《病原微生物检验》教学大纲
供卫生检验专业用
一、课程基本信息
课程名称：病原微生物检验（Experimental Pathogenic Biology Technique）课程号：
课程属性：专业课
先修课程：病毒学检验、细菌学检验
学分：3
学时：72 理论学时：0 实验（实践）学时：72
二、教学目的要求
病原微生物检验是病毒学检验和细菌学检验的配套实验课程，是卫生检验重要的专业课程之一，也是卫生检验专业学生必修的考试课程。
实验内容包括病毒学检验和细菌学检验的基本技能、分离培养及鉴定技术、血清学技术，以及分子生物学技术。
通过实际操作训练，使学生加深对细菌学检验和病毒学检验基本理论、基本技能、检验方法、研究手段的理解和掌握，加深对常用分子生物学技术的认识和把握。
在教学过程中，注重对学生实验操作规范性培养、实验现象和结果分析能力的培养，以及实验报告撰写能力的培养，全面提高学生分析和解决实际问题能力。
三、实验方式及基本要求
实验方式：整个实验课程要学生自己完成，每2个学生为一个实验单位，共同完成所有的实验内容。
基本要求：熟悉实验步骤，掌握实验关键点和影响因素，能正确的判断和分析实验结果。
四、实验报告
实验报告包括：实验目的，实验原理，主要试剂和仪器，实验步骤，结果，结论，讨论。
五、实验项目与内容提要
实验1 动物接种技术及动物标本采集
1、动物接种：小鼠的腹腔接种、尾静脉接种、脑内接种以及灌胃
2、动物标本采集：胸腺、肝脏、脾脏、摘眼球取血
要求：熟悉动物实验常用的接种途径和标本的采集
实验2 鸡胚培养、原代细胞培养
1、原代细胞培养：选用10日龄的鸡胚，进行鸡皮成纤维细胞的培养。
2、病毒的鸡胚培养：选用9~10日龄的鸡胚，采用尿囊腔途径接种病毒。
要求：熟悉原代细胞培养及尿囊腔接种病毒的操作要点及影响因素。
实验3 传代细胞培养
选择生长良好的MDCK细胞，通过消化、分散、分装后进行培养。
要求：熟悉传代细胞培养的操作、要点。
实验4 流感病毒分离培养
在长成单层的MDCK细胞上，接种病毒后进行培养，显微镜观察细胞形态的变化，及细胞病变的类型。
要求：熟悉病毒的细胞培养的操作、要点，以及判断病毒感染细胞的程度。
实验5 血凝试验及血凝抑制试验
本实验包括一个单位血凝素的滴定、一个单位血凝素的确定和正式试验。
要求：掌握血凝效价、血凝抑制效价的判断，熟悉实验的影响因素和操作要点。
实验6 RT-PCR检测流感病毒
利用RT-PCR技术检测致病微生物致病基因，通过凝胶电泳观察结果。
要求：熟悉RT-PCR技术的操作要点、影响因素及凝胶电泳的结果观察。
实验7 病毒学检验讨论
利用所学病毒学检验知识对病毒性感染的案例进行分组讨论。
要求：了解突发公共卫生事件的相关知识，熟悉判断疾病的病原的要点。
实验8 抗菌药物最小抑菌浓度测定
完成某抗菌药物最小抑菌浓度的测定。
要求：熟悉抗菌药物最小抑菌浓度测定的操作步骤、试验结果的判断以及试验的注意事项。
实验9 消毒剂的定量杀菌试验
完成某消毒剂定量杀菌的最小杀菌浓度和最小杀菌时间的测定。
要求：熟悉消毒剂定量杀菌试验操作技术及结果计算方法。
实验10 细菌质粒的提取与鉴定
从细菌中提取质粒，并用琼脂糖凝胶电泳检测提取出来的质粒，在凝胶成像分析仪中成像，分析。
要求：熟悉质粒的概念，掌握碱裂解法提取质粒的原理、步骤和注意事项，熟悉琼脂糖凝胶电泳，学会使用凝胶成像分析仪。
实验11 病原性球菌分离鉴定
以金黄色葡萄球菌或溶血性链球菌为病原性球菌的代表，从模拟污染样品开始，完成细菌的增菌、分离、生化鉴定全过程。
要求：熟悉病原性球菌分离鉴定的操作步骤，以及结果判断。
实验12 致病性肠道杆菌分离鉴定
以沙门菌或志贺菌为致病性肠道杆菌的代表，从模拟污染样品开始，完成细菌的增菌、分离、生化鉴定和血清学分型。
要求：熟悉致病性肠道细菌分离鉴定的操作步骤，玻片凝集试验的基本要领，以及结果判断。
实验13 霍乱弧菌快速检验
以水弧菌代替霍乱弧菌，完成细菌快速检验，包括：动力观察、制动试验、染色镜检等。
要求：熟悉霍乱弧菌快速检验的目的和操作步骤。
实验14 肠产毒素性大肠杆菌的分离鉴定
从模拟污染样品开始，完成肠产毒素性大肠杆菌的增菌、分离、生化鉴定和毒素检测。
要求：熟悉肠产毒素性大肠杆菌的菌落特征、生化特性和毒素检测，掌握判断依据。
附：学时分配
六、教材
1. 李洪源主编：病毒学检验，人民卫生出版社，2006。
2.张朝武主编：细菌学检验，人民卫生出版社，2006。
七、参考书目
1. 张朝武主编：现代卫生检验，第一版，人民卫生出版社，2005。
2. 余倩、许欣主编：卫生微生物检验学细菌学分册，四川科技出版社，2003。
3. 王秀茹主编：预防医学微生物学及检验技术，人民卫生出版社，2002。
八、成绩评定
本实验课程以考核加考试的方式对学生学习成绩进行评定。
平时成绩（包括实验报告、考勤、实验操作、学习态度等）占70%，期末实验理论闭卷考试占30%。
系：卫生检验与检疫系
编写（修订）人：左浩江汪川
2014年2月12日。