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1. 直接凝集：玻片和试管凝集 直接凝集： 2 间接凝集： 正相间接凝集和反向间接凝集。 间接凝集： 正相间接凝集和反向间接凝集 间接凝集和反向间接凝集。 补充介绍： 补充介绍： 3. 协同凝集：以SPA为载体的反向间接ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ集。 协同凝集： 为载体的反向间接凝集。 为载体的反向间接凝集 在微生物检测中常用。 在微生物检测中常用。 4. 间接凝集抑制试验： 间接凝集抑制试验：
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P232
生物素-抗生物素蛋白系统 （2） BAS-ELISA:生物素 抗生物素蛋白系统（biotin） 生物素 抗生物素蛋白系统（ avidin system, BAS）, 放大系统。 ） 放大系统。 （3）微粒捕获酶免疫分析技术：用于检测微量可溶性抗 ）微粒捕获酶免疫分析技术： 原。 (4) 酶免疫组化法： 酶免疫组化法： 对抗原进行定性、定量、定位检测。 对抗原进行定性、定量、定位检测。 3 放射免疫测定法： 放射免疫测定法： 敏感度可达pg水平 常用于检测微量物质， 水平。 敏感度可达 水平。常用于检测微量物质，如胰岛 素、生长激素、甲状腺素、吗啡、地高辛药物和IgE等。 生长激素、甲状腺素、吗啡、地高辛药物和 等
5 免疫比浊 （immunoephelometry） ） 在一定量抗体中分别加入递增量的 抗原，经一定时间形成IC，液体浑浊， 抗原，经一定时间形成 ，液体浑浊， 用浊度计测反应体系的浊度， 用浊度计测反应体系的浊度，据标准曲 线推算样品中抗原含量。 线推算样品中抗原含量。
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4 免疫电泳 （immunoelectrophoresis) 也是将电泳技术与双向免疫扩散结合的 一种技术，先电泳后双向免疫扩散（见图） 一种技术，先电泳后双向免疫扩散（见图） 。
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第三节 免疫细胞的测定
淋巴细胞是机体内主要的免疫细胞， 淋巴细胞是机体内主要的免疫细胞，检测其 数量和功能是了解机体免疫状态的重要手段。 数量和功能是了解机体免疫状态的重要手段。 一 淋巴细胞的分离 常用ficoll（淋巴细胞分离液）密度梯度离心 （淋巴细胞分离液） 常用 除去红细胞、 除去红细胞、粒细胞而获得外周血单个核细胞 ），再经吸附除去单核细胞而得到淋巴 （PBMC），再经吸附除去单核细胞而得到淋巴 ）， 细胞。若要分离T细胞 可用尼龙毛柱、 细胞， 细胞。若要分离 细胞，可用尼龙毛柱、抗CD3单 单 花结试验等分离。 抗、E花结试验等分离。 花结试验等分离
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1 单向免疫扩散 (single immunodiffusion) （1）特点：定性定量试验 ）特点： （2）用途：可用于测定血清 ）用途：可用于测定血清IgG,IgM,IgA和C3等的含量 和 等的含量 （3）原理：沉淀环的直径与抗原含量呈正相关。 ）原理：沉淀环的直径与抗原含量呈正相关。
（4）操作：铺板 ）操作： 打孔 加样 放湿盒 看结果。 看结果。
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2 双向免疫扩散 双向免疫扩散(double immunodiffusion) （1）特点：定性半定量 ）特点： （2）用途：用于抗原或抗体的定性检测、 ）用途：用于抗原或抗体的定性检测、 关性分析。 组成和多抗原相 关性分析。 （3）操作：铺板 ）操作： 打孔 加样 放湿盒 看结果 。
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（二）适宜的抗原抗体浓度和比例： 适宜的抗原抗体浓度和比例： 抗原、抗体比例适合时， 抗原、抗体比例适合时，在适宜的盐浓度下可形成肉 眼可见的反应物（凝集物或沉淀物）。 眼可见的反应物（凝集物或沉淀物）。 （三）抗原抗体反应的可逆性： 抗原抗体反应的可逆性： 抗原抗体之间的结合主要是分子表面的非共价键结合， 抗原抗体之间的结合主要是分子表面的非共价键结合， 稳定，但在适当条件（如低pH、高浓度盐、冻融等） 稳定，但在适当条件（如低 、高浓度盐、冻融等）下 可解离开，各自的生物学特性不发生改变。根据此特点， 可解离开，各自的生物学特性不发生改变。根据此特点， 可利用亲合层析法纯化抗原或抗体。 可利用亲合层析法纯化抗原或抗体。
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2. 免疫酶测定： P231 免疫酶测定： 是将抗原抗体反应的特异性与酶催化作用的高效性 相结合。敏感度可达1ug/L,甚至 甚至1ng/L。常用的标记物 相结合。敏感度可达 甚至 。 有辣根过氧化物酶（ 有辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）等。 ）和碱性磷酸酶（ ） 常用酶联免疫吸附试验（ 常用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA）测定可溶性抗原或抗体， ）测定可溶性抗原或抗体， 用酶免疫组化法测定组织中或细胞表面的抗原。 用酶免疫组化法测定组织中或细胞表面的抗原。
