0.9 0.8 0.7
a
A
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 220
A
b
240
260

280
300
320
(nm)
三氯苯酚（a）和苯酚（b）的紫外吸收曲线
a Aa b ' A1a' A2 ' a (k1a k 2 ) ca
k a ca
Aa b ' Aa b ' ca a a k1' k2' k a
注：须满足两个基本条件 • 选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点
• 选定的两个波长下待测物的吸光度差值应足够大
特点：
使用时来回拉动吸收池 →移动误差 • 对光源要求高 • 比色池配对
•
图4
单光束分光光度计基本结构示意图
特点：
不用拉动吸收池，可以减 小移动误差 • 对光源要求不高
• •
可以自动扫描吸收光谱
图5 双光束分光光度计结构示意图
特点： •
•
利用吸光度差值定量 消除干扰和吸收池不 匹配引起的误差
消除a的影响测b
a 选 a 的等吸收点1和2 A1a A2
A
a b
A A
b 1
b 2
b (k1b k 2 ) cb
kb cb Aa b Aa b cb b b k1 k2 k b
消去b的影响测a
b 选 b 的等吸收点1' 和2' A1b' A2 '
a b a A2 k2 ca cb b k2
3．两组分吸收光谱完全重叠——混合样品测定
（1）解线性方程组法 （2）等吸收双波长消去法
（1）解线性方程组法
步骤：
a b a b 测定 k 和 k ； A 1 1 1 1 b a b 2 测定k 2a 和k 2 ；A2
a b a A2 k1a A1a b k 2 cb a b a b k1 k2 k 2 k1
（2）等吸收双波长法
a b a b A A A 步骤： 1 1 1 a b a b A2 A2 A2
a b a b Aa b A1a b A2 ( A1a A2 ) ( A1b A2 ) Aa Ab
图6 双波长分光光度计结构示意图
四、定量分析方法
多组分的定量方法
定量依据：A总 Aa Ab Ac
三种情况：
1．两组分吸收光谱不重叠（互不干扰） 两组分在各自λmax下不重叠→分别按单组分定量
过程：1 测定k1a ；A1a
b b 2 测定k2 ；A2
b A b b 2 由A2 k2 cb cb b k2
A1a b A1a A1b k1a ca k1b cb
a b a b a b A2 A2 A2 k2 ca k2 cb
b a b A1a b k 2 A2 k1b ca a b a b k1 k 2 k 2 k1
色散元件
3．吸收池： 玻璃——能吸收UV光，仅适用于可见光区 石英——不能吸收紫外光，适用于紫外和可见光区 要求：匹配性（对光的吸收和反射应一致）
光电池 光电管 光电倍增管 二极管阵列检测器
4．检测器：将光信号转变为电信号的装置
5．记录装置：讯号处理和显示系统
光源
单色器
样品池
记录装置
检测器
图3 分光光度计构造方框图
紫外-可见分光光度法
三氯苯酚存在时苯酚含量的测定
一、实验目的
学习紫外吸收光谱法的基本原理； 了解紫外分光光度计的基本结构及其操作
方法； 掌握等吸光度法消除干扰的原理和方法。
二、基本原理
Lamber-Beer定律：吸收光谱法基本定律
描述物质对单色光吸收强弱与液层厚度和待测物浓度的关系
Lamber定律： A l Beer 定律： A C
假设一束平行单色光通过一个吸光物体
I0 A lg KLc I K'c
图1 物质对光的吸收
三、仪器结构
图2 756CRT紫外分光光度计
1氢灯或氘灯——紫外光源 200~360nm 2．单色器：包括狭缝、准直镜、色散元件 棱镜——对不同波长的光折射率不同 分出光波长不等距 光栅——衍射和干涉 分出光波长等距
a A 由A1a k1a ca ca 1a k1
2．两组分吸收光谱部分重叠
λ1→测A1→b组分不干扰→可按单组分定量测Ca λ2→测A2→a组分干扰→不能按单组分定量测Cb
过程：1 测定k1a ；A1a
b a b 2 测定k2a和k2 ；A2
a A 由A1a k1a ca ca 1 a c1 a b a b a b 由A2 A2 A2 k2 ca k2 cb