小鼠脑冰冻切片后，想做尼氏染色，用焦油紫，具体步骤是什么？焦油紫的溶液该如何配制？
焦油紫染液的配制：
焦油紫/0.1g
蒸馏水/99ml
1%冰醋酸1ml
冰冻切片氯仿中1分钟；
无水酒精中1分钟；
95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；
进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；
95%酒精分色；
常规脱水、透明、封片。

尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。

mickeyzq wrote:
焦油紫染液的配制：
焦油紫/0.1g
蒸馏水/99ml
1%冰醋酸1ml
冰冻切片氯仿中1分钟；
无水酒精中1分钟；
95%酒精、70%酒精各1分钟，蒸馏水洗片刻；
进入焦油紫染液染色30分钟（37度温箱中染色10分钟），蒸馏水洗涤；
95%酒精分色；
常规脱水、透明、封片。

尼氏体呈紫色，细胞核呈淡紫色，胶质细胞呈淡紫色。

你的没有经过复染，对比也可以这么鲜明啊
我用的是1％的甲苯胺蓝，具体步骤是：
常规石蜡切片，二甲苯透明，酒精梯度复水，入1％甲苯胺蓝室温下染3min，自来水冲洗，95％酒精分化，0.5％伊红复染1s，水洗，透明封片，但是结果不好，伊红复染后颜色很深，原来的蓝色被覆盖的很严重，不知道该怎么改进
换焦油紫看看,焦油紫着色比较深.
（二）神经细胞尼氏体染色
正常的神经细胞都含有一定数量的尼氏化，它们主要分布于神经细胞的浆中，形状有大有小，如三角形，有的为椭圆形。

这些物质能被大部分的蓝色染料所染色，这些染料如焦油坚牢紫（Cresyl fast violet）亚甲蓝（methylene blue）甲苯胺蓝（toluidine blue）硫董（thionin）等钭其染为蓝色。

但是，当神经细胞受伤后，胞质内的尼氏体更可发生变化，严重的可消失。

焦油坚牢紫显示尼氏体
焦油坚牢紫1g
蒸馏水100ml
*作方法：
1、切片脱蜡至水
2、用焦油坚牢紫水溶液浸染20-30分钟
3、水洗
4、用95%酒精分化
5、无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶
结果：神经细胞单位：紫-蓝色
细胞核：紫-蓝色
尼氏体：紫-深蓝色
注意：1、应用酒精分化切片，要迅速，防止过度分化，将切片上的颜色全部脱掉。

神经纤维染色
使用说明：
1. 样品处理
a) 对于石蜡切片：
二甲苯中脱蜡5-10分钟，共三次。

注：脱蜡不充分会导致染色不均匀。

无水乙醇5分钟。

90%乙醇2分钟。

70%乙醇2分钟。

蒸馏水2分钟
2. 尼氏(Nissl)染色
对于上述处理好的样品：
尼氏(Nissl)染色液染色染色3-10分钟(可以根据染色结果和要求调整时间，染色时温度提高到37-50℃对于25-50微米等较厚
的切片可以使染色更均匀）。

蒸馏水洗涤2次(每次数秒钟即可)。

95%乙醇约5秒。

此时，如果需要直接观察，可以用70%乙醇洗涤2次。

如需脱水、透明后封片按后续步骤进行，70%乙醇洗涤后仍可按照
后续步骤进行脱水、透明和封片处理。

注：如果用于免疫组化等染色后的复染，可以参考上述步骤在其它染色完成后直接进行尼氏(Nissl)染色。

3. 脱水、透明、封片或进行其它染色
a) 脱水、透明、封片：
95%乙醇脱水2分钟。

换用新鲜的95%乙醇再脱水2分钟。

二甲苯透明5分钟。

换用新鲜的二甲苯，再透明5分钟。

用中性树胶或其它封片剂封片。

显微镜下观察，细胞呈现斑驳的蓝紫色染色。

b) 进行其它染色：
如果进行免疫荧光染色，或进行Hoechst等荧光染料的染色，在Nissl染色液染色后：70％乙醇洗涤2次，每次2分钟。

PBS或生理盐水或TBS或TBST等用于免疫染色或荧光染料染色的溶液浸泡5分钟。

然后就可以进行免疫荧光染色或其它荧光染料的染色了。

1.石蜡切片厚8-10微米，切片脱蜡至水
2.蒸馏水洗
3.硫堇水溶液染色（60度温箱内浸染30-60分钟）
4.蒸馏水洗
5.乙醇分化液迅速分化
6.无水乙醇迅速脱水、透明、封固
结果：尼氏体深兰色，细胞核淡兰色。

上海源叶生物科技有限公司。