.60
0.80
1.00
速度、灵敏度及 分离度的完美结合
一分钟以内!
3.UPLC仪器介绍
检测器:
可看到更多 的样品信息
1.7 µm
1.00 2.00 3.00
AU
4.00 Minutes
5.00
6.00
7.00
8.00
0.016
AU 0.012 0.008 0.004 0.000 1.70 1.80 1.90 2.00 2.10 2.20 Minutes 2.30 2.40 2.50 2.60
使用1.7µm颗粒度的填 料增加灵敏度
Ultra Performance LC™
速度、灵敏度与分离度的结合
0.050 0.040 0.030 AU 0.020 0.010 0.000 0.00 0.050 0.040 0.030 AU 0.020 0.010 0.000 0.00 1.00 2.00 3.00 Minutes 4.00 5.00 6.00 2.00 4.00 6.00 8.00 Minutes 10.00 12.00
ACQUITY UPLC™ C18 色谱柱 2.1×30mm 1.7µm
黑色:第一次进样 红色:第1000次进样
3.3 超高效液相色谱的高速检测器
UPLC光导检测器流通池示意图
采样速度快 能减少谱带扩展 以保持柱效 灵敏度比HPLC提 高2-3倍
流通池体积小、池壁全折射而不损失光能量
3.4超高效液相色谱的自动进样器
配备了针内进样探头和压力辅助进样技术;
(5)仪器整体系统优化设计:色谱工作站配 备了多种软件平台,实现超高效液相分析方法与 高效液相分析方法的自动转换。
分析速度快
超高 效液 相色 谱的 优点
灵敏度高
分离度好
UPLC的速度提高了!
0.24 1. Thiourea2. 0.046 - 0.088 - toluene 3. propylbenzene - 0.137 4. butylbenzene - 0.182 5. hexylbenzene - 0.360
稳定性试验的条件:
从10到90%甲醇的1分钟梯度1000次进样 C 温度:55º 最大压力:8500psi 流速:1.3ml/min.
0.35 0.30 0.25 AU 0.20 0.15 0.10 0.05 0.00 0.00 0.25 0.50 0.75 Minutes 1.00 1.25 1.50 1.75
超高效液相色谱
目录
1 绪论
2
理论基础
3 4
仪器介绍 应用和展望
1.绪论
超高效液相色谱的发展
站在当今世界科技前沿的液相色谱用户现在又有了新的
需求。首先是改进生产力的需求,因为大量的样品需要在很
短的时间内完成;其次是在生化样品及天然产物样品的分析 中,样品的复杂性对分离能力提出了更高的要求;第三是在 与质谱等检测技术联用时,也提出了更高的要求。 因此,对液相色谱技术的要求也不断提高,单从技术
针内针装置
减少死体 积,降低谱 带扩展 快速自动 取样 低扩散、 低交叉污染 外针刺破密封,内针插入样品容器底部吸取样品可 达到微量取样(µL取样)
4.1 超高效液相色谱的应用
药物分析 如天然产物中复杂组分的分析
生化分析 如蛋白质、多肽、代谢组学等生化样品 食品分析 如食品中农药残留的检测 环境分析 如水中微囊藻毒素的检测 其他
接件,可在超过 140MPa压力下 装填,保证色谱 柱高柱效和长寿 命。
可记录进样次数、最大反 压及温度
智能芯片自动下载关键参
数到色谱柱历史文件 信息不可删除
含有该色谱柱独特的分析
证书 eCord 装置
3.2 超高效液相色谱的输液系统
3.2.1 二元溶剂管理系统
高压混合 二元梯度 四溶剂选择 在线脱气 低扩散设计 耐高压
UPLC ™
Time 70.00
0 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00 45.00 50.00 55.00 60.00 65.00
4.2 超高效液相色谱的展望
UPLC可以更快的速度和更高的质量完成以往HPLC的工
作,为用户节省宝贵的时间和日常溶剂消耗,从而获得最
先进的MS入口技术 - 代谢物ID
H031218A_RP_ESI+_002A 100
32.16 49.81 23.73 30.48 34.67 34.92 28.57 26.93 37.25 38.56 48.40 52.71 56.30 57.64 59.05 65.56 63.36
1: TOF MS ES+ TIC 1.29e5
3.2.2 UPLC超高压输液泵的特性
与普通HPLC
的高压梯度
系统相比, UPLC的梯度
性能极佳
当梯度陡度为1%,梯度范围为90%-100%时,超高压输液 泵的梯度运行曲线
UPLC的重现性
其精确度、
可靠的梯
度性能与 HPLC的
重现性不
相上下
UPLC 34次进样分析烷基芳酮混合物保留时间的重现性
UPLC的耐受性
UPLC
2. toluene - 1.034
™
3. propylbenzene - 1.742 4. butylbenzene - 2.413
HPLC
样品的组份数:5 5µm颗粒度 完全分离时间:6.00分钟
5. hexylbenzene - 5.058
0.20
0.16
0.12
0.08
0.04
0.00
Minutes
恒定柱长时;UPLC™的灵敏度提高1.7倍(170%)! 恒定L/dp时;UPLC™的灵敏度提高三倍(300%)!
0.050 0.040 0.030 AU
0.020 0.010
0.000 0.050 0.040 0.030
5.0 µm
0.020 0.010 0.000 0.00 0.024 0.020
3.1 超高效液相色谱的C18色谱柱
固定相粒度 直径可达
dp
1.7µm 色谱柱长可 达3-5cm
3.1.1 色谱
改善了低pH稳定性
在杂化的碳-硅基质内具有桥式乙烷的1.7µm颗粒 三官能团键合C18配体
3.1.2 色谱柱硬件
筛板、柱管和连
大的投资回报。
UPLC的高分离度可从容面对复杂组份(如蛋白质与代谢 组学等生化领域、天然产物)分离的挑战。
UPLC的高灵敏度可检测更加痕量的目标化合物。 UPLC的快速分析大量样品,实现高通量。