⒈ 破碎细胞，溶解DNA：
用提取液（裂解液）破坏细胞壁、细胞膜和核膜。
微生物样品提取液：含表面活性剂SDS、溶菌酶等 动物样品提取液：含SDS、蛋白酶K等 植物样品提取液：含CTAB
核酸酶可被Ca2+、Mg2+等激活，提取液均含有螯合剂（如EDTA， 柠檬酸等），螯合这些离子。
（SDS，破膜、蛋白质变性沉淀）——苯酚抽 提蛋白质——氯仿抽提、萃取苯酚
（二）复性 变性DNA在适当条件下，可使两条分开的单链重新形成双螺旋DNA
的过程称为复性（renaturation）。 当热变性的DNA经缓慢冷却后复性称为退火（annealing）。DNA
复性是非常复杂的过程，影响DNA复性速度的因素很多：DNA浓度高， 复性快；DNA分子大复性慢；高温会使DNA变性，而温度过低可使误配 对不能分离等等。最佳的复性温度为Tm减去25℃，一般在60℃左右。 离子强度一般在0.4mol/L以上。ຫໍສະໝຸດ 细胞DNA的提取过程：
裂解：破碎细胞，使细胞中的核酸游离 在裂解体系中
纯化：使核酸与其它杂质彻底分离， 如蛋白质、盐等
总原则：①应保证核酸一级结构的完整性；
②排除其它分子的污染。
鉴定：浓度、纯度、分子量、测序
（技术：分光光度技术、凝胶电泳技术等）
（一）样品预处理（获取分散细胞）
1、植物样品
新鲜组织先用无菌生理盐水洗； 干药材除去霉点，无菌水浸洗；
（二）基因 基因(遗传因子)是具有遗传效应的DNA片段，基因支持着生命的基
本构造和性能。
编码区：是可以被转录的区域 非编码区：不可以被转录的区域
密码子：遗传密码(英文：Genetic code)是一组规则，将DNA或RNA序 列以三个核苷酸为一组的密码子转译为蛋白质的氨基酸序列，以用于蛋 白质合成。 起始密码子为AUG(甲硫氨酸) ；终止密码子：UAA、UAG、UGA.
DNA样品：
OD260 / OD280 ＝1.8 ，DNA纯度高 OD260 / OD280 > 1.8，含RNA，或DNA部分降解 OD260 / OD280 < 1.8，含苯酚或蛋白杂质
热变性一半时的温度称为熔点或变性温度，以Tm来表示。 DNA的G+C含量影响Tm值。由于G≡C比A=T碱基对更稳定，因 此富含G≡C的DNA比富含A=T的DNA具有更高的熔解温度。根据 经验公式xG+C =（Tm - 69.3）× 2.44可以由DNA的Tm值计算 G+C含量，或由G+C含量计算Tm值。
核酸的降解:核苷酸间的磷酸二酯键的断裂
引起核酸变性的因素有：高温、强酸强碱 有机溶剂、尿素等
当呈双螺旋结构的DNA溶液缓慢加热时，其中的氢键便断开，双 链DNA便脱解为单链，这叫做核酸的“溶解”或变性。在适宜的 温度下，分散开的两条DNA链可以完全重新结合成和原来一样的 双股螺旋。这个DNA螺旋的重组过程称为“复性”。
捣碎或剪碎；加液氮研磨成粉状。
2、动物样品
（1）组织样品：
新鲜样品，生理盐水洗，直接使用（或分装、 -70℃/液氮低温保存）；
甲醛固定组织要先去掉甲醛；
石蜡包埋组织要经过组织切片和二甲苯脱蜡等处 理。
（2）血细胞样品： 来源：新鲜血液或者冻贮血液；
抗凝剂：一般用EDTA-Na2或柠檬酸钠（枸橼酸 钠 ），不可使用肝素；
经离心后溶液分为三层：上层是核酸溶液、 中间不溶物为变性蛋白质，下层是苯酚氯 仿溶液。
核酸溶液 蛋白质 苯酚氯仿
3.沉淀DNA
有机溶剂沉淀DNA：2倍体积无水乙醇（或1倍体积的异戊醇）
再用75%乙醇清洗多次。
4.重新溶解DNA
将DNA溶于水或TE溶液。
DNA提取的一般流程
二、核酸的鉴定
（一）核酸浓度检测
分离：红白细胞，一般用明胶，加缓冲液悬浮白细 胞。（血清DNA是研究肿瘤的材料之一）
（3）培养细胞： 离心，弃细胞培养液； 用缓冲液多次漂洗；
3、微生物培养物样品
离心获取菌体细胞， 加缓冲液洗涤， 加缓冲液悬浮菌体细胞。
4、微生物混合样品
用缓冲液悬浮菌体，低速离心，沉淀杂质。 高速离心获取菌体细胞。 用缓冲液洗涤菌体细胞。 加缓冲液悬浮菌体细胞。
2、核酸的溶解度与黏度
DNA与RNA都是极性化合物，都微溶于水，而不溶于乙醇、 乙醚、氯仿等有机溶剂。
DNA的黏度很大，当DNA溶液受热或其他因素作用下，发 生双螺旋结构变为无规则线团结构，此时黏度降低，因此可 用黏度做为DNA变性的指标。
3、核酸的紫外吸收 由于核酸的组成成分是嘌
呤碱、嘧啶碱（带有共轭双 键）具有强烈的紫外吸收， 所以核酸表现出强烈的紫外 吸收性质，其最大的吸收峰 在260nm。
1、DNA提取用具的处理
要求无菌；试剂、器材高压干燥等进行无 DNA酶处理。
2、RNA提取用具的处理
要求无菌，防止二次污染。 RNA易被RNase水解，RNase无处不在且 耐高温，提取条件要求严格。
二、真核生物基因组DNA的常规提取
裂解细胞，溶出DNA 除去杂质
沉淀、浓缩DNA 重新溶解DNA
OD260＝1时（比色皿厚度1.0cm） 双链DNA浓度为50 μg/ml， 单链DNA或RNA浓度为40 μg/ml。
DNA(μg/ml) = OD260×50 RNA（μg/ml ） = OD260×40
核酸在260 nm处有吸收峰，蛋白质在280 nm有吸 收峰
核酸的纯度用OD260/OD280比值表示。
核酸提取与鉴定
一、核酸的理化性质 核酸可分为核糖核酸(简称RNA)和脱氧核糖核
酸(简称DNA)。DNA是储存、复制和传递遗传信息 的主要物质基础。
1、核酸的酸碱性质
核酸含有酸性的磷酸基和碱性的含氮的碱基，因此核酸 是两性的电解质，具有等电点。
但磷酸基酸性相对较强，所以核酸通常表现为酸性。在 一定的pH下，核酸能发生两性电离，从而使得核酸带上电荷， 具有电泳行为。
3、增色效应(hyperchromic effect)是指因高分子结构的改变， 而使摩尔吸光系数增大的现象
核酸变性时，双螺旋结构被破坏，嘌呤碱、嘧啶碱暴露出来， 其紫外吸收能力增强。
4、核酸的变性、复性及杂交 核酸的变性:在物理和化学因素的作用下，维系核酸二级结构的 氢键和碱基堆积力受到破坏，DNA由双链解旋为单链的过程。