核酸分子杂交试题一. 名词解释:1. 核酸分子杂交2. DNA复性3. Southern杂交4. Northern杂交5. 斑点印迹6. 原位杂交二. 单项选择题:1. 在加热或紫外线照射下，可导致两条DNA链中间的氢链断裂，而核酸分子中所有的共价键则不受影响的称为（）。

A. DNA变性B. DNA复性C. DNA重组D. DNA杂交2.DNA变性的本质是（）的断裂。

A. 盐键B. 氢键C. 离子键D. 共价键3. 一般影响核酸变性的温度可选在（）。

A. 60—70℃B. 70—80℃C. 80—90℃D. 90—100℃4. 在核酸分子杂交时，一般对应温度作图得到的DNA复性曲线所用的紫外吸收值是（）。

A. A260吸收值B. A280吸收值C. A320吸收值D. A360吸收值5. 进行核酸分子杂交时，一般适宜的探针浓度是（ B ）。

A. 0.1μgB.0.1—0.5μgC.0.5--1μgD.1.0—1.5μg6.杂交时如果使用单链核酸探针，随着溶液中探针浓度的增加，杂交效率也会增加，所以探针长度控制在（）。

A. 50—300bpB. 20—200bpC.300—400bpD.200—5007.进行核酸杂交时，一般适宜的复性温度较Tm值低（）。

A.10℃B.15℃C.20℃D.25℃8.寡核酸探针杂交反应一般在低于Tm值（）下进行。

A.5℃B.10℃C.15℃D. 25℃9. 下列哪种试剂能降低核酸杂交的Tm值（ B ）。

A．尿素 B. 甲酰胺 C.甲醛 D. 乙醇10. 在凝胶中核酸变性时，为了使DNA片段在合理的时间从凝胶中移动出来，必须将最长的DNA片段控制在大约（）。

A. 1KbB. 2 KbC. 3 KbD. 4 Kb11. 将RNA或DNA变性后直接点样于硝酸纤维素膜上，用于基因组中特定基因及其表达的定性及定量研究，称为（）。

A. 原位杂交B. 核酸酶保护实验C. 斑点印迹D. 狭缝印迹12. 核酸保持在细胞或组织切片中经适当方法处理细胞或组织后，将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交，称为（）。

