人脐静脉内皮细胞（HUVEC）培养
1.将15-20cm 长的新生儿脐带放入无菌的PBS 溶液中储存。

（注：4℃下最多贮存24 小时，室温下不超过6 小时，否则废弃）
2.用一个钝头的针头扎入脐带静脉管中，用无菌的PBS 溶液冲洗3-5 次，将污
血冲洗干净为止。

3.用手术钳夹紧脐带下端，加入15m l的胶原酶（1m g/ml）室温下消化15-20
分钟，并不时上下摇动脐带。

4.消化完后，将下端手术钳松开，消化液流入一个50 m l无菌离心管中，用无
菌的PBS 溶液冲洗脐带2-3 次。

5.将收集液离心（2000 转/分）3 分钟。

6.倒去上清，加入10m l M199培养基（加入10U/m l的bF G F），用弯管吹散细
胞，将所有液体转入一个用明胶包被好的培养瓶中，37℃培养。

（注：每个培养瓶中加入3-4ml 无菌的1%的明胶溶液，摇匀使得明胶溶液完全铺满瓶底，放入37℃孵育，最少2 小时，用前将明胶溶液倒了即可，明胶包被有利于细胞贴壁。

）
7.培养24 小时后，倒掉培养基，并用无菌的PBS 溶液清洗2-3 次，洗掉红细
胞和死细胞，加入10 m l新鲜的M199培养基。

8.以后每2 天换一次培养基（每次换掉2/3 的培养基）。

9.一般培养5-7 天，细胞可长满至80-90%单层，这时可以传代。

10.倒掉培养基，用无菌的PBS溶液清洗2-3 次，加入2-3m l消化液（0.25%胰酶
+0.1%EDTA）消化细胞，在显微镜下观察，一旦细胞变圆，即加入2-3 倍的——————————————————————————————————————————————。