1、酶的固定化方法：吸附法、包埋法、共价结合法、热处理法2、提取酶的有机溶剂有：甲醇、乙醇、丙醇、丙酮、异丙醇、3、酶生产的主要方式：固体发酵、液体深层通气发酵、固定化细胞或固定化原生质体发酵4、酶的抽提剂有：稀酸、稀碱、稀盐、稀有机溶剂等5、测定酶蛋白含量的方法：凯氏定氮法、双缩尿法、Folin 酚法、紫外法、色素结合法、BCA法、胶体金测定法6、影响酶活力的主要因素：温度、PH、底物浓度、酶浓度、抑制剂、激活剂7、包埋固定化酶的凝胶有：聚丙烯酰胺、聚丙烯醇、光敏树脂、琼脂、明胶、海藻酸钙8、酶的回收率：是指直接测定的固定化酶的活力占固定化之前的活力的百分比。

9、纯化倍数：就是经过纯化后得到的比活力与纯化前比活力之间的比值。

10、盐析的原理：蛋白质溶液在一定浓度范围内，加入无机盐，随着盐浓度增大，蛋白质的溶解度增大，但当盐浓度增到一定限度后，蛋白质将从溶液中析出。

11、在酶的反应过程中如何确保酶的最适反应温度和最适pH值。

保证最适温度的方法：通过发酵罐的热交换设施，控制冷源或热源流量；通过曲室的通风和加热设备控制。

保证最适pH的方法：加酸或加碱，加碳源或氮源物质。

12、在发酵产酶过程中的准备工作：收集筛选菌种，菌种保藏，细胞活化，扩大培养，培养基的配置，对发酵条件的控制。

13、为什么在测酶活实验中要连续不断的测酶活和酶蛋白含量因为酶的活性会受温度和PH值的影响14、终止酶反应的方法：1、迅速升高温度；2、加入强酸、强碱、尿素、乙醇等变性剂；3、加入酶抑制剂；4、调节反应液pH值。

15、固定化的优点：1、可反复使用，稳定性高；2、易与底物和产物分开，便于分离纯化；3、可实现连续生产，提高效率。

16、培养基的成分：碳源、氮源、无机盐、生长因素、水。

17、菌种保藏方法：1、斜面低温保藏法2、液体石蜡油保藏法3、砂土管保藏法4、真空冷冻干燥法5、液氮超低温保藏法。

18、发酵产酶的操作过程：配置培养基、分装、灭菌（112℃—115℃，20min）、孢子悬液（将无菌水加入斜面培养基）、接种、培养（32℃，180r/min，培养72h）19、测定酶活的方法：1、在一定时间内，让适量的底物与酶在最适合条件下；2、加入酶抑制剂或升高温度等方法快速终止酶反应；3、加一定量的显色剂与底物反应，测定液体的吸光度；4、根据吸光度值计算出酶活20、壳聚糖酶如何筛选：采用透明圈法，透明圈法直观、方便、根据壳聚糖不溶于水，以壳聚糖为唯一碳源，培养基浑浊。

如果有该酶存在，即可降解壳聚糖为壳寡糖，壳寡糖容易被分解吸收，所以形成透明圈，从而可筛选出产生壳聚糖酶的菌株21、产壳聚糖酶初筛平板有什么现象，为什么会出现透明圈，其原因是根据壳聚糖不溶于水，以壳聚糖为唯一碳源，培养基浑浊。

如果有该酶存在，即可降解壳聚糖为壳寡糖，壳寡糖容易被分解吸收，所以形成透明圈22、酶反应器：分批式搅拌罐反应器、连续流搅拌罐反应器、填充床反应器、流化床反应器、模型反应器、鼓泡塔反应器23、对产酶的菌种的要求是： 1、产酶量高；2、繁殖快，发酵周期短；3、产酶稳定性好，不易退化，不易被感染；4、能够利用廉价的原料，容易培养和管理；5、安全可靠，非致病菌。

