(1)处死:选择体形而完整的青蛙放入标本缸中用乙醚或三氯甲烷深度麻醉致死。
(2)剔除肌肉:用剪刀剪开腹部皮肤,注意不要剪坏剑胸软骨。
然后向两侧剪开,分别向前后四肢各方向拉下皮肤,要小心不要拉断指、趾骨。
剪开体壁,取出全部内脏。
把左右上肩胛骨的肌肉从第二、三脊椎骨横突上剥离,左右前肢与肩带之间不要分开,仍借助韧带保持相连。
剔除前肢肌肉时,用镊子夹住前肢并放入开水中煮烫,使肌肉发紧变硬,利于剔除。
但时间要短,避免骨连接处分离。
尤其是指、趾骨部位,只需在开水中蘸一下就可以,否则韧带收缩,指、趾骨变弯曲,给整形带来困难。
去除指骨肌肉时,也可先将指骨摆放在载玻片上,用细线缠紧再放入开水中,以防卷曲或脱落。
后肢在股骨与腰带连接处取下来,按前肢处理方法剔除肌肉。
头部和脊柱先在开水中稍微煮下,然后剔除其肌肉。
去掉眼球,从枕骨大孔处用镊子清除脑髓,并用清水冲洗。
在骨骼上,不易剔除的碎小肌肉,可用刷子刷洗,直到清除干净为止。
对薄小的舌骨,应该仔细清除肌肉,然后夹在二片载玻片之间,用线缠紧,自然干燥。
(3)脱脂:把骨骼浸泡在0.5%~0.8%氢氧化钠溶液中1~3天,去除一些难以除去的肌肉,脱去骨骼中的油脂。
在浸泡过程中应经常检查,以防骨骼脱散。
然后取出在清水中漂洗干净。
(4)漂白:用0.5%~1%的过氧化氢漂白30分钟,或者用1%~3%的漂白粉水溶液浸泡1~3天。
浸泡时间应灵活掌握,主要看骨骼是否已经变白,变白后马上捞出,否则,骨面会被腐蚀而变得粗糙,失去骨骼的光泽。
捞出的骨骼用清水冲洗干净并晾干。
(5)整形和装架:取一块泡沫塑料板,将骨骼放在上面。
整形时,把躯体和四肢的姿态整理好并按骨骼相应的位置用大头针固定,以免在干燥过程中变形。
离散的骨骼可以用乳胶将其粘连起来。
两块上肩胛骨就附着在第二、三椎骨横突的两侧,状况略微抬起呈倾斜状,前肢的腕骨和后肢的趾骨可用乳胶粘在泡沫板上。
骨骼标本制成后,最好装入标本盒中保存。
————刘凌云,郑光美.1998.《普通动物学实验指导》(第二版)[M].高等教育出版社,143-144。