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原理和意义
抗筛细胞的要求 试管法抗球蛋白试验 凝胶法抗球蛋白试验 聚凝胺试验 常见疑难问题
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内 套 管壁
反应 室 反 应 室 底 孔 外管壁 亲和凝 胶
特殊粘液
试剂或 盐水 凝胶或 玻璃珠
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凝胶技术的原理

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溶血性抗体：抗体在体外激活补体，导致溶血。 可用5%的EDTA按1:10比例加入血清中，螯合钙离子 ，抑制补体激活。 冷抗体：先离心，37℃孵育2-3分钟，在水浴箱中直 接看结果。 自身抗体：直抗试验。


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常用的质控方法： 1. 聚凝胺法：用阳性对照试剂与待检血清按同样步骤进 行质控试验，结果应为“1+”的弱凝集。
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如果红细胞表面结合了抗体/补体，加入抗球蛋白分子后，可 在这些抗体/补体之间“搭桥”，产生红细胞凝集现象。 自身免疫性溶血性贫血、输血反应、新生儿溶血病的诊断
/wikipedia/commons/1/1c/Coombs_test_schematic.

反应室下端底孔很小，液体在孵育过程中不会流入下方微 柱中。 离心时，反应室中的红细胞和血清混合液穿过反应室底孔 ，与微柱中液体汇合。由于该液体的比重在红细胞与血清 之间，血清比重低，因此不能在离心力的作用下继续向柱 底运动，红细胞的比重略重，能继续向下脱离血清穿过液 体层，直达凝胶上部。 在这一过程中，被IgG致敏的红细胞将与液体层中的抗球 蛋白试剂反应，形成凝集，因而无法穿过凝胶层达到柱底 ，红细胞滞留在凝胶层的顶部。 未被IgG致敏的红细胞不会形成凝集，在离心力作用下会 直达柱底。血清因停留在液体层的上部，不会中和液体层 中的抗球蛋白试剂。柱的形状也很重要，很细或呈扁平状 ，柱内液体不易受离心力作用旋转混合
阳性：前3管中任一管出现凝集，阴性
对照不凝集。 阴性：全部不凝集。“多抗”管中加 质控细胞。 无效结果：阴性对照出现凝集；质控 细胞不凝集。
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原理和意义
试管法
微柱凝胶法 直抗阳性常见原因分析 直抗强阳性红细胞的处理方法
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抗筛细胞的要求 试管法抗球蛋白试验 凝胶法抗球蛋白试验 聚凝胺试验 常见疑难问题
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I.
盐水介质
II. 抗人球介质
37℃，30min或2d LIM, 10-15min或10d LIM, 13min
I
II
III
自身
三洗
I Ps 抗筛细胞I Ps Ps Ps Pc 抗筛细胞II 抗筛细胞III
24nm距离
IgM
IgG
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抗球蛋白试验 - 检测 IgG
通过抗人球蛋白抗体的特异性桥连作用，促进红细胞 的凝集。可分为直接和间接抗球蛋白试验。
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直抗试验的理论及方法 抗筛试验的理论及方法
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原理和意义
试管法
微柱凝胶法 直抗阳性常见原因分析 直抗强阳性红细胞的处理方法

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原理和意义
试管法
微柱凝胶法 直抗阳性常见原因分析 直抗强阳性红细胞的处理方法
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为什么要处理？ ABO、Rh定型、抗体筛选/鉴定时，阴性对照可能 出现凝集，发生假阳性反应。
怎么处理？热放散法 1%红悬液 56℃放散10min 悬液 直抗试验
2. 试管法间接抗球蛋白试验：自制的IgG致敏红细胞。
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谢谢！
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秦皇岛市中心血站 杨君青 2019.3.30
红细胞表面电荷及其相互间的距离
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IgG和免疫球蛋白
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免疫球蛋白的结构模式图
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抗原-抗体反应
在盐水介质中，红细胞之间的 距离约24 nm；IgM 抗体 Fab端之间的最大距离大于35 nm ；IgG仅14nm，不足以连接 两个相邻红细胞，需借助其他实验技术才能出现凝集反应。
II
III
自身
1000g，15s
抗球蛋白
抗球蛋白
抗球蛋白
抗球蛋白
看盐水结果
1000g，15s
看抗人球结果
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阳性：I、II、III管中任一管出现凝集，自身对照不 凝集。 阴性：全部不凝集。任意一管中加直抗阳性细胞。

