1:8
1:16
Ag
Ab
扩散
免疫学检测技术基本原理
15
免疫学检测技术基本原理
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３、免疫电泳 （immuno electrophoresis)
+
-
标本先电泳
**** **** ****** **** ***** ***
两侧挖槽加Ab孵 育后出现肉眼可
见沉淀
免疫学检测技术基本原理
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免疫学检测技术基本原理
抗体直接结合所出现的凝集现象 ：
（1）玻片法—定性试验：已知 Ab 未知 Ag(?) ABO血型鉴定， 细菌种属抗原型别的鉴定
+
免疫学检测技术基本原理
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（2）试管法—半定量试验： 诊断伤寒副伤寒的“肥达氏反应”
病人血清 倍比稀释
伤寒细菌悬液
1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 1:64 对照
1、免疫荧光技术
（immunofluorescence techniques）
利用荧光素标记抗体或抗抗体以检测细胞表面或 细胞内抗原的技术。
免疫学检测技术基本原理
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1、免疫荧光技术 （immunofluorescence techniques）
直接法
间接法
免疫学检测技术基本原理
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免疫学检测技术基本原理
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间接免疫荧光检测自身抗核抗体
免疫学检测技术基本原理
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2、免疫酶标技术： 免疫酶标技术：酶联免疫吸附试验 （enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）
用酶标记Ab(或Ag)与标本中的Ag(或Ab)发生 特异性结合
加入酶的底物，在酶作用下产生有色物质 根据颜色可作出判断或测量光密度值
免疫学检测技术基本原理
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4.免疫胶体金标记技术
(immunologic colloidal gold signature，ICS)
胶体金颗粒表面带有较多电荷，用胶 体金颗粒标记抗体，检测组织或细胞标 本中的抗原。
免疫学检测技术基本原理
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常用方法：胶体金斑点渗滤试验 胶体金斑点免疫层析试验
B
Ag –Ab
复 合 物
Ag浓度
免疫学检测技术基本原理
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抗原与抗体的种类：
抗原的类型：
颗粒性抗原：细胞，细菌，人工微球/珠 可溶性抗原：细胞成分，蛋白分子，小分子化合
物
免疫学检测技术基本原理
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抗体的类型：
多克隆抗体(抗血清): 识别多个表位，特异性
差
单克隆抗体：识别单个表位， 特异性好
免疫学检测技术基本原理
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一、免疫细胞的分离： （一）外周血单个核细 胞（PBMC）的分离： 方法：密度梯度离心法 分离液：聚蔗糖泛影葡 胺 （比重：1.077 ±0.001）
稀释 全血
免疫学检测技术基本原理
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含抗人IgG琼脂 制成平板
标准人IgG不同浓度
待测血样(IgG浓度?)
制作标准曲线
待测样品结果
免疫学检测技术基本原理
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2、双向免疫扩散(double immunodiffusion)： ----定性检测Ag或Ab ； Ab效价滴定
Ag Ab
扩散
1:2
1:64
1:4
1:24
抗-抗体（二抗）：抗异种Ig的抗体
免疫学检测技术基本原理
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二、抗原或抗体的检测方法
（一）凝集反应：（agglutination） 颗粒性抗原（或可溶性抗原吸附在与
免疫无关的载体上）与相应抗体在适当条 件下形成肉眼可见的凝集小块。
免疫学检测技术基本原理
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1、直接凝集反应： 天然颗粒性抗原（细菌或细胞）与相应
D
TC
A
免疫学检测技术基本原理
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第二节 免疫细胞测定
一、淋巴细胞的分离与类型鉴定 外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC)包括淋巴细胞和单核细胞。
红细胞和多核白细胞密度：为1.092左右， 淋巴细胞和单核细胞密度：1.075～1.090， 血小板密度：1.030～1.035。 聚蔗糖－泛影葡胺(Ficoll):1.077±0.001
（二）可见性：Ab与Ag的比例合适 形成肉眼可见聚合物。
阶段性：特异性结合阶段：几秒~几分钟
可见反应阶段： 几分钟~几小时~几十小时
免疫学检测技术基本原理
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影响抗原抗体反应的主要因素：
▪ Ag与Ab的浓度、 比例
▪电解质: 0.85%NaCl
▪温度: 370C
▪酸碱度: pH=6-8
前带
等价带
后带
第二十二章 免疫学检测 技术的基本原理
免疫学检测技术基本原理
1
主要内容
抗原和抗体的体外实验 免疫细胞功能的测定
免疫学检测技术基本原理
2
免疫学检测技术： 运用免疫学原理设计的检测方法 可用于： 诊断免疫相关性疾病 探讨发病机制 监测病情和治疗效果
免疫学检测技术基本原理
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第一节 抗原或抗体的检测
免疫学检测技术基本原理
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2、间接凝集反应：
+
+
—载体：红 血 球： 间接血凝试验
免疫学检测技术基本原理
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（二）沉淀反应 (precipitation) ：
可溶性性抗原与相应抗体直接结合，在 适当条件下形成肉眼可见的沉淀现象（沉淀 线）。
1、单向免疫扩散(radical immunodiffusion)： 可定量检测Ag
免疫学检测技术基本原理
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（1）双抗体夹心法：
+
+
+
免疫学检测技术基本原理
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（2）间接法
+
+
+
免疫学检测技术基本原理
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免疫学检测技术基本原理
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3、放射免疫测定
（radio immunoassay，RIA）：
利用放射性同位素标记技术检测抗 原的技术
灵敏度高，用于检测激素等血清中 微量物质
抗原抗体的检测方法
= 血清学方法（血清学反应，serological reaction）
• 用已知 Ag 检测未知 Ab(?)
• 用已知 Ab 检测未知 Ag(?)
对感染性疾病的诊断：
感染早期：查病原体（抗原） 感染晚期：检测特异性抗体
免疫学检测技术基本原理
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一、抗原抗体反应的原理：
（一）特异性：Ag（表位）与Ab(CDR)的结合 可逆性：非共价键结合
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4、火箭电泳：单扩试验 + 电泳 可定量分析
免疫学检测技术基本原理
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5、免疫比浊：
Ag ＋ Ab Ag-Ab（免疫复合物） 比浊仪 测量 浊度 ， 计算抗原含量 目前替代 单扩测量血清Ig
免疫学检测技术基本原理
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（四）免疫标记技术
－用标记抗体或抗原进行抗原抗体反应：
利用荧光素、酶、放射性同位素以及胶 体金标记抗体，以检测相应抗原的技术