鉴别受体细胞中是否含有
目的基因 ，从普通细胞中
筛选出含目的基因的受体
细胞
.
10
重组质粒形成过程:
（1）用一定的_限__制__酶____ 切割质粒，使其出现一个 切口，露出__黏__性__末__端____。 （2）用_同__一__种__限__制__酶____ 切断目的基因，使其产生
相同__的__黏__性__末__端__。
2.DNA连接酶——“分子缝合针” 1)、种类： E·coli DNA连接酶（黏性末端）
T4 DNA连接酶 （黏性末端和平末端）
2)、作用部位：磷酸二酯键
DNA连接酶可把平未端或黏性末端之间的缝隙 “缝合”起来，即相当于把梯子两边的扶手的断口 连接起来，这样一个重组.DNA分子就形成5了。
3.分子运载车——运载体 （1） 作用： 将目的基因送入受体细胞
目的基因是否表达：方法: 抗原抗体杂交
鉴定—— 抗虫性鉴定、抗病性鉴定、生 物活性鉴定等（生理、性状水
平的检测）
.
14
转基因生物
转基因生物是指利用 基因工程 技术导
入
培外育源出基的因能够将新性状稳定地
给后代的 遗传
生物。 基因工程
打破了常规育种难以突破的
优
，
点： 物种的之间改的变界了限生(生物殖的隔遗离传)性状.
新生物类型、生物产品
.
3
重难点剖析: 基因工程的“专用工具”
1.限制性核酸内切酶 黏性末端
EcoRI
来源：主要从原核细黏胞性分末离端 作用：一种限制性内切酶只能识别双链DNA分子的某
种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部 位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开（切割 作用结果DN：A形分成子平）未端（Sm. aI）及黏性未端（4EcoRI）
法、直接合成法） 3、 PCR反应扩增DNA
原理：DNA复制
过程：加热DNA解链 冷却引物结合到互补DNA 链 互补链合成
.
8
条件 ：耐高温DNA聚合酶基因的构建：提取某种生物的全部DNA 用适当的限制酶切
一定大小的DNA片段
将DNA片段与载体连接 导入受体菌中储存
某种生物的mRNA
逆转录
单链互补DNA
DNA连 接酶
连接磷酸二酯键
种类
E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶
结构简单,大小适中
运载 工具
具备的 条件
能在宿主细胞中自 我复制并稳定存在 具一个或多个限制酶切位点 具标记基因
质粒、. λ噬菌体衍生物、7动植物病毒
基本操作步骤
（一）目的基因的提取
目的基因：主要是指_编__码__蛋__白__质__的__结__构__基__因。 获取方法： 1、_从__基__因__文__库___中获取目的基因 2、人工合成法：化学方法合成DNA片段（反转录
双链cDNA片段 与载体连基因表达载体构建
1、基因表达载体由__启__动_子___、_目__的_基__因__ __终__止__子__、标__记_基__因 四部分组成。
2、启动子作用：RNA聚合酶识别和结合的位点，
启动转录的“开关”。
3、标记基因的作用：
定向
.
15
基因工程的应用
（一）植物基因工程硕果累累:
1.抗虫转基因植物 2. 抗病转基因生物 3.抗逆转基因作物 4.利用转基因改良植物的品质
方法:
.
16
（二）动物基因工程前景广阔 利用转基因动物生: 产药物--动物乳腺生物反应器
获取目的基因 （药用蛋白基因）
构建基因表达载体 （在药用蛋白基因前 加乳腺蛋白基因的启
导入微生物细胞：
Ca2＋处理法
.
12
将目的基因导入微生物细胞
原核生物繁殖快、多为单细胞、遗 传物质相对较少，故早期常作为受体 细胞。
大肠杆菌细胞 用Ca2+处理 感受态细胞
重组表达载体DNA 溶于缓冲液
.
导入 混合
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（四）目的基因的检测与鉴定
目的基因是否插入转基方法: DNA分子杂交 因生物染色体的DNA上 检测 目的基因是否转录：方法: 分 子 杂 交
（2） 具备的条件：
a.能自我复制.
b.具有一个或多个酶切位点. c.有标记基因. d.对受体细胞无害.
（3）种类： 质粒、噬菌体、动植物病毒
质粒——细菌拟核DNA之外结构简单、
能自主复制的很小的环状DNA分子。
.
6
பைடு நூலகம் 小结
基因工程 的工具
限制酶
主要存在于原核生物中 具有专一性(识别序列) 切开DNA分子的磷酸二酯键
（3）将切下的目的基因片段插入质粒的__切__口__处， 再加入适量______D_N_A_连__接，酶形成了一个重组DNA分子
（重组质粒）
.
11
（三）将目的基因导入受体细胞
受体细胞 导入方法 农杆菌转化法
导入植物 细胞： 体细胞 受精卵 基因枪法 花粉管通道法
导入动物 细胞： 受精卵 显微注射法
2、基本工具： “分子手术刀”:限制性核酸内切酶
“分子缝合针”:DNA连接酶
基因进入受体细胞的载体: 运载体
3、基本操作步骤：
1、目的基因的获取
2、基因表达载体的构建（核心）
3、将目的基因导入受体细胞
4、目的基因的检测与鉴. 定
2
基因拼接技术或DNA重组技术
生物体外
基因
DNA分子水平
剪切 → 拼接 → 导入 → 表达 基因重组
（三）、基因工程药品异军突起:
工程菌：用基因工程的方法，使外源基因得到高效率表
达的菌类细胞株系。
我国已生产的产品：白细胞介素-2、干扰素、乙肝疫苗等
.
18
（四）基因诊断与基因治疗:
基因诊断：用放射性同位素
等标记的“DNA探针”检测 肝炎病毒等病毒感染及遗传缺 陷，不但准确而且迅速。
动子）
显微注射导入 哺乳动物受精
卵中
形成早期 胚胎
将胚胎送入母体动 物
发育成转基因动物（只有在产下的雌性动物个体 中，转入的基因才能表达）
.
17
用转基因动物作器官移植的供体
供体动物：猪
存在的难题：免疫排斥
解决方法：将供体基因组导入某种基因调节因子，以抑
制抗原决定基因的表达，或设法除去抗原决 定基因，再结合克隆技术，培育出没有免疫 排斥反应的转基因克隆猪器官。
基因工程概念
基因工程是指按照人们的意愿，进行 严格的设计，并通过体外DNA重组和 转基因等技术，赋予生物以新的遗传特 性，从而创造出更符合人们需要的新的 生物类型和生物产品。
由于基因工程是在DNA分子水平上进 行设计和施工的，因此又叫做DNA重 组技术
定向改造生物啦！
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1
基因工程相关要点
1、基因工程又叫做_基__因_ 拼接技__术_或D__N_A__重__组__技_ 术。