❖ 若数据不呈高斯正态分布，则可用非参数法处理。最常见 的是以百分位数法确定2.5％和97.5％位数的参考限，以此 确定95％参考区间。
方法评价
❖ 建立参考区间是实验室开展新的检验项目前必然要进行的 一项工作，但由于其需要标本例数多，对人群的纳入标准 要求严格；大多实验室参照试剂说明书、教材、或其它权 威资料转移为本实验室的参考区间，但需对此类选用的参 考区间进行验证评审。
肿瘤免疫学检验
概述
❖ 肿瘤免疫学检验主要涉及肿瘤免疫学诊断和肿瘤患者免疫 功能状态的评估。而目前临床上用于肿瘤免疫学诊断项目 主要是肿瘤标记物检测，但目前使用肿瘤标记物都是肿瘤 非特异性标记物，不仅由肿瘤细胞产生，存在肿瘤患者血 液和体液中；也可以正常体细胞产生，健康者血液和体液 中也会存在一定量肿瘤标记物，因此，如果将肿瘤标记物 作为肿瘤诊断指标时，对临床上使用的肿瘤标记物进行生 物参考区间评价和诊断性能评价就显得非常重要，本单元 主要以AFP和PSA为例以达到举一反三作用。
实验一 血清AFP参考区间建立实验
❖ 实验室应为检验项目提供可靠的参考区间，才能 使临床对健康普查者的检验结果作出判断，对病 人检验结果有大致的了解，发挥检验报告的作用。 因此获得检验项目可靠的参考区间是实验室的重 要任务。参考区间的评价一般包括参考区间的建 立和参考区间的验证实验。
实验目的
❖ 掌握血清AFP参考区间建立实验的原理和方法学，以 Modular Analytics E170自动电化学发光免疫分析系 统测定AFP参考区间的建立流程为例加以说明。
❖ 将采集标本前和采集时对受检查的要求，详细告诉各个受 检参考个体，做好准备，要求予以配合。
❖ 规范地采集标本，做好分析前的标本预处理。按照相应规 程做好标本采集、处理、运送和保存，此外，还应考虑标 本采集时的环境条件，标本采集者技术熟练要求和服务态 度等。
❖ 在良好的控制条件下，用事先指定的分析方法对标本进行 检测，获得参考值结果。分析样品的检验方法应有方法学 可靠性评价，测定过程有完整质量控制措施
实验原理
❖ 先确定AFP参考区间建立时的纳入人群的标准，选 择参考个体，按该项目的检测要求收集标本并在检 测系统性能良好的状态下进行AFP浓度的检测，收 集检测结果，统计分析，确定化学发光免疫分析系 统AFP测定的参考区间。
试剂与器材
❖ 选用与检测仪器相配套的试剂、校准品及其他辅助试剂。 ❖ 按照纳入人群的标准，选择参考人群的新鲜血清标本。
实验原理
❖ 对选择的纳入研究对象的患者采取血液，进行PSA定量检 测；对纳入研究对象的患者采取前列腺组织穿刺病理检查， 将研究对象分为前列腺癌组和前列腺增生组。
❖ 根据PSA定量检测结果制作ROC曲线，根据不同cutoff值， 评价其诊断的的准确性（灵敏度、特异度、诊断准确度等） 和有效性（阳性预测值、阴性预测值、阳性似然比、阴性 似然比）。
操作步骤
❖ 根据文献和实验研究，总结对该项目检测结果产生的生物 变异和分析干扰的因素，供选择参考个体时用。
❖ 确定参考个体的选择原则（或排除非参考个体的原则）， 编写与之对应的调查表。
❖ 依据调查表和其他有关记录，挑选候选的参考个体。应按 照项目在临床使用的要求选择参考个体，在选择参考个体 对象时，要兼顾各年龄段，同时应考虑是否有分组的必要 （最常见的是分年龄组和性别组）。依据排除原则，剔去 不符要求的候选对象。
临床诊断试验结果与患病情况的关系
❖ 诊断试验分定性试验和定量试验。 ❖ 定性试验的结果分为阳性和阴性结果 ❖ 定量试验结果也可根据临床诊断截断值转化为阳性和
阴性结果。
试验结果与疾病的关系
罹患疾病情况 患病 健康 试 阳性 TP(a) FP(b) 验 阴性 FN(c) TN(d)
真阳性（true positive TP） 假阳性（false positive FP） 真阴性（true negative TN） 假阴性（false negative FN）
❖ 采用简单的方法予以证实，如选取20位健康者，有90%以 上的测定结果在参考区间内，即说明实验室选用的参考区 间有效。
思考题
❖ 请设计建立AFP参考区间的抽样人群的纳 入标准？
温州医学院 陶志华
实验二
血清PSA诊断前列 腺癌的性能评价实验
❖ PSA（前列腺特异性抗原）是一个分子量大约为34 000道 尔顿的糖蛋白。在正常的、Байду номын сангаас性肥大的和恶性变的前列腺 组织内以及前列腺液和精液内均可发现PSA。
疾病诊断的金标准
❖ 金标准（gold standard）：是指通过活检、尸检、外 科手术、随访等所作出的决定性诊断。
❖ 诊断试验：是指一般检查方法，具有费用低，操作方便， 对病人无损害，快速等优点。
注意事项
❖ 为确保参考范围数据的可靠性，建议至少取120个参考值 数据，若还需分组统计，则每个分组应有120个数据。
❖ 数据中的疑似离群点的判断，建议将疑似离群点和其相邻 点的差值D和数据全距R相除，D/R若大于等于1/3考虑为 离群点。若有2个或以上疑似离群点，可将最小的疑似离 群点作如上处理，若都大于1/3，则所有疑似点都剔去； 若都小于1/3，则保留所有数据。若有离群点被剔除后， 应即将其他数据补上。
❖ 血清PSA作为前列腺癌诊断指标时，具有较好诊断灵敏度， 但存在诊断特异度较低问题，目前，不推荐将PSA检测作 为对普通人群或对无症状患者的癌症筛查项目，也不应当 作为判断是否存在恶性疾病的一个绝对性依据。
❖ 有必要对临床使用的血清PSA诊断前列腺癌的效能进行评 价。
实验目的
❖ 本实验项目是如何评价定量检测项目对疾病诊断价 值。本实验以血清PSA定量测定为例，评价血清PSA 对前列腺癌诊断价值。
结果计算和分析
❖ 绘制分布图，了解数据的分布特性。若数据呈高斯正态 分布，或者数据经转换后亦呈高斯分布，可按士1.96S 表示95％数据分布范围，或者士2.58S表示99％分布范 围等确定参考限和参考区间。
❖ 参考对象群体值的特定百分数（通常是95％） ❖ 非参数和参数分析：是否正态分布 ❖ 确定参考范围的最小样本量 ❖ 随机至少120个观察对象