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高效液相色谱法对黄精多糖分子量及组成的测定
#" 结果与讨论
# ! !" "#" 的纯度和相对分子质量的测定结果 ! ! 采用高效液相 色 谱 法, 利用凝胶色谱柱测定多 糖的相对分子质量。测定结果表明黄精干燥根的提 取物为均匀 单 一 的 对 称 峰, 表 明 *$* 为 均 一 产 品。 *$* 的数均相 对 分 子 质 量 ( !2 ) 为 ) ")% , 相对分子 质量 ( !6) 为) &!) , K 均相对分子质量 ( !B ) 为 ) !’) , 分散系数为 $* "&’ ; *$* 的峰 形较 窄 ( 见图 $ ) , 表明 *$* 相对分子质量的分布范围较小。
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!" 材料与方法
! ! !" 材料与仪器 ! ! 内蒙古产黄精 ( 呼和 浩 特 医 药 公 司 ) ; 标准多糖 为 */00/012 *3#"" , *3!"" , *3&"" , *3$"" , *3’" , *3$" , *3’ ( 美国 $%&’() 公 司 ) ; 单 糖 标 样 为 葡 萄 糖、 半乳 糖、 甘露糖、 果糖 ( 分 析 纯, 北京化学试剂公司) , 提 取所用的 试 剂 均 为 分 析 纯。 415(67 公 司 高 效 液 相 色谱仪、 &!$" 示 差 检 测 器、 ’$’ 型 高 压 进 样 泵; $%&3 ’() 8*+ 凝 胶 色 谱 柱、 $%&’() $*"#$" 糖 色 谱 柱; "#3$(" 紫外分光检 测 仪 ( 日本岛津公司) ; *93&!"" 型元素分析仪 ( *(6:;2 90<(6 +&<=12> ) ; ?@- ’"" -AB 核磁共振仪 ( 德国 C6/:(6 公司) 。 ! ! #" 方法 ! ! # ! !" *$* 的提取与纯化 ! ! 将黄精的干燥根磨成粉末, 于 )" D 下干燥后用 乙醚脱去脂肪, 再用无水乙醇加热回流除去醇溶物, 最 后加入蒸馏水于 #" D 下回流 & % 。提取 & 次。合 并 & 次提取液, 离心, 过滤, 依次用无水甲醇沉淀, 丙 酮、 乙醚洗涤; 重复操作 % 次。沉淀物用水溶解后 浓 缩, 于冷冻真空干燥机上冻干, 得浅黄色粗黄精多糖 ( E*$* ) 。将以 上 得 到 的 E*$* 充 分 溶 解, 用胰蛋白 酶法与 $(F1G 法 结 合 脱 去 E*$* 中 的 蛋 白 质, 然后 于% ("" 6 H <;2 速 率 下 离 心 $’ <;2 , 除 去 凝 胶 状 物, 重复操作多次。上清 液透析 % ’ , 用 活 性 炭脱 色, 离 心, 过滤。浓缩后, 经甲醇沉淀, 丙酮洗涤, 水溶解后 浓缩, 再冷冻干燥, 得纯白色粉末, 即为 *$* 。 ! ! # ! #" *$* 的纯度和相对分子质量的测定 ! ! 用 A*I+ 法测定 *$* 的相 对分 子 质 量, 色谱柱 为 $%&’() 8*+ 凝胶柱, 流动相为 "* "& <&0 H I 的磷 酸盐缓冲溶液 ( =A (* + ) , 流速 $ <I H <;2 , 柱温为 %’ D, 进 样 量 &" ! I , 示 差 折 光 检 测 器 检 测, 检测池温 度为 %’ D 。 用 标 准 多 糖 */00/012 *3#"" , *3!"" , *3 &"" , *3$"" , *3’" , *3$" , *3’ 做校正曲线, 基线稳定后 进样测定。 ! ! # ! $" *$* 单糖组成的测定 ! ! 准 确 称 取 *$* , 置 于 螺 口 试 管 中, 加 入 "* ’ <&0 H I 的 A & $J ! 溶 液, 充 入 ,& , 拧 好 试 管 盖, 于 +" D 下水解 # % , 用 C1+J % 中和至 =A 值为 ) , 离心, 过 滤, 将过滤液浓 缩 后 冷 冻 干 燥。 用 同 样 的 方 法 对 单 糖 ( 葡萄糖、 半乳糖、 甘露糖、 果糖) 标样进行处理。 ! ! 用水配制单糖标样及 *$* 全水 解 物 水 溶 液, 使 其质量浓度均为 $" G H I 。
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组成与 其 相 对 分 子 质 量 有 密 切 的 关 系[ % ]。 分 离 和 纯化多糖的方法 很 多[ & ]。 本 文 采 用 热 水 提 取, 反复 用甲醇、 丙 酮 沉 淀 析 出 的 方 法[ # ] 得 到 粗 黄 精 多 糖 ( J:5: ) , 并用胰蛋白酶法与 5+6.7 法结合 脱 去 其 中 的蛋白质得到纯黄精多糖 ( :5: ) 。采用高效液 相色 对 :5: 的纯度、 相对分子质量、 相对 分 谱法 ( @:N; ) 子质量分布及完全酸水解后的单糖组成进行了测定 分析。高效液 相 色 谱 法 对 :5: 的 纯 度 测 定 结 果 与
、 改善老龄大鼠 老 化 相 关 酶 的 活 性 及 对 老 龄
[!]
大鼠明显的促智作 用
, 这说明黄精多和化学
收稿日期: !""& )"$ )"’
作者简介: 张晓红, 女, 硕士, 讲师, 现在内蒙古大学化学化工学院工作, *+# : ( "&$* ) )!)!&%’ , ,)-./# : 01"#!’ + !* 23’ 2&-’ 通讯联系人: 博・格日勒图, 男, 博士, 教授, 博士生导师, *+# : ( "&$* ) &’’!#** ’ 基金项目: 国家自然科学基金资助项目 ( (&’ !"")&""* ) , 国家科技部医药技术创新基金资助项目 ( (&’ ’) )’"* )") ))’ ) ’