5）．可有几种质粒同时共存在于一个细菌内。
2.质粒的分类
1）能否通过细菌的结合作用进行转移 结合性质粒 非结合性质粒 2）质粒在宿主菌内拷贝数的多少 严紧型质粒 松弛型质粒 3）质粒的相容与不相容性 两种结构相似、密切相关的质粒不能稳定共存于一个 宿主菌；结构相差较大、互不相干的质粒可以共存于 同一个菌体。 4）质粒的来源不同 天然质粒 人工构建质粒
毒性程度
致热性
高，往往致死。
对宿主不发热
弱，很少致死。
致，可刺激机体产生高效价的抗 弱，免疫应答不足以中和毒 毒素。 性。
甲醛处理，可脱毒成为类毒霉 不能产生
三、III 型分泌系统
（一）功能
与许多G-病原菌毒力因子的分泌有关。具有接触介 导的特征。病原菌与宿主细胞接触后，便立即启动 III 型分泌系统，启动后细菌分泌大量与毒力有关的 多种蛋白质，从细菌的胞浆直接进入宿主胞浆，发 挥毒性作用。
2.干扰或逃避宿 主的防御机制
抗体液免疫机制
3.内化作用
定义、意义
•抗原伪装或变异 •分泌蛋白酶降解Ig •通过LPS、OPM、 荚膜及S层逃避补体， 抑制抗体
4.在体内增殖 5.在体内扩散
胞外蛋白酶
透明质酸酶 纤维蛋白酶 血浆凝固酶 卵磷脂酶 胶原酶 脱氧核糖核酸酶
作用
二、毒素
细菌毒素可分为外毒素和内毒素两大类。 （一）外毒素（Exotoxin） 1.概念: 2.来源 :主要是某些革兰氏阳性菌，也有少数是革兰氏 阴性菌。 3.化学成分：一般外毒素是蛋白质 。
区别要点
化学性质
外毒素
蛋白质
内毒素
脂多糖（毒性主要为类脂 A ）
产生
稳定性 毒性作用
以革兰氏阳性菌或少量革兰氏阴 为革兰氏阴性细菌细胞壁结 性菌分泌至细菌体外。 构成份，菌体崩解后释出
不稳定，60℃以上能迅速破坏 耐热，60℃耐受数小时
特异性。为细胞毒素、肠毒素、 全身性，各种细菌内素的毒 神经毒素，对特定的细胞或组织 性作用大致相同。引起发热、 发挥特定作用。 弥漫性血管内凝血、休克等。
2.基因工程载体必须具备下列条件：
1）环状DNA结构 2）具有限制性内切酶的位点，以便与外源基因 连接 3）可不依赖于染色体进行独立复制 4）具有有别于宿主的选择性标记 5）可通过特定方法导入某些宿主细胞
3.基因工程载体分类
拷贝数高
克隆载体 具有单（多）克隆位点
载体本身带有一个或多个选择标记
功能不同
3.转座噬菌体或前噬菌体
– 是一些具有转座功能的溶原性噬菌体，当
整合到细菌染色体上，能改变溶原性细菌 的某些生物学性状，如白喉棒状杆菌、肉 毒梭菌等的外毒素就是由转座噬菌体的有 关基因所编码的。另外，转座噬菌体从细 菌染色体分离脱落时，可能连带有细菌的 DNA片段，故它还可能在遗传物质转移过 程中起载体作用。
（二）内毒素（Eedotoxin） 1.概念： 2.化学成份：内毒宿主要成份为脂多糖（LPS）。 3.内毒素的作用
A、发热反应：内毒素作为外源性致热原（即热原质）作用于 粒细胞和单核细胞等，使之释放内源性致热原，如IL-1,引起发 热。
B、糖代谢紊乱：先发生高血糖，后转而为低血糖，大量糖原 消耗，可能与肾上腺素大量分泌有关 。
经典柯赫法则：
1、病原菌应在同一疾病中 查出，而健康者不存在。
2、病原菌能够体外获得纯 培养。
3、此纯培养物接种易感动 物能导致相同的病症。 4、自感染动物体内能重新 分离到该病原菌的纯培养。
思考题
某鸡场爆发疾病，鸡大量死亡，对病死鸡 剖检，发现其肝脏质脆，且内有大量大小 不一的出血点，取肝脏组织涂片在显微镜 下观察发现有细菌，如何验证此菌即为病 原菌？
C、血管舒缩机能紊乱：内毒素激活血管活性物质（ 5-羟色胺、 激肽释放酶和激肽）的释放。
D、弥漫性血管内凝血（Disseminated intravascular coagulation，DIC）：内毒素活化凝 血系统XII因子。纤维蛋白原转为纤维蛋白。 E、施瓦兹曼现象(Shwartzman phenomenon)：是 由内毒素引起DIC的一种特殊形式。 4.特性 ： （ 1 ）毒性作用比外毒素弱，且毒性作用没特异性。 （2）抗原性弱，仅能刺激机体产生微量的抗毒素。 （3）耐热。 （三）外毒素与内毒素的区别
特殊用途的载体
除具有克隆载体的一般特性以外 ，还具有一套表达元件： 启动子、SD序列、终止子
表达载体
4、质粒作为载体
EcoRI 酶切
AA T T C TT A A G
G AA T T C T T AA
转化
PCR
1、高温变性 2、低温复性
3、一定温度延伸
三、转座因子
存在于细菌染色体上，可作为独立单位在 染色体上自由移动的 DNA 片断。转座因子有三 种类型：插入序列（ IS）、转座子（ Tn）、及 特殊噬菌体。
