不规则抗体筛查标准操作规程(一)检验目的检测受血者、孕妇等血清中是否存在抗A、抗B以外的不规则抗体，为交叉配血、ABO血型正确定型(不规则抗体干扰反定型)以及新生儿溶血病产前、产后诊断提供参考依据。
(二)检验原理1.盐水介质法IgM类不规则抗体可以在室温盐水介质中发生凝集反应，使用手工试管法就可以判断受检者血液中是否存在IgM类不规则抗体。
2.凝聚胺法利用多聚季胺盐类——凝聚胺携带很多正电荷，可以中和红细胞表面的负电荷，使红细胞之间距离减少，引起正常红细胞可逆性凝集。
无抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，当加入中和液后，则凝集消散，而被不规则抗体致敏的红细胞被凝聚胺凝集，则不能消散，以此来判断受检者血液中是否存在不规则抗体。
3.微柱凝胶法微柱凝胶卡的微管中装填有葡聚糖凝胶颗粒和抗人球蛋白试剂，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，凝胶颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过凝胶颗粒，使其悬浮在凝胶上端，未凝集的红细胞则可以通过凝胶颗粒到达微管底部。
4.玻璃珠微柱法微柱卡的每一个微管中装填有直径均一的玻璃微珠和抗人球蛋白试剂(抗-IgG和抗补体C3)，红细胞表面抗原与其对应的IgG抗体结合以后，在离心力的作用下不断向管底沉降，并与抗人球蛋白结合形成红细胞凝集，玻璃微珠具有分子筛的作用，可以阻滞凝集的红细胞在离心力的作用下通过玻璃微珠，使其悬浮在玻璃微珠层的上端，而未凝集的红细胞则可以通过玻璃微珠之间的微小空隙到达微管底部。
(三)适用范围适用于手工凝聚胺法、手工微柱凝胶法、手工玻璃珠微柱法、全自动微柱凝胶法、全自动玻璃珠微柱法不规则抗体筛查及鉴定试验。
(四)设备性能参数各种用于不规则抗体筛查试验的检测系统性能指标参见相应说明书。
(五)器材与试剂1.器材KA-2200血清学专用离心机、B600-A型低速离心机、WADiana全自动血型配血系统、SWING-SAXO血型配血系统、Techno全自动血型配血系统、Othro Au-toVuelnnova全自动血型配血系统、阅片灯箱、卡式专用离心机、孵育器、塑料软试管、塑料硬质试管(75m m×l2mm)、试管架、一次性塑料滴管、记号笔、移液器、一次性移液枪头。
2.试剂Diana DG Gel Coombs卡、DiaMed Coombs卡、Othro BioVue Coombs卡、生理盐水、凝聚胺配套试剂(LIM 液、Re-suspending液、Polybrene液)专用稀释液(DII.2、DG GEL sol或BLISS液)、3系3％抗筛细胞、3系1％抗筛细胞、10系或16系1％鉴定谱细胞(可由3％鉴定谱细胞经专用稀释液稀释获得)。
(六)样本要求EDTA-K2或EDTA-K3：抗凝静脉血≥3ml，经B600-A 型离心机在1 760g条件下，离心5分钟，离心后无溶血及明显乳糜。
紧急情况下可以使用抗凝动脉血。
(七)校准步骤各类全自动血型检测系统的校准操作过程分别见《WADiana全自动血型配血系统标准操作规程胍SWING-SAXO血型配血系统标准操作规程》《Techno全自动血型配血系统标准操作规程》《Othro AutoVue lnnova全自动血型配血系统标准操作规程》。
(八)操作程序1.盐水介质法不规则抗体筛查及鉴定操作程序(1)取4支洁净硬质试管分别做好标记I、Ⅱ、Ⅲ、自身对照。
(2)每支试管中分别加入患者血浆(或血清)2滴，再加入相应3％I、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞和自身红细胞各1滴并混匀。
