当前位置:文档之家› 培养基母液配制Word版

培养基母液配制Word版

培养基母液配制
培养基配制通常先根据各组分性质,配制成较浓的母液(母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍),贮存在冰箱中备用,以后配制培养基时根据用量量取。

由于培养基成分较多,如果每配制一次即进行多次称量(不少成分用量较微),不仅会造成较大的误差,而且会增加工作量,因而配制母液可使培养基配制方便准确。

配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍,倍数不宜过高。

MS培养基母液及培养基配方法参考表2。

大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存,以免长期贮存发生沉淀。

若将全部大量成分配在一起时,为防止在混合时发生沉淀,须在各药品充分溶解后,按表1.2中化合物出现顺序混合,氯化钙最后加入,以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后,在1000 ml容量瓶中定容,然后移入磨口瓶中,贴上标签,置于普通冰箱(4℃)贮存。

微量元素母液配制时,由于培养基中微量元素用量甚微,浓度为
0.l~0.0001mg/l,所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。

一般将微量元素分别称量溶解,定容在1000 ml容量瓶中后贮存在一个细口瓶中,但也有将KI分别配制,单独贮存在棕色瓶中。

配好后,贴上标签,贮存于4℃冰箱。

培养基中的铁盐母液一般单独配制。

目前常用的铁盐为硫酸亚铁和乙二胺四乙酸二纳的螯合物。

称取Na2-EDTA 3.73 g,FeSO4 ·2H2O 2.78 g,分别溶解(可加热),然后混合定溶于1000 ml容量瓶中。

转入细口瓶,贴上标签,4℃冰箱中保存。

氨基酸和维生素等有机成分母液可配制时,母液浓度通常为原培养基配方的50倍(或100)。

常用氨基酸和维生素为水溶性物质,可用蒸馏水溶解,但叶酸要先用少量稀碱或稀氨水溶解,然后用重蒸馏水定容。

配制好后,转入细口瓶,贴上标签,-20℃(或4℃)冰箱中保存。

植物生长调节物质如生长素类和细胞分裂素类可以根据需要,灵活设计其浓度,一般为 0.01、0.1、0.2、0.5或1 mg/l。

如配0.5 mg/l NAA母液,称25 mg NAA溶于50 ml重蒸馏水,或50 mg的NAA定溶于100 ml重蒸馏水中。

IAA要用棕色瓶暗中贮存,以免光照分解。

常用植物生长调节物质和维生素特征见表3。

生长素为醇溶性物质,配制时,应用少量95%酒精或稀碱溶解,然后用重蒸馏水溶解定容;细胞分裂素应先用少量1 N NaOH或HCl溶解,然后用重蒸馏水定容。

配制好的母液放置在4
℃普通冰箱中备用。

这些母液保存时间不宜过长,当出现沉淀、浑浊及霉菌团时,应重新配制。

椰乳中因含有许多种细胞分裂素物质,如KT类似物
(9-β-D-ribofuranosylzeatin)、玉米素及玉米素核糖甙等,有时可与细胞分裂素相互代替。

采集到椰子时,应检查其汁液(保证没有变质),煮沸,滤纸过滤掉蛋白,高温高压消毒,贮存在-20℃下备用。

有时可直接加入培养基。

酵母提取液也一般也现用现配,称量酵母粉后,加热至沸腾30分钟,过滤去渣。

MS培养基的有机成分有甘氨酸、肌醇、烟酸、盐酸硫胺素和盐酸吡哆素。

培养基中的有机成分原则上应分别单独配制。

配制直接用蒸馏水溶解,定容至1L,注意称量时用电子分析
好,而另一些植物组织在光亮处生长较好,但由愈伤组织分化成器官时,则每日必须要有一定时间的光照才能形成芽和根。

有些次生物质的形成,光是决定三因素。

(三)渗透压:渗透压对植物组织的生长和分化很有关系。

在培养基中添加食盐、蔗糖、甘露醇和乙二醇等物质可以调整渗透压。

通常1~2个大气压可促进植物组织生长,2个大气压以上时,出现生长障碍,6个大气压时植物组织即无法生存。

(四)酸碱度:一般植物组织生长的最适宜pH为5~6.5。

在培养过程中pH可发生变化,加进磷酸氢盐或二氢盐,可起稳定作用。

(五)通气:悬浮培养中细胞的旺盛生长必须有良好的通气条件。

小量悬浮培养时巨常转动或振荡,可起通气和搅拌作用。

大量培养中可采用专门的通气和搅拌装置。

(注:可编辑下载,若有不当之处,请指正,谢谢!)。

相关主题