A. 原位杂交B. 核酸酶保护实验C. 斑点印迹D. 狭缝印迹13. 在将固定于膜上的DNA片段与探针进行杂交之前，必须将膜上所有能与DNA结合的位点全部封闭，称为（ B ）。

A. 杂交B. 预杂交C. 杂交前处理D. Nouthern印迹杂交14. 进行间期细胞染色体DNA的原位杂交时，关键是（）。

A. 细胞的培养B. 加固定液C. 载波片上的固定D. 细胞染色体的制备15. 组织细胞杂交前的预处理的关键是（ C ）。

A. 降解细胞外蛋白B. 降解细胞蛋白C. 降解核酸表面蛋白D. 降解核酸DNA16. 组织细胞杂交前预处理时，降解核酸表面的蛋白质常用的蛋白酶是（）。

A. 蛋白酶CB. 蛋白酶KC. 蛋白酶AD. 蛋白酶I17. 在进行原位杂交时，RNA探针杂交的时间最好是（）。

A. 2—4hB. 4—6hC. 6—8hD. 过夜18. 在核酸杂交中，目前应用最为广泛的一种探针是（ A ）。

A. 基因组DNA探针B. 寡核苷酸探针C. cDNA探针D. RNA探针19. 在Southern印迹杂交中用来标记核酸探针最常用的核素是（）。

A. 32PB. 3HC. 35SD. 125I20．在下列非核素标记物中，既属于半抗原，同时也属于配体的是（）。

A. 地高辛B. 生物素C. 亲合素D. 罗丹明21.一些标记物可与某种物质反应产生化学发光现象，通过化学发光可以象核素一样直接使X线胶片上的乳胶颗粒感光。

这些标记物称为（）。

A.半抗原B.配体C.荧光素D.化学发光探针22. Sephadex G—50 柱析法中，随着流动相流出的是（）。

A.小分子物质B. dATPC.大分子探针D. dGTP23. 下列DNA分子的组成中，哪种是核酸变性的最主要的因素（ C ）。

A. ATB. AGC. GCD. TC24. 在探针的纯化时，无水乙醇可以沉淀（）。

A．DNA片段 B. 蛋白质分子C．RNA片段 D. 小分子物质25. 待测DNA样品的电泳分离中，作为分子量标准的λDNA是用（）酶消化的。

A. HindⅢB. BglIC. ApaID. BamHI三. 多项选择题:1. 导致DNA变性的常用方法有（）。

A. 热变性B. 碱变性C. 酸变性D. 化学试剂变性2. 影响核酸杂交的因素有（）。

A. 核酸分子的浓度和长度B. 温度C. 离子浓度D. 核酸分子的复杂性3. 核酸分子处于何种情况下，核酸的双链可以完全打开成为单链（）。

A. PH＜3B. 3＜PH＜5C. 5＜PH＜10D. PH＞104. 在杂交液中加入甲酰胺，其目的是（）。

A. 在低温下探针更稳定B. 使杂交液为中性C. 能更好的保留非共价结合的核酸D. 减少核酸杂交的副反应5. 为减少非特异性杂交反应，在杂交前将非特异性杂交位点进行封闭，常用的封闭物有（）。

B. 复性的非特异性RNAC. 变性的非特异性DNAD. 高分子化合物E. 低分子化合物6. 下列哪些步骤属于Southern印迹杂交（）。

A. 待测核酸样品的制备B. 待测DNA样品的电泳分离C. 凝胶中核酸的变性D. Southern转膜7. Southern转膜时常用的膜是（）。

A. 化学活化膜B. 尼龙膜C. 硝酸纤维素膜D. 滤纸8. 常用的Southern转膜方法有哪几种（）。

A. 硝酸纤维素膜法B. 毛细管虹吸印迹法C. 电转印法D. 真空转移法9. 用于Southern印迹杂交的探针可以是（）。

A. 纯化的DNA片段B. 纯化的RNA片段C. 多核苷酸D. 寡核苷酸片段10. 原位杂交可以用来检测（）。

A. DNAB. RNAC. cDNAD. RNA和DNA11. 原位杂交所用的探针可以是（）。

A. mRNAB. DNAC. RNAD. cDNA12. Northern印迹杂交中转膜时可采用的方法有（）。

A. 毛细管虹吸印迹法B. 电转印法C. 真空转移法D. 凝胶分离法13. 核酸原位杂交包括（）。

A. 组织细胞的固定B. 预杂交C. 杂交D. 冲洗14. 下列哪些属于核酸原位杂交的常用固定液（）。

A. 10%甲醛B. 4%多聚甲醛C. 乙醇：冰醋酸（3：1）D. 戊二醛15. RNA酶保护分析法可用于（）。

A. mRNA定量B. mRNA定性C. mRNA末端定位D. 确定含子在相应基因中16. 核酸酶S1能降解（）。

A. DNA 单链B. DNA双链C. RNA单链D. DNA/RNA杂交双链17. 根据检测方法的不同，非核素标记物可分为以下几类（）。

A. 半抗原B. 配体C. 荧光素D. 化学发光探针18. 下列物质属于半抗原的是（）。

A. 亲和素B. 罗丹明C. 生物素D. 地高幸19. 核酸分子杂交所用探针采用体外标记法的优点是（）。

A.安全系数高B.需要活体生物或细胞培养系统C.探针，核酸分离和纯化及储存很方便D.体外标记一般比体标记的比放射活性高20. 化学法体外标记核酸探针最常用的是（）。

