Conclusion：After optimization, the sensitivity of this method is found to be very high, and it can reach the pg level.
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
洗去样品与带有HRP的抗原，加入显色液显色，当样品中抗原量越多， 代表酶标板内留下的带有HRP的抗原越少，显色也就越浅。
当需要侦测无法获得两种以上单一性抗体的抗原，或是不易得到足够
的纯化抗体以固著于孔盘上时，一般会考虑使用竞争法ELISA。
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
13
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
14
谢谢
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
15
7
2. Case 1 MV052结合活性方法开发
1
2
3
A
B
C
D
E
F
G
H
Coat Analyte Enzyme
PCSK9-Biotin 2000,3×
BSAT
PCSK9-Biotin 1000
mAb anti PCSK9 2000，3×
mAb anti PCSK9 2000，3×
PCSK9-Biotin 2000,3×
ELISA法在抗体检测中的应用
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
1
1. ELISA介绍
酶联免疫吸附测定enzyme linked immunosorbent assay（简写 ELISA）指将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上， 利用抗原抗体结合专一性进行免疫反应的定性和定量检测方法。
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
11
Design of seventh experiment
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12 Detec t
1. Coat: SA
A
mAb
anti 2. Analyte: PCSK9-
B
PCSK
9，
Biotin
C
100,5
D
×
3. Detect: mAb anti
洗去多余待测检体，加入另一种对抗原专一的抗体， 与待测抗原进行结合；
洗去多余未结合的抗体，加入带有HRP的二抗，与抗 体结合；
洗去多余未结合的二抗，加入显色底物显色，并终止， 读数。
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
5
1.2.2 间接法
间接法常用于检测抗体，一般之操作步骤为：
PCSK9
E
F
3. Enzyme: Goat anti
G
human IgG-HRP
H
Coat
SA,1000
500
250
125
4. coloration: TMB
Analy 500 250 125 te
Enzy me
1000
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
12
Result
5
2.5
1
Analyte
PCSK9-Biotin,1000
Enzyme
Goat anti human IgG-HRP ,1000
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
1. Coat: SA 2. Analyte: PCSK9-Biotin 3. Detect: mAb anti PCSK9 4. Enzyme: Goat anti human
6
1.2.3 竞争法
竞争法是一种较少用到的ELISA检测机制，一般用于检测小分子抗原， 其操作步骤为：
将具有专一性之抗体包被于酶标板上，完成后洗去多余抗体；
加入待测样品，使样品中的待测抗原与酶标板上的抗体进行专一性结 合；
加入带有HRP的抗原，此抗原也可与酶标板上的抗体进行专一性结合， 由于酶标板包被的抗体数量有限，因此当样品中抗原的量越多，则带 有HRP的抗原可结合的抗体就越少；
HRP 4. coloration: TMB
8
Result
Conclusion： PCSK9 and LDL R combination is weak.
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
9
Design of experiment
1
2
3
4
5
A
B
C
D
E
F
G
H
Coat SA,20 10
将已知抗原包被于酶标板上，完成后洗去多余抗 原。
加入待测样品，样品中若含有待测抗体，则其会 与酶标板上的抗原进行专一性结合。
洗去多余待测样品，加入带有HRP的二抗，与 待测抗体结合。
洗去多余未结合二抗，加入显色液显色，测定酶 标板中的吸光值（OD值），即可测量待测抗体 的含量。
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
2
1.1 原理
这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面， 并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗 体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。③ 酶与底物反应显色。
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
3
1.2 分类：
（一）双抗体夹心法 （二）间接法 （三）竞争法
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
4
1.2.1 夹心法
夹心法常用于检测大分子抗原，一般之操作步骤为:
将具有专一性抗体包被于酶标板上，完成后洗去多余 抗体；
加入待测样品，样品中若含有待测抗原，则其会与酶 标板上的抗体进行专一性结合；
IgG-HRP 5. coloration: TMB
10
Result
Conclusion：After the SA package board, the combination of PCSK9 and mAb did not receive the impact, you can further optimize the conditions .
Mab Venture Co. Ltd. Confidential
4
mAb anti PCSK9
1000 BSATБайду номын сангаас
1. Coat: PCSK9-Biotin and mAb anti PCSK9 2. Analyte: mAb anti PCSK9 and PCSK9-
Biotin 3. Enzyme: Goat anti human IgG-HRP and SA-