6. 加入200ulTE缓冲液（含50ug/ml RNase），轻弹管底，以 溶解DNA；也可以用枪头缓慢地来回吸放液体来帮助溶解 DNA。此时应该可以看到片状的DNA沉淀物逐渐变少，最 终消失。（一定要使DNA完全溶解于TE中，否则影响电泳 效果！）；
7. 将DNA溶液置于37 ℃ 培养箱或水浴中30min（降解残留的 RNA） ；
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上样2ul M 1 2 34 56
上样8ul M 1 2 34 56
注：1-6序号分别与表中对应。
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核酸的贮存——DNA保存
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无水乙醇沉淀 沉淀前往往加入NaCl等盐离子，作用是中和核酸分子表 面的负电荷，减少分子间的排斥力，有助于分子之间的聚 集。 无水乙醇可以吸收分子之间的水，使DNA沉淀析出，
• CTAB溶液中含有1.4mol/LNaCl，有助于溶解释放出 来的DNA （ DNA在2mol/LNaCl中DNA具有较高的溶 解度）；
• 加入无水乙醇，可以使DNA从溶液中沉淀出来。
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实验步骤（常温操作，2人一组）
1. 取适量(300-500mg)植物组织，加入2ml CTAB抽提缓冲 液，充分匀浆2-3min，然后每人转移700ul的匀浆液至一 支1.5ml离心管中，65℃水浴45min（中间摇动2-3次）（ 裂解细胞，释放核酸和蛋白）；
实验四、基因组DNA的提取
准备：一次性手套、 65℃水浴锅、氯仿、无水乙 醇、1.5离心管、菜花
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实验目的：
1.了解真核生物基因组DNA提取的一般原理。 2.了解基因组DNA的实验用途。 3. 掌握基因组DNA提取的方法和步骤。
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• 材料：花椰菜/昆虫组织
• 设备：移液器，高速离心机，水浴锅，培养箱 。
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基因P • 基因克隆Βιβλιοθήκη PCR）大家好13
下次课程
• 质粒DNA的提取及质量检测
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结束
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8. -20 ℃ 保存备用。
9. 取5~10ulDNA（加适量loading buffer）电泳检测；取 2ulDNA测定浓度和OD260/280（下次课电泳检测）。
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基因组DNA的检验（纯度）
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基因组DNA的检验（完整性）
凝胶电泳法： 基因组DNA电泳，在电场中泳动慢，如果发 生降解，可出现电泳图谱脱尾现象。
• 试剂：
1. CTAB组织消化液 2. 氯仿 3. 无水乙醇 4. TE缓冲液
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CTAB溶液配制
• 2%CTAB溶液：100mmol/L Tris-HCl, pH7.0 ；1.4mol/L NaCl；20mmol/L EDTA； 2%CTAB.
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实验原理（CTAB法）
• CTAB，十六烷基三甲基溴化铵，是一种阳离子去污 剂，可使细胞破裂，释放出核酸；
4. 加入1/10体积的NaAc(3mol/L,pH5.2）（40ul），上下 颠倒3-4次混匀；然后再加入2倍体积的无水乙醇（ 0.9ml)，上下颠倒3-4次混匀（如DNA量大，此时可见絮 状DNA沉淀。（如果放置于大家-好20度过夜，DNA产率会更多 6
5. 12000rpm离心5min，缓缓倒掉上清液（剩余的液体可以用 移液器吸走），管底的沉淀即DNA（无色透明胶状物！） ；
2. 加入700ul的氯仿，上下摇动2-3min (此步是萃取组织液 中的蛋白质；务必带上手套！）；
3. 12000rpm离心10min，取400ul上清液转移至一支1.5ml 离心管中（由于此时悬液已经分层，而我们需要取最上 层的溶液，所以注意千万不要使枪头触碰到中间的杂质 层，当然，更不能取吸取下层的萃取液了）；