（四）核型分析的方法
1.取材 观察染色体的适宜的材料的选取：凡是能进行 细胞分裂的植物组织和单个细胞都可以作为观察染 色体的材料，比如像一些植物的顶端分生组织（根 尖和茎尖）、居间分生组织、愈伤组织和胚乳、大 小孢子母细胞的减数分裂时期等等。但是并不是随 时取来的材料都可以用。各类材料有自己的特点及 取材操作的注意事项。可以采用种子萌发取根，鳞 茎水培取根，扦插取根和植株上直接取根等等。一 般常用根尖作为材料。对于那些难萌发的种子或有 植株无种子的材料可以用茎尖进行染色体压片.
图2-4 三种杂种（亚洲棉×比克氏棉）×海岛棉杂种F1 的染色体形态图、核型图及核型模式图
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法只能是作为临时保存用，因为随着时间的延长， 染色体也会由于逐渐的缩水而收缩，最后就不能很
清晰的看见染色体。
永久封片的制作
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为了把好的染色体制片长久的保存下来，可以制作 永久封片。作永久封片可以用冰冻脱片封片法，具体 的做法如下：先把制好的染色体制片用冰冻制冷器进 行冷冻，待冷冻后，用刀片把盖波片掀开，这个过程 应该在没有解冻之前完成。然后分别把盖波片和载玻 片放在37℃的烘箱中，将其烘干，等到烘干后，再在 二甲苯中浸泡10-20min，最后用中性树胶进行封片。 在这应该注意的一点是进行封片的时候应该把载玻片 和盖波片分别进行封。当然，还有其他的方法也能进 行制作永久制片。
• 7.（[A2×G1]）×[AD]2杂种F1
（亚比棉×陆地棉 ）杂种F1与其亲本的形态特征比较
器 官 粗 细 主 茎 A2 较粗 G1 细 A2A2G1G1 较粗 (AD)1(无) 粗 (AD)1×(A2G1) 较粗 遗传表现 近似[AD]1, A2
茸 毛
腺 体 (个／cm2) 形 状 大 小 色 泽
保持各种结构的原有状态。
2）固定液：主要使用的固定液是卡诺固定液（1： 3的冰乙酸和无水乙醇）
3）固定所需要的时间：2—24小时，小材料，固定的 时间应短一些，而对于大一些的材料，则固定的时 间可以长一些。
4）固定所需要的温度；一般固定是在低温冰箱里，但
这并不是必需的条件。 5）保存；经过固定后的材料可以保存在70%的酒精中 待用。
披针型
64.0 披针型 较大 有或无 张开 95.3 较大 红色 宽齿长 181.8
披针型
0 宽心脏型 大 有 紧抱 0 大 黄绿 宽有齿 0
披针型
131.0 心脏型 较大 有 张开 53.4 较大 绿 宽齿长 128.0 深粉红色, 基部有红斑 大 黄色 超亲 G1
近似[AD]1, A2
近似[AD]1, A2 近似[AD]1, A2 近似[AD]1, G1 偏向G1 A2, G1 近似[AD]1, G1
亚比棉的染色体形态图、核型图及核型模 式图
图2-4 三种杂种（亚洲棉×比克氏棉）×陆地棉杂种F1 的染色体形态图、核型图及核型模式图
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5.染色
1）常见的染色液 (1) 卡宝品红 (2) 洋红
(3) 地衣红
(4) 树脂蓝 (5)甲苯胺蓝
6.压片操作
取出根尖，将根尖放在载玻片上，用镊子或 刀片切除根冠和伸长区部分，留2——3毫米的分生 区，加约1/3的染色液，再用镊子将材料分割成若干
小块加盖片，在盖片的一角压一硬纸，并用左手食
指压紧以免盖片错动，右手拿解剖针用针尖轻轻敲 击盖片使材料均匀散开。
少而短
272.5 5裂 较大 深绿 少而短 长
多而长
90.0 卵圆 小 灰绿 多而长 短
多而长
110.0 3-5裂 较大 灰绿 多而长 较短
少而长
0 5裂 大 绿 少而短 长
多而长
66.4 卵圆裂叶 较大 灰绿 较多而长 长
偏向G1
A2, G1 [AD]1, A2, G1 近似[AD]1, A2 偏向G1 偏向G1 近似[AD]1, A2
4.解离
1）解离的目的：为了方便压片，对于根尖和茎尖等体 细胞组织，需经过某些处理，以除去细胞之间的果 胶层并能使细胞壁软化。 2）解离方法；（1）酸解离：固定后的材料经50%酒精 洗涤后，再转入蒸馏水中清洗干净后，转入1N盐酸 于60℃恒温处理5-20 min。当然，不同的作物需要 解离的时间也会有所不同。（2）酶解离：一般用果 胶酶、纤维素酶来进行。像做棉花的染色体，在用 盐酸解离之前先用2%的纤维素酶与果胶酶进行解离， 效果比较好
2.核型分析：核型分析就是指对核型的各种