（1）直接法：缺点是每检查一种抗原必须制 ）直接法： 备相应的荧光抗体。 备相应的荧光抗体。 （2）间接法：敏感性比直接法高，制备一种 ）间接法：敏感性比直接法高， 荧光二抗可用于多种抗原的检查， 荧光二抗可用于多种抗原的检查，但非特 异性增多。 异性增多。
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补充介绍） 对流免疫电泳试验 （补充介绍） 其实质是将双扩与电泳相结合。 其实质是将双扩与电泳相结合。 1）特点： （1）特点：定性试验 （2）用途：主要用于病原微生物抗原的 ）用途： 定性检测。 定性检测。 （3）操作：铺板 ）操作： 打孔 加样 电泳 看结果 。
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免疫学诊断即用免疫学检测技术确定疾病相关因子、 免疫学诊断即用免疫学检测技术确定疾病相关因子、 即用免疫学检测技术确定疾病相关因子 监测疾病过程、判断疗效及预后， 监测疾病过程、判断疗效及预后，涉及对疾病相关因子 的诊断和辅助诊断，以及检测机体免疫功能状态。 的诊断和辅助诊断，以及检测机体免疫功能状态。 第一节 体外抗原抗体结合反应的特点及其影响因素
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免疫酶标记技术
（1）ELISA: ） 双抗体夹心法： ① 双抗体夹心法：用于检测可溶性的特异 性抗原。 性抗原。 操作基本步骤： 操作基本步骤：用已知抗体包板 洗 涤 封板 洗涤 加入待检标本 洗涤 加酶标抗体 洗涤 加底 结果观察。 物显色 结果观察。
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3 酸碱度：最适pH6～8，否则可出现假阴 酸碱度：最适 ～ ， 或假阳性结果 4 抗原和抗体性质：抗体的特异性和亲和 抗原和抗体性质： 力是关键，初次应答抗体亲和力低， 力是关键，初次应答抗体亲和力低，单 克隆抗体亲和力低；抗原理化性质、 克隆抗体亲和力低；抗原理化性质、抗 原表位多寡等。 原表位多寡等。
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（四）抗原抗体反应分两个阶段 二、抗原抗体反应的影响因素： 抗原抗体反应的影响因素： 1 温度：适当的温度可增加抗原与抗体分子碰 温度： 撞的机会， 加快二者结合速度。不宜过高过低。 撞的机会， 加快二者结合速度。不宜过高过低。 2 电解质：可使IC复合物失去电荷而凝聚，出 电解质：可使 复合物失去电荷而凝聚 复合物失去电荷而凝聚， 现可见反应。常用生理盐水稀释抗原或抗体。 现可见反应。常用生理盐水稀释抗原或抗体。
（三）免疫标记技术 P232 用荧光素、 用荧光素、酶、放射性核素等标 记抗原或抗体后进行抗原抗体反应。 记抗原或抗体后进行抗原抗体反应。 提高检测灵敏度、快速、可定性、 提高检测灵敏度、快速、可定性、定 定位等。 量，定位等。
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免疫荧光标记技术 1 免疫荧光法 可对标本中的抗原进行鉴定和定位。 可对标本中的抗原进行鉴定和定位。常用 的荧光素有FITC和PE，前者发黄绿色荧光， 的荧光素有 和 ，前者发黄绿色荧光， 后者发红色荧光。 后者发红色荧光。
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免疫印迹法： 免疫印迹法：P233 又称Western-blotting，用于蛋白 ， 又称 质检测。是将凝胶电泳与固相免疫结合， 质检测。是将凝胶电泳与固相免疫结合， 把电泳分区的蛋白质转移到固相载体后， 把电泳分区的蛋白质转移到固相载体后， 再用酶免疫、放射免疫等技术测定。 再用酶免疫、放射免疫等技术测定。常 可检测多种病毒的抗原或抗体。 可检测多种病毒的抗原或抗体。见P234
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抗原或抗体的检测方法
（二）沉淀反应（precipitation)： 沉淀反应（ ： 血清蛋白质、 血清蛋白质、细菌裂解液或组织浸液等可溶性抗原 与相应抗体结合后，在有电解质存在时， 与相应抗体结合后，在有电解质存在时，出现肉眼可见的 沉淀物的反应。 沉淀物的反应。
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免疫酶标记技术
间接法：检测特异性抗体。非特异性增加。 ② 间接法：检测特异性抗体。非特异性增加。 基本步骤： 基本步骤：用已知抗原包板 标本 观察结果。 观察结果。 加酶标二抗 加入待检 加底物显色
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第二十二章
免疫学检测技术的基本原理