A. 125IB. 光敏生物素C. 3HD. 32P21. DNA探针的酶促标记法包括（）。

A. 缺口平移法B. 随机引物法C. PCR标记法D. 末端标记法22. 探针的纯化包括（）。

A．乙醇沉淀法 B. SephadexG-50C. 甲醇沉淀法D. 丝柱离心法23 DNA变性后的理化性质的变化有（）。

A. 粘度降低B. 密度增加C. 紫外吸收值增加D. 熔点减小24. Southern杂交结果检测包括（）。

A．放射自显影 B. 比色或化学发光检测C. 酶切图谱分析D. 凝胶电泳分离25. Southern杂交在医学中的应用包括（）。

A. 酶切图谱分析B. 特定基因定性和定量C. 基因突变分析D. 限制性片段长度多态性的分析四. 填空题:1. 核酸分子杂交中，杂交的双方分别称为与。

2. 核酸分子杂交中已知的核酸序列称为。

3. 适当的电泳缓冲液中，DNA在电场作用下，由负极向正极泳动，分子越大，泳动速度。

4. 当促使变性的因素解除后，两条DNA又通过碱基互补配对结合形成DNA双螺旋结构，称为。

5. 在DNA的碱基组成中，AT之间是氢键，GC之间是氢键。

6. 鉴别DNA靶分子的杂交称为，鉴别RNA靶分子的杂交称为。

7. 根据检测对象的不同，可将原位杂交分为和。

8. 常用的液相杂交有和。

9．RNA酶保护分析法（RPA）的基本程序包括：、、、、。

10. 液相杂交的核酸酶S1保护分析法可用于、、和。

11. 核酸探针包括：、、和。

12. 在用核酸标记的探针，大多数标记方法需要的是α-32P，末端标记必须使用。

13.核酸的体外标记法分为和。

14.核酸的体外标记法中的酶法最常用的是和标记。

五、简答题1、DNA变性的常用方法有哪几种？2、简述DNA的复性过程。

3、一个良好固相支持物应具备哪些特性？4、试比较硝酸纤维素膜、尼龙膜和化学活化膜的优缺点。

5、核酸原位杂交的理想固定液应具备哪些特点？6、一种理想标记物应具备哪些特性？7、随机引物法标记DNA探针有哪些优点？六、论述题1、试述核酸分子杂交的原理。

2、试述影响核酸分子杂交的因素。

3、试述Southern印迹杂交的基本步骤。

4、试述Southern印迹的常用方法及原理。

5、试述核酸原位杂交的基本过程。

6、试述探针的种类及其制备。

7、试述切口平移法标记DNA探针的原理。

名词解释：SiRNA:利用双链小片段RNA高效、特异性降解细胞同源mRNA，从而阻断体靶基因表达，使细胞出现靶基因缺失的表型。

Blue/white screen:蓝白斑筛选。

即β-半乳糖苷酶基因失活筛选。

其原理是：某些质粒载体带有大肠杆菌乳糖操纵子的lacZ’基因，该基因含一段编码β-半乳糖苷酶氨基末端145个氨基酸α－肽的DNA片断，IPTG可诱导此片断合成，此片断能与宿主细胞所编码的缺陷型β-半乳糖苷酶实现基因α－互补，形成完整的β－半乳糖苷酶。

该酶能催化指使剂底物X－gal形成蓝色菌落。

当外源基因插入lacZ’基因中MCS(多克隆位点)，lacα－肽基因阅读框架被破坏，细菌将无β－半乳糖苷酶活性，结果重组克隆呈白色菌落。

Knock down:（基因）敲除。

是指对一个结构已知但功能未知的基因，从分子水平上设计实验，将基因去除，或用其它顺序相近基因取代，然后从整体观察实验动物，推测相应基因的功能。

基因敲除除可以终止某一基因的表达外，还包括引入新基因及引入定点突变，既可以是用突变基因或其它基因敲除相应的正常基因，也可以用正常基因敲除相应的突变基因。

G-protein :G蛋白。

是三聚体GTP结合调节蛋白的简称，位于质膜胞浆的一侧，由α，β，γ三个亚基组成，βγ二聚体通过共价结合锚定于膜上起稳定α亚基的作用，而α亚基本身具有GTP酶活性。