复习：基因工程（又称为DNA重组技术、基因拼接技术）
一、基础填空（共60分）
1、基因工程，其运用的原理是（1分），目的是（1分）
2、操作工具：
（1）手术刀——限制酶：其作用是识别，并使断开（2分），产生两种末端分别为（2分）。

（2）分子缝合针——DNA连接酶：其作用是将拼接成新的DNA分子，形成（2分）；种类有、（2分）
（3）分子运输车——运载体：
其作用是将（1分），种类有（3分），运载体需满足的条件有：、、
、（4分）。

3、实施基因工程的步骤如下：
（1）第一步：获取目的基因，方法有、、（3分）（2）第二步即核心步骤，为（1分）
其目的是使目的基因（2分），
其组成包括（2分）。

启动子启动转录，它是酶的部位（1分），而起始密码子启动位于mRNA上；标记基因的作用是为了（2分），如可作为这种基因（1分）。

（3）第三步：将目的基因导入受体细胞。

目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内维持和的过程，称为（2分）。

将目的基因导入植物细胞的常用方法是，其特点是（2分）；导入动物细胞的方法是（1分），导入微生物细胞的方法是（1分）。

（4）第四步，目的基因的检测与鉴定。

分检测转基因生物的DNA上是否插入了目的基因所用方法为（1分），
子目的基因是否转录出了mRNA，检测方法是（1分）
水基因探针是指（2分）平检测目的基因是否翻译成蛋白质的方法（1分），是从转基因生物中提取（1分），用相应的（1分）进行杂交。

个体水平：进行实验（1分）。

4、基因工程的应用
用转基因动物生产药物，如（1分），需要将药用蛋白基因与（1分）连接在一起，导入动物受精卵内，其乳汁中将含有药物；
也可用来治疗疾病，如基因治疗，是指把导入，使，从而达到治疗疾病的目的（2分）；
另外基因芯片这项高新技术也迅速发展起来，主要用于（1分）。

5、蛋白质工程，又称为（1分）
（1）蛋白质工程的目标：（2分）
（2）蛋白质工程是指以为基础，通过，对或，以满足（4分）。

（3）过程：从预期的蛋白质出发设计预期的蛋白质推测应有的找到相对应的（基因）（4分）。

二、随堂演练（共30分）
1.（2015年海南，15分）
在体内，人胰岛素基因表达可合成出一条称为前胰岛素原的肽链，此肽链在内质网中经酶甲切割掉氨基端一段短肽后成为胰岛素原，进入高尔基体的胰岛素原经酶乙切割去除中间片段C后，产生A、B两条肽链，再经酶丙作用生成由51个氨基酸残基组成的胰岛素。

目前，利用基因工程技术可大量生产胰岛素。

回答下列问题：
（1）人体内合成前胰岛素原的细胞是＿＿＿＿＿，合成胰高血糖素的细胞是＿＿＿＿＿。

（2）可根据胰岛素原的氨基酸序列，设计并合成编码胰岛素原的＿＿＿＿＿序列，用该序列与质粒表达载体构建胰岛素原基因重组表达载体。

再经过细菌转化、筛选及鉴定，即可建立能稳定合成＿＿＿＿＿的基因工程菌。

（3）用胰岛素原抗体检测该工程菌的培养物时，培养液无抗原抗体反应，菌体有抗原抗体反应，则用该工程菌进行工业发酵时，应从＿＿＿＿＿中分离、纯化胰岛素原。

胰岛素原经酶处理便可转变为胰岛素。

【答案】（1）胰岛B细胞胰岛A细胞（2）DNA序列胰岛素原（3）菌体
2.（2014年海南卷，15分）
下面是将某细菌的基因A导入大肠杆菌内，制备“工程菌”的示意图。

请据图回答：
⑴获得A有两条途径：一是以A的mRNA为模板，在酶的催化下，合成互补的单链DNA，然后在作用下合成双链DNA，从而获得所需基因；二是根据目标蛋白质的氨基酸序列，推测出相应的mRNA序列，然后按照碱基互补配对原则，推测其DNA的序列，再通过化学方法合成所需基因。

⑵利用PCR技术扩增DNA时，需要在反应体系中添加的有机物质有、、4种脱氧核苷酸三磷酸和耐热性的DNA聚合酶，扩增过程可以在PCR扩增仪中完成。

⑶由A和载体B拼接形成的C通常称为。

⑷在基因工程中，常用Ca2＋处理D，其目的是。

【答案】（1）逆转录酶DNA聚合酶氨基酸脱氧核苷酸（2）引物（目的基因或A基因）模板（3）基因表达载体（4）使其成为感受态细胞，使大肠杆菌更容易吸收重组DNA分子。