三、影响花药培养的因素
①选材 不同植物的诱导成功率很不相同，就同一种 植物来说亲本的生理状况对诱导成功率也有 直接影响。 选材是否成功是花药培养成功的关键。
②选择合适的花粉发育时期是提高诱导成功率的 重要因素。 因为并不是任何时期的花粉都可以经过培养产 生愈伤组织或胚状体，花粉发育的过程中，只 有某一个时期对离体刺激敏感。
似
这两种途径之间没有绝对的界限，主要取 决于培养基中激素的种类及浓度配比。
胚状体——在组织培养过程中，某些细胞在形态上转
变为与合子发育成的胚非常相似的结构，发育过 程亦与合子胚类似；
神奇的人工种子
胚状体发育途径:通过胚状体途径形成小植株
烟草花药培养
愈伤组织发育途径 水稻花药培养
接种在平板上的水稻花药
⑦花药培养时间
一般月季的花药培养时间选在5月初到5月的中 旬，即月季的初花期。初花期的花蕾营养状态 及生理状态会比较好，可提高花粉的诱导成功 率。
•2、培养基的组成 •（ MS培养基+不同比例的植物生长调节激素）
四、实验操作 （一）材料选取
1.我们怎样选择想要的花粉呢？
从花药看：月季的初花期 从花粉看：单核期 从花蕾看：完全未开放的
立即将花药接种于培养基上，通常每瓶接种花 药7-10个。
3、培养
①培养条件：温度控制在25℃左右，不需要 光照。幼小植株形成后才需要光照。
②培养：一般经过20-30天培养后，会发现花药 开裂，长出愈伤组织或释放出胚状体。 长出愈伤组织则将愈伤组织及时转移到分化培养 基上，以便进一步分化出再生植株。
பைடு நூலகம் 课题成果评价
选材是否恰当 选材是否成功是花药培养成功的关键。应学会
通过显微镜观察处于适宜发育期的花粉。
无菌技术是否过关 如果出现了污染现象，说明某些操作步骤，如
培养基灭菌、花蕾消毒或接种等有问题。
课题成果评价
接种是否成功 如果接种的花药长出愈伤组织或释放出胚状
体，花药培养的第一步就成功了。要适时转换培养 基，以便愈伤组织或胚状体进一步分化成再生植株 。
③注意：如果花药开裂释放出胚状体，则一个 花药内就会产生大量幼小植株，必须在花药开 裂后尽快将幼小植株分开，分别移植到新的培 养基上，否则这些植株将很难分开。
4、鉴定和筛选
在花药培养中，特别是通过愈伤组 织形成的花粉植株，常常会出现染 色体倍性的变化（主要原因是营养 细胞核和生殖细胞核融合造成的）。
2.我们怎样保证所选的材料处于单核期？
镜检
方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色)
花药（载玻片上）→1%的醋酸洋红1滴→用镊柄将花药捣碎， 盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核被染成红色）
焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。
花药（在卡诺氏固定液中处理20min）→取出，置于载玻片上 →焙花青－铬矾溶液染色→盖上盖玻片→镜检（花粉粒的细胞核 被染成蓝黑色）
③花药培养时期的选择
一般来说，在单核期，细胞核由中央移向细胞 一侧的时期，花药培养的成功率最高。即：最 适合花药培养的小孢子发育时期为单核靠边期。
④其它时期选择的缺点
选择单核期以前的花药接种，质地幼嫩，极易 破碎； 选择单核期之后的花药接种，花瓣已有些松动， 又给材料的消毒带来困难，且难以挑选到单核 期的花药。
部分花药产生愈伤组织
愈伤组织转接种到再生培养基
愈伤组织分化形成再生植株
胚状体：离体培养的某些体细胞在形态上转变为与合子 发育成的胚非常相似的结构，胚芽，胚轴，胚根等结构 完整，就像一颗种子，这种结构叫体细胞胚，或胚状体。
愈伤组织：离体的组织细胞经过细胞分裂，形成的排列 疏松无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。
4、放入质量分数为0.1%的氯化汞溶液中2～4分钟 （质量分数为1%的次氯酸钙溶液或饱和漂白粉溶液）
5、无菌水冲洗3～5次
花药的外面有花萼、花瓣保护，通常处于无菌状态
（三）接种和培养
1、剥取花药
在无菌条件下除去萼片和花瓣用镊子取出花药
注意： ①勿损伤花药，否则接种后容易从受伤部位产 生愈伤组织。 ②要彻底去除花丝，因为与花丝相连的花药 不利于愈伤组织或胚状体的形成。 2、接种
有丝 分裂
营养细胞
有丝分裂
2个精子
花粉母细胞 减数分裂 4个小孢子 （小孢子母细胞）
有丝分裂
花粉粒 （双核）
花粉管细胞核 生殖细胞核
1个小 孢子
营养细胞
2个精子
花粉囊
花药
成熟
花粉
8个精子
1小孢子母细胞 4小孢子
4花粉粒 （双核期）
花粉是小孢子母细胞经过减数分裂而形成 的，因此，花粉是单倍体的生殖细胞。
⑤单核期花药的挑选
为了挑选到单核期的花药，通 常选择完全未开放的花蕾。盛 开的或略微开放的花，都不宜 选作实验材料。
⑥选择完全未开放花蕾的 原因
完全未开放的花蕾，可挑 选到单核期的花药，菌少、 易消毒
⑦为什么花瓣松动会给材料的消毒带来困难？
花瓣松动后，微生物就可能侵入到花药， 给材料的消毒带来困难。
四、实验操作 （一）材料选取
1、从花药看：月季的初花期 从花粉看：单核期 从花蕾看：完全未开放的
2、通过镜检来确定是否处于适宜的发育期。
方法：醋酸洋红法(将染色体染成红色) 焙花青-铬矾法(花粉细胞核染成蓝黑色)。
（二）材料的消毒
1、花蕾用体积分数为70%的酒精浸泡30秒 2、无菌水清洗
3、无菌吸水纸吸干花蕾表面的水分
1花 粉母
减分
细胞
4个小 有分 孢子
4个花粉管细胞核
4个生殖细胞核 有分
8个精子
花粉的发育要经历：四分体时期、单核期、 双核期
（二）产生花粉植株的两种途径
花药中 脱分化 ① 的花粉
分化
胚状体
丛芽
②
花药中 的花粉
脱分化
再分化
愈伤组织
丛芽
诱导
体 变细 为胞与胚合（子胚发状育体成）的：胚在非组常织相培似养的移过结程构栽中，，发某育些过细程胞亦在与形合生态子根上胚转类
谢
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