DNA粗提取与鉴定
注意：
1、鸡血细胞做实验材料，一是因为鸡血细胞核的 DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水 胀破。 2、预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水 解酶活性，防止DNA降解，二是降低分子运动，易 于形成沉淀析出，三是低温有利于增加DNA分子柔 韧性，减少断裂；
根据以上原理可设计提取和纯化DNA的方案：
１.取新鲜植物组织（菜花） 放置于冰箱中冷却1~2 天 ２.取30克植物组织,切碎, 置于研体中,倒入适量 洗洁精,加入适量的 NaCl,充分研磨10分钟 ３.过滤研磨液，取上清夜 置于冰箱中冷却几分钟 ４.取1倍体积的上清液， 加入2倍体积的95%的 冷酒精当中，用玻棒轻 轻搅拌，沉淀3~5分钟 后可见白色絮状DNA缠 绕于玻棒末端。 ５.DNA的提纯同鸡血细胞 为实验材料的实验操作 步骤6、7，具体数据有 一定的差异。 ６.鉴定
两种材料的DNA粗提取与鉴定过程
①释放组织细胞化， ④鉴定提取物是DNA
以鸡血为材料 以花菜为材料
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
2mol/L
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
5、过滤→取纱布上的滤物
总结：
实验原理
DNA
DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同 DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同 DNA与二苯胺呈现蓝色反应
的 粗 提 取 与 鉴 定
DNA粗提取
选择适宜材料
破碎细胞
DNA的溶解和析出
DNA的纯化
鉴定DNA
与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应
1. 下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是 A．氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大 B．人血也可代替鸡血进行实验 C．柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 D．DNA不能溶于酒精 2. 在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏水，其作用是 A. DNA溶解于水 B． 血细胞破裂，DNA释放 C．稀释血液，防止凝固 D． 有利于搅拌 3. 若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗 涤剂和食盐，加入食盐的目的是 A. 利于DNA的溶解 B. 分离DNA和蛋白质 C. 溶解细胞膜 D. 溶解蛋白质 4. 在DNA粗提取实验中，向在溶解DNA的NaCl溶液中，不断加 入蒸馏水的目的是 A．有利于溶解DNA B．有利于溶解杂质 C．减少DNA的溶解度 D．减少杂质的溶解度
方案一：30mL含DNA的滤液＋2mol/L NaCl→同方向搅拌，DNA溶解→加入蒸 馏水→DNA析出→过滤得到过滤物→放到 2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl溶 解液 方案二：30mL滤液＋嫩肉粉（木瓜蛋白 酶）→静置10～15分钟→DNA滤液 方案三：30mL滤液→60～75℃恒温保温 10~15分钟→过滤获得DNA滤液
6、再次溶解DNA
纱布过滤
取滤物
2mol/LNaCl溶液
鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图
7、加冷酒精使DNA析出（纯化） 冷酒精
DNA的鉴定
鸡血细胞
植物组织
１. 0.1g/ml的柠檬酸钠溶液,按1:2的比例与新鲜鸡血混 合搅拌均匀。 ２.将血液置于冰箱中24小时,弃上部澄清液 ３.取烧杯中的血细胞液约5~10ml加入到100ml烧杯中 ，向烧杯中加入20ml蒸馏水，用玻棒沿一个方向快 速搅拌5分钟，加速血细胞在低渗溶液中的破裂 ４.将2mol/L的氯化钠溶液50ml缓缓倒入烧杯中，用玻 棒沿一个方向搅拌，使DNA溶解于氯化钠溶液中 ，滤除杂质，获得粘稠状的鸡血细胞DNA提取液 ５.将鸡血细胞DNA提取液置于较大的烧杯中，沿烧杯 内壁缓缓倒入蒸馏水，并不断搅拌，直到粘稠状 DNA不再析出为止。用玻棒搅拌，使析出的DNA 缠绕于玻棒末端。 ６.将析出的DNA再溶解于2mol/L的氯化钠溶液中。 ７.在DNA的氯化钠溶液中倒入95%的酒精50 ml（冷 却过的酒精效果较好），使DNA再次析出，用玻 棒搅拌，使DNA再次缠绕于玻棒末端。 ８.DNA的鉴定：取两支试管，各加入2ml0.015氯化钠 溶液，将DNA溶解于其中一支试管中，另一支做 为对照组。然后，在两支试管内加等量的二苯胺试 剂，水浴加热10min左右，冷却，观察实验现象。