– 长度一般超过2kb，除携带与转位有关的基
因外，还携带耐药性基因、抗金属基因、毒 素基因及其他结构基因等。因此当Tn插入某 一基因时，一方面可引起插入基因失活产生 基因突变，另一方面可因带入耐药性基因而 使细菌获得耐药性。转座子可能与细菌的多 重耐药性有关。
IS
Resistance Gene(s)
荚膜
具有抵抗吞噬及体液中杀菌物质的杀 灭作用。
(3)与毒 力相关 的细菌 表面结 构物质
菌毛 细菌的普通菌毛
其他 表面 结构
沙门氏菌Vi抗原、大肠杆菌 K抗原、链球菌表面的M抗 原等都有抗吞噬作用。
结合杆菌表面特殊的脂类
（二）侵袭过程
1.定殖（又称定居）
黏附素 抗吞噬作用
•不与吞噬细胞接触 •抑制吞噬细胞摄取 •在吞噬细胞内生存 •杀死或损伤吞噬细胞
（二）构成 由30-40kb大小基因组编码，以毒力岛的形式存在 于细菌质粒或染色体。
第三节 病原菌与传染
传染：病原微生物侵入动物机体，在一定部位定居并生长 繁殖，产生有毒物质，引起机体出现一系列病理生理现象 反应。又叫感染。
一、病原菌引起传染的必要条件
（一）病原菌方面 1.病原菌必须具有一定的毒力： 2.病原菌要达到一定数量： 3.病原菌要有适宜的侵入门户： （二）动物方面 种类、性别、年龄、体质、抗感染能力 （三）外界环境
3.细菌致病性的确定依据
基因水平的科赫法则： 1、在致病菌中检出某些基因 或其产物，而无毒力菌株中 无。 2、毒力菌株的某个基因被损 害，则毒株的毒力应减弱或 消除，或者将此基因插入到 无毒力菌株中，表现为有毒 力菌株特性。 3、将细菌接种动物时，该基 因应在感染的过程得到表答。 4、在接种动物检测到该基因 表达产物的抗体或产生免疫 保护。
5.特性：（1）有菌种特异性。 （2）毒性强。（3）具 有高度的特异性。（4）良好的抗原性。（5） 不耐热。 （6）0.3%~0.4%甲醛作用下，可以 脱毒成类毒素。
6.组成 A亚单位：毒素活性中心，决定毒素的毒性效应
B亚单位：结合单位，使毒素分子结合宿主细胞 膜受体上，协助A亚单位穿过细胞膜
7.分类 A-B型毒素 攻膜毒素 超抗原毒素
4、细菌基因组中，不编码的DNA序列很少，只有 少数基因具有重复序列，功能相关的基因高度集 中，组合成操纵子。
5、细菌具有连续的基因结构，无内含子
二、质粒
1.质粒的特点
1）．质粒并非细菌生存所必不可少的遗传物质。 2）．质粒的传递（转移）是细菌遗传物质转移的
一个重 要方式。
3）．质粒可自行失去或经人工处理而消失。 4）．质粒可以独立复制。
第二节
细菌的毒力因子
构成病原菌毒力的物质主要是侵袭力和毒素。
荚膜及其他物质
侵袭力
细菌的毒力 毒素 酶类
外毒素 内毒素
一、侵袭力
（一）概念：是指细菌突破机体的防御屏障，在体
内定居、内化、繁殖及扩散的能力。
（二）细菌侵袭力构成
（1）细菌分泌的胞外酶 也称蛋白酶，本身无毒性，但在细菌感染的过程中
有一定作用。 （2）细菌分泌的与侵袭力有关的胞外酶 血浆凝固酶 纤维蛋白酶 透明质酸酶 其他酶类
3.带菌现象：隐性传染或传染病痊愈后，病原菌在动物 体内继续存在，并不断排出体外，称带菌现象。呈带 菌状态的动物称为带菌者。
三、病原菌在宿主体内的分布
1.局部传染：
2.全身传染：
（1）毒血症： （2）菌血症： （3）败血症： （4）脓毒血症：
第四节 细菌毒力的增强与减弱
一、毒力减弱的方法 二、毒力增强的方法


耐药性质粒 编码细菌对抗菌药物或重金属盐类的耐药性。 毒力质粒（Vi质粒）（virulence plasmid） 编码与该菌致病性有关的毒力因子。
细菌素质粒 编码各种细菌产生的细菌素。 代谢质粒 编码产生相关的代谢酶。
人工构建的质粒 1.人工构建质粒的目的： 人工构建的质粒主要用于基因工程技 术，在该技术中质粒主要被用作载体。 基因工程的程序： （1）获取所需要的基因 （2）将目的基因与载体连接 （3）将重组DNA导入到受体细胞，外源基 因得到表达。
IS
IS
Resistance Gene(s)
IS
转座子的特征
转座子 Tn1 Tn2 Tn3 Tn4 Tn5 Tn6 Tn7 Tn9 Tn10 tn551 Tn971 Tn1681 携带耐药或毒素基因 AP（氨苄青霉素） AP、SM（链霉素）、Su（磺胺） Km（卡那霉素） Km TMP（甲氧苄氨嘧啶）、SM Cm（氯霉素） Tc（四环素） Em（红霉素） Em 大肠埃希菌（肠毒素基因）
1.插入序列（insertion sequence,IS）
– 是最小的转位因子，长度不超过2kb，不携
带任何已知与插入功能无关的基因区域，往 往是插入后与插入点附近的序列共同起作用， 可能是原细胞正常代谢的调节开关之一。