特征进行定量和定性的表述。核型分析是分析
染色体数目和结构变异的基本手段之一。它在
杂种细胞的染色体研究和基因定位，单个染色
体的识别等方面具有重要意义。
什么是染色体分带技术
特殊的染料、染色方法，使同一染色 体的不同区段呈现不同的染色效果－带型， 各种分带技术C、G、Q、R、N的出现，为 染色体的精确鉴别提供了一条崭新的途径。
（一）、形态标记的应用
• 张庆勤等在对燕麦与节节麦、黑小麦的杂交的研究 中，根据杂种后代小穗着生的部位，芒的生长位置， 从形态上验证了在杂种F1 植株中存在有燕麦的特征 性状。 • 田崎通过对来自不同地方的120个小豆品种进行的调 查发现，根据分枝性、主茎的坚实度及柔软度、主 茎基部粗度、最长分枝的长度等4项指标，可以把小 豆株型按照其指数分成A、B、C、D这4个基本类型。 • 任刚通过对黄瓜属种间杂交新种的形态学研究表明， 杂交新种自交一代各个单株除了在节间长和侧枝数 上有差异之外，其他方面均没有差异。
[AD]1,G1互补 A2，G1
花冠颜色
大 小 花药颜色
黄色,基部有红斑
较大 黄色
粉红色,基部有红斑
小 黄色
乳白色,基部无红斑
较大 乳白色
超亲型
超亲型 偏向A2
花
（亚比棉×海岛棉）杂种F1与其亲本的形态特征比较
器 粗细 官 A2 较粗 少而短 272.5 5裂 较大 深绿 少而短 长 披针型 44.7 心脏型 大 无 紧抱 75.3 小 浅绿 微波状 261.7 黄色,基部有红斑 较大 黄色 较多 多而长 短 剑状 205.0 剑状 小 有 张开 182.0 较大 浅绿 线状齿长 157.5 浅粉红,基部有红斑 小 白色 少 多而长 90.0 卵圆 小 灰绿 G1 细 A2A2G1G1 较粗 多而长 110.0 3-5裂 较大 灰绿 多而长 较短 披针型 64.0 披针型 较大 有或无 张开 95.3 较大 红色 宽齿长 181.8 粉红色,基部有红斑 小 黄色 较少 宽心脏型 大 有 紧抱 0 大 浅绿 宽有齿 0 黄色,基部有红斑 较大 黄色 多 宽齿长 40.0 深粉红色基部有红斑 大 黄色 较少 (AD)2(无) 粗 无 0 5裂 大 深绿 无 长 披针型 0 心脏型 较大 有 张开 24.1 较大 绿 宽披针型 133.5 (A2G1) × 较粗 无 63.3 卵圆裂叶 较大 深绿 无 长 (AD)2 遗传表现 近似[AD]2, A2 偏向[AD]2 A 2 , G1 [AD]2, A2, G1 近似[AD]2, A2 近似[AD]2, A2 偏向[AD]2 近似[AD]2, A2 近似[AD]2, A2 G1 近似[AD]2, A2 近似[AD]2, A2 近似[AD]2, G1 偏向G1 A2, G1 近似[AD]2, G1 超亲 [AD]2,G1互补 A2, G1 超亲型 超亲 近似[AD]2, A2 偏向G1
2.预处理
进行预处理的目的主要是（1）防止纺锤体的形 成，因为没有了纺锤体的牵引，就会使的细胞分裂 被迫处于中期阶段，从而能够获得很多的中期分裂 相。（2）材料经过预处理后，就会引起染色体的收 缩，使得染色体能够缩短，这样有利于通过压片，
使得染色体很好的分散开。
3.固定
1）固定目的：主要是利用化学药物能迅速杀死 细胞，从而使得蛋白质变性和沉淀，并能尽量
7.镜检
在显微镜下观察染色体，可以从低倍到高倍，选 染色清晰而又分散很好的中期分裂相，然后可以制 作永久封片。
8.永久封片
• 做出的染色体片子，可以把其放在培养皿里临 时保存。具体的做法是在培养皿里放一张滤纸，把 滤纸浸湿，然后把做好的染色体制片放进去，这样
可以临时保存好所做出的染色体片子，但是这种方
形态学标记（morphological marker）
细胞学标记(cytological marker)
生化标记(biochemical marker)
分子标记(molecular marker)：或DNA标记。
一、形态标记
即植物的外部形态特征。主要包括肉眼可见的外部特征，如： 矮秆、紫鞘、卷叶等；也包括色素、生理特性、生殖特性、 抗病虫性等有关的一些特性。 优点：形态标记简单直观、经济方便； 缺点:(1)数量在多数植物中是很有限的;(2)且多 态性较差，表现易受环境影响，(3)有一些标记与不良性 状连锁。(4)形态标记的获得需要通过诱变、分离纯合的 过程，周期较长。因此形态标记在作物遗传育种中的作用 是有限的。
第二章 遗传标记
本章主要内容
形态标记 细胞学标记
生化标记
分子标记
遗传标记的类型
遗传标记（genetic marker）:指可追踪染色体、 染色体某一节段、某个基因座在家系中传递的任