(3)使用血清学专用离心机在1 000g条件下离心15秒。
(4)结果判定：一系或多系红细胞发生凝集，自身对照不凝集的判断为阳性，提示存在IgM类不规则抗体。
2.手工凝聚胺法不规则抗体筛查及鉴定操作程序(1)取3支洁净硬质试管分别做好标记I、Ⅱ、Ⅲ。
(2)每支试管中分别加入患者血浆(或血清)2滴，再加入相应3％I、Ⅱ、Ⅲ号筛选细胞1滴并混匀。
(3)在每支试管中加入低离子液(LIM)0.65ml及聚凝胺(Polybrene)试剂2滴混匀，血清学专用离心机在1 000g条件下，离心15秒。
(4)离心后弃上清，不要沥干，观察细胞扣，轻轻振摇，如果有凝集现象则加入重悬液2滴，拖拉辗转，1分钟内观察结果：3管中任意1管或多管出现凝集者为抗体筛选阳性，应进一步使用10系或16系谱细胞鉴定抗体的特异性，操作方法与筛查试验相同，同时应加自身对照管，以判断自身抗体同时存在的可能性。
3管均无凝集为阴性。
3.手工微柱凝胶法不规则抗体筛查及鉴定操作程序(1)按试验所需取相应张数(反应孔数)的凝胶Coombs卡(Diana／DiaMed)，撕掉卡上的封口锡纸，剩余孔保留锡纸，在反应孔的下方分别标明患者姓名和筛查细胞系别。
(2)先将3系1％抗筛细胞各50µ1分别加入相应的反应孔中，再将患者血清(或血浆)25µl依次加入相应反应孔内。
(3)加样完毕，重新将锡纸盖好，将凝胶卡放入卡架中，连同卡架一起放入专用的孵育器37℃孵育15分钟。
(4)放入配套的专用离心机，按要求离心10分钟。
(5)目测并记录结果，任何一系或多系细胞出现阳性结果，抗筛结果即为阳性，应转入抗体鉴定试验。
(6)使用10系或16系1％鉴定谱细胞进行抗体特异性鉴定，操作步骤与抗体筛查相似，只是细胞谱由3系增加到10系或16系，同时需要增加自身对照孔，以判断自身抗体同时存在的可能性。
4.手工玻璃珠微柱法不规则抗体筛查及鉴定操作程序(1)按实验所需取相应张数(反应孔数)的玻璃珠微柱Coombs卡，撕掉卡上的封口锡纸，剩余孔保留锡纸，在反应孔的下方分别标明患者姓名和筛查细胞系别。
(2)先向每个反应柱内加入50µ1 BILSS液，再分别向反应柱内加入10µl 3％I、Ⅱ、Ⅲ号抗筛红细胞。
最后向反应柱内加入40µl患者血清或血浆。
注意，加样时，枪头请勿触及微柱管壁。
观察柱中的反应物各组分是否混匀，必要时轻弹几下微柱充分，使反应物混匀。
(3)加样完毕，重新将锡纸盖好，将玻璃珠微柱卡放入卡架中，连同卡架一起放入专用的孵育器37℃孵育15分钟。
(4)Biovue离心机离心5分钟，离心必须在加样后30分钟内进行。
(5)目测并记录结果，任何一系或多系细胞出现阳性结果，抗筛结果即为阳性，应转入不规则抗体鉴定试验。
(6)使用10系或16系1％谱细胞进行抗体特异性鉴定，操作步骤与抗体筛查相似，只是细胞谱由3系增加到10系或16系，同时需要增加自身对照孔，以判断自身抗体同时存在的可能性。
5.WADiana全自动不规则抗体筛查操作程序参照《WADiana全自动血型配血系统标准操作规程》进行。
6.SWING-SAXO系统不规则抗体筛查操作程序参照《SWING-SAXO血型配血系统标准操作规程》进行。
7.Techno全自动血型／配血系统不规则抗体筛查操作程序参照《Techno全自动血型配血系统标准操作规程》进行。
8.Othro AutoVue lnnova全自动不规则抗体筛查操作程序参照《Othro Au-toVuelnnova全自动血型配血系统标准操作规程》进行。
9.检验结果的输入与确认(1)启动“检验程序”，输入用户名及口令后，进入检验程序。