24、在使用离心机时应注意事项25、尿酶提取过程中为什么要在冰浴中进行在冰浴中进行可以使尿酶处于低温条件下，低温能降低酶的活性，但不破坏酶的活性，在适合的温度下可恢复酶的活力26、填充床的制备及应用的要点装柱——平衡——应用——检测装柱：均匀、无裂缝、无气泡、平整；平衡：1—2倍柱床体积缓冲液；应用：3%尿素溶液；检测：定性：纳氏试剂（黄色或棕红色沉淀）——定量：取20ml流出液，用0.05mol/L标准HCL滴定（加2—3滴混合指示剂）PFR模型制作注意事项及应用：A、填装一定要均匀，运行时流速要稳定 B、PFR的液体流动方式有下向流、上向流或是循环流之分，工业上通常用上向流，可以避免下向流动的压力对摇床的影响，对反应产生气体的尤为注意27、设计实验某蛋白的最适温度为50度，其最适pH范围在4.0-8.5，请设计实验测定其最适pH。

按下表格步骤进行操作以PH值为横坐标，吸光度值为纵坐标绘制实验曲线，得出最大吸光度值即为最适PH28、H2O2__过氧化氢酶 H2O+O2，问如何测定过氧化氢酶其酶活力。

①将过氧化氢与蒸馏水混合，６０℃预热５ｍｉｎ②加入适量的过氧化氢酶液，６０℃准确保温３ｍｉｎ，沸水浴灭活５ｍｉｎ③加入ＤＮＳ和高锰酸钾溶液，沸水浴５ｍｉｎ（冷却）④加入适量的蒸馏水，测Ａ540⑤计算酶活，绘制标准曲线29、测壳聚糖酶的酶活：（壳聚糖在壳聚糖酶的消化分解作用下产生还原糖，再用DNS法，使还原糖与DNS发生显色反应生成棕黄物质，再在520nm处测该物质的吸光度值来判断产壳聚糖酶菌量高低的菌液。

）步骤：①将1%标准壳聚糖溶液与pH5.6醋酸缓冲液混合，50℃预热5min②加入适当稀释的酶液，50℃反应15min，然后沸水浴5min③加入适量DNS，沸水浴5min，冷却④加入适量蒸馏水，3500rpm/min，离心15min⑤用分光光度计测OD520的值⑥计算酶活，并绘制标准曲线30、海藻酸钙凝胶的制备①配置1000ml 3%海藻酸钠溶液（用PH7.0，缓冲液配置），200ml 5%氯化钙溶液（用蒸馏水配置）②取0.6g湿尿酶，再加入80ml 3%海藻酸钠溶液，充分搅拌打散③用注射器将上述溶液滴入氯化钙溶液中④将制备的凝胶颗粒，用缓冲液充分洗净备用31、从原料大豆中制备固定化尿酶的流程（写出原料处理、抽题方法、分离纯化方法、干燥和保存）①5g浮石+2%HAC 浸泡2次倾去酸，用蒸馏水反复洗至中性、沥干②称10g豆粉于锥形瓶，加入浮石——加50ml，32%丙酮——水浴10min——4层纱布过滤（滤渣用10ml丙酮再提一次）合并滤液离心36=500rpm、15min——取上清，用2%HAC调pH至4.9——4℃低温保存沉淀即尿酶32、怎样制备溶菌酶33、色谱测酶的步骤34、α—淀粉酶的制备过程，请写出原液的处理液，提取沉淀的方法，初提初步纯化的方法，如何保存。

α—淀粉酶是一种胞外酶，胞外酶的初步分离纯化通常是将发酵液经过预处理后采用过滤或离心的方法将酶液与菌体分离，然后在酶液中加入（NH4）2SO4盐析沉淀获得酶泥，最后干燥即可A1、在实验中，我们通常采用什么方法保证酶促反应的最适温度和最适pH值？答：温度的调节一般采用热水升温、冷水降温；实验室通常是水浴锅来调节最是温度。

调节PH可以通过改变培养基的组分或其比例；使用缓冲液；添加适宜酸、碱溶液。

A2、在实验中，可以采用哪些措施终止酶促反应？答：反应时间到后将反应液立即置于沸水浴，加热使酶失活；加适宜的酶变性剂，使酶失活；加强酸或强碱，使反应液PH迅速远离催化反应的最适PH终止反应；反应结束后立即将反应液置于低温水箱、冰粒堆或盐溶液中，使反应液的温度迅速降至10°以下。

A3、酶的固定化方法有哪些？答：吸附法；包埋法（凝胶包埋法/半透膜包埋法）；结合法（离子结合法/共价结合法）；交联法；热处理法。

A4、酶的抽提剂有哪些？答：盐溶液（0.02-0.5mol/L盐溶液）；酸溶液（PH2-6的水溶液）；碱溶液（PH8-12党的水溶液）；有机溶剂（乙醇、丙酮、丁醇）。