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三洗的正确方法： 1. 加入盐水，约至试管总容量2/3处。1000g离心1分 钟，倾去试管内盐水。 2. 振摇试管使红细胞完全悬浮。 3. 重复上述步骤一次。 4. 第三次洗涤，重复第1步，倾去试管内盐水后，保 持管口向下，立即置于吸水纸上1～3秒钟，利用吸 水纸吸尽残留盐水。
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结 果 判 读
如果阴性对照（ctl）阳性，用温盐水/专用稀 释液洗涤RBC ，再配悬液。
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凝胶技术的优点

无需洗涤的抗球蛋白试验 敏感
在凝胶试验中常能发现其它试验不易发现的问题。

结果可保存
试验结果可在冰箱中保存数日，并且较容易被拍成照片。
原理和意义
抗筛细胞的要求 试管法抗球蛋白试验 凝胶法抗球蛋白试验 聚凝胺试验 常见疑难问题
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不同批次的抗筛细胞，抗原谱不一样 抗原的有效性，随保存时间延长，部分抗原失效 抗原选择要符合当地人群的表型频率
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内 套 管壁
反应 室
反 应 室 底 孔
外管壁
特殊粘液 亲和凝 胶
试剂或 盐水 凝胶或 玻璃珠
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凝胶技术的原理

反应室下端底孔很小，液体在孵育过程中不会流入下方微 柱中。 离心时，反应室中的红细胞和血清混合液穿过反应室底孔 ，与微柱中液体汇合。由于该液体的比重在红细胞与血清 之间，血清比重低，因此不能在离心力的作用下继续向柱 底运动，红细胞的比重略重，能继续向下脱离血清穿过液 体层，直达凝胶上部。 在这一过程中，被IgG致敏的红细胞将与液体层中的抗球 蛋白试剂反应，形成凝集，因而无法穿过凝胶层达到柱底 ，红细胞滞留在凝胶层的顶部。 未被IgG致敏的红细胞不会形成凝集，在离心力作用下会 直达柱底。血清因停留在液体层的上部，不会中和液体层 中的抗球蛋白试剂。柱的形状也很重要，很细或呈扁平状 ，柱内液体不易受离心力作用旋转混合

三洗
配2-3%红
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直抗试验的理论及方法 抗筛试验的理论及方法
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原理和意义
抗筛细胞的要求 试管法抗球蛋白试验 凝胶法抗球蛋白试验 聚凝胺试验 常见疑难问题
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原理：

及时发现有临床意义的不规则抗体
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原理和意义
试管法
微柱凝胶法 直抗阳性常见原因分析 直抗强阳性红细胞的处理方法
秦皇岛市中心抗IgG+C3
抗IgG
Pc
抗C3 Pc 1000g，15s 看结果
Pc
AB浆/5%白蛋 白（阴性对照） Pc
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操作技术要求较低
凝胶试验的操作主要是简单的加样和判读，孵育、离心过 程都有专门的设备。其中能被人为改变的因素较少。
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原理和意义
试管法
微柱凝胶法 直抗阳性常见原因分析 直抗强阳性红细胞的处理方法
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IgG阳性：自身抗体、输血反应、新生儿溶血病； 少数健康人 单独C3阳性： 1. IgM冷抗体在体外激活补体：采血时使用EDTA抗 凝管。 2. 自免溶贫： 冷凝集素综合征（-91） 阵发性冷性血红蛋白尿（-94%） 温型自身免疫溶血性贫血（-7%）
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原理和意义
抗筛细胞的要求 试管法抗球蛋白试验 凝胶法抗球蛋白试验 聚凝胺试验 常见疑难问题
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蛋白凝集：
红细胞凝集
缗钱状凝集
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蛋白凝集： 1. 离心后在盐水介质即出现的、无明显反应格局的、 对反应温度（4℃、室温、37℃）变化不敏感的凝 集，结合镜检结果可判定为蛋白凝集。 2. 处理方法：可在另一根试管中加入相同的2滴血清 以及2滴生理盐水，再加入1滴红细胞，轻摇后离心 观察结果。凝集结果明显减弱。

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看细胞扣的方法： 1. 轻轻转动或摇动试管，让液面反复冲刷细胞扣。 2. 每次冲刷可将少量红细胞冲下，观察圆形细胞扣的 上缘，如果随着上缘红细胞不断被冲下而出现缺口， 并有肉眼可见的红细胞凝块脱落，可判定为阳性。 3. 如果上缘始终保持圆滑直至细胞扣消失可判定为阴 性。