(2)非传输结果及镜检结果的‘输入：单击“检验”菜单，选择“检验结果录入／修改”，通过申请序号或ID号进行检验结果的录入及修改。
(3)检验结果的确认：检验结果应由实验室负责人或授权人员进行确认，方法为单击“结果处理”菜单，选择“报告确认”进入结果确认，通过选择“工作单元”“报告日期”“单张”或“批量”后，按“提取”键提取已经传输或录入的检验结果，经两人核对无误后按“确认”键进行确认。
(九)质量控制1.室内质量控制(1)凝聚胺试剂：每日(或当日更换试剂包装时)进行试剂质控，具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行。
(2)手工抗人球蛋白试剂：每日(或当日更换试剂批号时)进行过程质控，具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行。
(3)手工及全自动卡式抗人球法：每日(或当日更换试剂批号时)进行过程质控，具体操作参照《输血相容性检测室内质量控制管理制度》进行。
2.室间质量评价参加卫生部临检中心组织的全国输血相容性检测室间质量评价活动。
(十)干扰因素1.严重的黄疽、溶血或脂血使全自动血型检测系统判读结果时出现假阳性。
2.冷凝集素或异常球蛋白增高会使红细胞出现异常凝集，出现假阳性结果。
(十一)结果计算及测量不确定度不适用。
(十二)生物参考区间阴性。
(十三)检验结果可报告区间阴性或阳性。
(十四)警告／危急值不规则抗体筛查结果阳性，条件具备时应进行抗体鉴定，而后应立即进行配血筛查，寻找合适的供者。
如果找不到合适的供者，应及时通知临床医生(手术患者应停止手术或手术延期)；如果找到合适的供者，需要和临床医生确认申请量是否足够，是否需要追加申请量。
(十五)实验室解释不规则抗体筛查试验结果阳性可能是由于既往输血、妊娠原因导致，也有部分不规则抗体在无明确抗原刺激条件下自然产生。
阳性结果可能会造成配血困难，提高新生儿溶血病的发生概率。
(十六)安全性预警措施1.实验室及工作人员一般安全防护措施参见《实验室安全与卫生管理制度》。
2.发生血液标本溢出时，应参照《实验室消毒与清洁管理制度》对污染的环境进行消毒处理。
3.操作人员发生职业暴露时，应参照《实验室职业暴露预防与处置管理制度》及时进行相应处理。
4.在仪器运转过程中，勿触及样品针、移动的传输装置等，避免造成人身伤害。
禁止触摸仪器密封面板内的电路，防止造成电击损伤。
5.对突发传染性疾病的血液标本应启动特殊的安全防护程序。
(十七)变异潜在来源产生不规则抗体的患者多数由于后天免疫造成，一般都有输血史或妊娠史，少数人也会产生天然抗体。
(十八)不规则抗体筛查试验特别注意事项1.凝聚胺法(1)离心后，倒掉上清，不要沥干，让管底残留约0.1ml 液体。
(2)按照加样顺序进行结果观察，确保每一个反应结果都能在1分钟内观察，否则弱凝集散开会出现假阴性。
(3)凝聚胺法可能造成某些低效价或低反应活性的IgG 类不规则抗体漏检。
2.手工微柱凝胶法(1)凝胶卡手工加样顺序：先加红细胞悬液，后加血清或血浆，红细胞均为o.8％～1％的反应浓度。
(2)稀释液要室温平衡15分钟以上。
3.全自动卡式不规则抗体筛查参照各仪器标准操作规程中约定的注意事项。
4.微柱(凝胶、玻璃珠)抗人球法此类方法因在37℃条件下检测可能造成某些低效价IgM不规则抗体漏检，但此类抗体在37℃时多无反应活性或反应活性低而无临床意义。
当怀疑漏检的不规则抗体影响血型鉴定或交叉配血时，应增加盐水介质不规则抗体筛查和(或)抗体鉴定试验，发现并确定抗体的特异性，以消除其对血型鉴定或交叉配血的干扰。