A5、酶反应器有哪些种类？答：搅拌罐式反应器（STR）；填充床式反应器（PCR）；流化床反应器（FBR）；鼓泡式反应器（BCR）；膜反应器（MR）；喷射式反应器（PR）。

A6、什么是酶的回收率及纯化倍数？答：酶的回收率：指固化酶的总活力与用于固定化的总酶活力的百分率。

酶的纯化倍数：酶的纯度倍数=(每次比活力）/（第一次比活力）其中：比活力＝活力单位数／mg蛋白（氮）=总活力单位数/总蛋白（氮）mgA7、在分离纯化酶过程中，为什么要不断测定酶活力及酶蛋白含量？答：因为比活力等于酶的活力（U/ml）/酶的含量。

此实验室酶的提取分离纯化，不断地侧酶活及Pr含量，即可知此时酶比活力，即酶的纯度是否达到要求，也可以知道纯化酶的纯度。

A8、举出几种用来提取酶的有机溶剂？答：乙醇、丙酮、丁醇（用于提取与脂质结合牢固或含有较多的非极性基因的酶），因为他们都具有亲水性和亲脂性。

A9、有机溶剂提取脲酶实验中为什么要在冰浴中操作？答：是用来保护尿酶的活性，而且能使脲酶更多的沉淀。

A10、简述有机溶剂提取酶的原理？答：一是因为有机溶剂亲脂性强，特别是溶解磷脂的能力强；二是兼具亲水性，在溶解度范围内（度为10%，40度为6.6%）不会引起酶的变性失活。

A11、简述等电点沉淀法的原理？答：等电点沉淀法是利用电解质在等电点时溶解度最低而不同的两性物质又具有不同等电点，通过调节溶液的PH，使酶活杂质从溶液中析出沉淀，从而使酶与杂质分离的方法。

A12、简述盐析法的原理？答：盐析法是利用不同蛋白质在不同的盐浓度条件下溶解度不同的特性，通过在酶溶液中添加一定浓度的中性盐，使酶或杂质沉淀析出。

常作盐析的无机盐有氯化钠、硫酸钠、硫酸镁、硫酸铵等。

A13、影响酶活力的主要影响因素有哪些？答：温度、PH、溶氧量、底物浓度、酶浓度、激活剂和抑制剂。

A14、实验“不同浓度果胶酶对澄清苹果汁得率的影响”中加入苹果酸的作用？答:因为在配置不同浓度的果胶酶时分别加入1ml、2ml...不同梯度的果胶酶，为了控制实验的单一变量，使实验的元素处于同一水平，所以分别加入9ml、8ml...的苹果酸。

A15、为什么在澄清果汁时一般不用金属容器？答：因为澄清果汁时是利用果胶酶对果胶质起酯解，水解和裂解作用来澄清，而果胶酶的活性受亚铁、钙离子、锌离子等金属离子的抑制，金属容器中含有亚铁、钙离子、锌离子等金属离子会抑制果胶酶的活性。

A16、在果胶酶澄清果汁实验中，为什么要在100℃保持20分钟？答：因为我们要测不同浓度果胶酶对澄清苹果汁得率的影响。

一般是实验室配置不同浓度的果胶酶溶液，实验时为了消除内在因素的影响，即在100°保持20分钟可使果实中的原含有果胶酶钝化，使不同实验组的初始果胶酶浓度处于同一水平。

A17、PFR的实验模拟制作和应用的要点是什么？答：（1）.填装一定要均匀，装好的柱床，不能有“节”，顶部应十分平坦；（2）.柱床高度（H）与直径之比（H/D）一般以10-20之间；（3）.柱装好后，加1-2个体积的底物缓冲液过柱，以使固定化酶反应条件达到生产时的条件。

A18、酶的生产主要有哪些方式？答：提取分离法、生物合成法、化学合成法。

A19、测定酶蛋白含量的方法有哪些？答：紫外分光光度法凯氏定氮法 Folin-酚试剂法紫外吸收法和考马斯亮蓝法A20、用于包埋固定化酶的凝胶有哪些？答：琼脂凝胶、海藻酸钙凝胶、角叉菜凝胶、明胶、聚丙烯酰胺凝胶、光交联树脂等。