二、免疫细胞功能测定
单核-吞噬细胞功能测定 T淋巴细胞功能测定 B淋巴细胞功能测定 NK细胞功能测定
（一）单核-吞噬细胞功能测定
巨噬细胞吞噬功能测定 巨噬细胞胞毒作用测定 中性粒细胞趋化功能测定 中性粒细胞吞噬、杀菌功能测定 ①中性
粒细胞噬菌试验② 硝基蓝四氮唑③化学发 光试验
（二）T细胞功能测定
免疫学检测技术
纲要
免疫细胞及其功能的检测 免疫分子的检测 免疫相关基因的检测 免疫学检测的临床应用
第一节 免疫细胞及其亚群的检测
免疫细胞及亚群的分离、鉴定与计数 单核-吞噬细胞功能测定 T淋巴细胞功能测定 B淋巴细胞功能测定 NK细胞功能测定
一、免疫细胞及亚群的分离、鉴定与计数
（二） 影响抗原抗体反应体系的因素
适宜的抗原抗体浓度和比例 反应时间 电解质 温度 酸碱度
（三）抗原、抗体检测的方法
沉淀反应 凝集反应 补体参与抗原抗体反应 免疫标记技术 蛋白质芯片技术
1. 沉淀反应
可溶性抗原与相应抗体在有适量电解质存在下，出现肉 眼可见的沉淀现象，称为沉淀反应。
T细胞功能的体内试验
迟发型超敏反应(DTH)： 结核菌素反应
（三） B淋巴细胞功能测定
B细胞增殖(转化)试验 溶血空斑形成试验 酶联免疫斑点法(ELISPOT)
溶血空斑试验
B
温育
+
浆B
1-3h
绵羊红细胞
+ 补体
B 有丝分裂原
浆
（四） NK细胞功能试验
放射性核素51Cr、125I-UdR释放法 乳酸脱氢酶释放法 形态学检测 化学发光法
（一）外周血单个核细胞的分离
根据比重的不同将血液离心分层
血浆 PBMC
分离液 多形核白细胞
红细胞
取PBMC
单核细胞吸附,未吸 附的为淋巴细胞.
玻璃平皿
免疫细胞数量与功能的是判断机体免疫功能状态的重要指标.
（二）淋巴细胞及其亚群的分离
免疫吸附分离法 磁珠分离法(immune magnetic bead，
T细胞介导的细胞毒试验
检测机体抗肿瘤、抗病毒免疫功能或移植排斥反应时可 应用T细胞介导的细胞毒试验，具体方法包括放射性核 素释放法、形态学检测法、流式细胞术等，其中放射性 核素释放法较为常用，基本过程是将51Cr 标记靶细胞， 用受检者外周血分离的单个核细胞与51Cr标记的靶细胞 按一定比例混合，37℃温育后用γ测量仪检测上清液中 51Cr的含量。靶细胞被杀伤的越多，上清中51Cr的含量 越多，由此推算出Tc杀伤活性的高低。
IMB) 流式细胞术(flow cytometry，FCM) 尼龙毛分离法 E花环沉降法 抗原肽-MHC分子四聚体技术
免疫吸附分离法： 利用表面标志分离 淋巴细胞亚群
Removal of T cells from marrow graft
Magnetic antibodies Magnet
（三）单核-吞噬细胞分离
体外：Percoll连续密度梯度离心法 平皿黏附法分离(阳性分选) 体内：斑蝥敷贴法等
（四）免疫细胞的计数
1. T细胞检测
间接免疫荧光法 免疫组织化学法 葡萄球菌花环法 微量细胞毒试验
2. B细胞检测
膜表面免疫球蛋白（mIg）检测 间接免疫荧光法 细胞亚群检测
溶 血 空 斑 实 验
酶联免疫斑点试验(enzyme-Linked immonospot assay，ELISPOT)
第二节 免疫分子的检测
抗原抗体的检测 补体的的检测 细胞因子及其受体的检测
一、抗原抗体的检测
抗原抗体检测的原理与基本特点 影响抗原抗体反应体系的因素 抗原、抗体检测的方法
T淋巴细胞增殖试验 T细胞介导的细胞毒试验 T细胞分泌功能测定 流式细胞术对T细胞功能的检测 T细胞功能的体内试验 ：包括接触性超敏反应、
移植物抗宿主反应(GVHR)、迟发型超敏反应 (DTH) 等
1. T淋巴细胞增殖试验
形态学方法 放射性核素掺入法 MTT法 抗TCRV等位基因片段产物检测法 CFSE标记技术
抗原抗体检测的原理与基本特点
基本特点 特异性和交叉反应 可逆性 可见性与带现象 反应的阶段性
可见性与带现象
抗原抗体结合出现可见反应具有一定的量比关系，当两 者分子比例合适时，抗体分子的两个Fab段分别与两个 抗原决定基结合，相互交叉连接成网格状复合体，形成 肉眼可见的反应物（沉淀物或凝集物） 前带现象（prozone）:抗体过剩 后带现象(postzone) :抗原过剩
T细胞功能检测
PHA
TLeabharlann 母ConA增殖
TT T
T细胞毒性试验
形态学测转化率
CTL +
-51Cr 靶
靶细胞溶解， 51Cr释放
测放射活性
淋巴细胞增殖实验： 放射性核素掺入法
T细胞增殖过程中，胞内DNA、RNA合成增加。 氚标记的胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）作为合成 DNA的原料，在淋巴细胞与有丝分裂原培养 终止前8～16小加入，3H-TdR被转化的细胞摄 入。培养结束后，用液体闪烁仪测定细胞内同 位素的相对含量，即代表淋巴细胞的转化能力。 同位素掺入法灵敏，结果客观，重复性好，但 需一定的仪器设备，若操作不规范，结果重复 性受影响，且存在放射性核素污染的危险。
1. 沉淀反应 2. 凝集反应 3. 补体参与抗原抗体反应 4. 免疫标记技术 5. 蛋白质芯片技术
（一）抗原抗体检测的原理与基本特点
抗原抗体检测的原理 抗原与相应抗体可发生特异性结合，并
在外界条件影响下出现肉眼可见或借助仪器 可检测的各种现象，如凝集或沉淀。借此可 用已知抗体（或抗原）检测未知抗原（或抗 体），因所采用的抗体常存在于血清中，故 称为血清学反应。
磁珠分离法
利用FCM技术进行细胞分选
抗原肽-MHC分子四聚体技术
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MHC抗原肽四聚复合物，作为TCR结合的亲合力配 体，借助亲和素-生物素结合的原理，通过流式细胞仪分选 获得高纯度的特异性T细胞克隆，结合分析细胞表面分子、细 胞内效应分子等，用于检测和分离特异性T细胞。