基因工程简答题综述基因工程原理回顾，思考问题5，简要描述同型尾酶和同型裂解酶的区别。
同尾酶:不同来源的鉴定序列是不同的，但是它们可以切掉相同的粘性末端，并且在连接后不能被相关酶同时切掉。
分解酶:识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。
部分异构酶和不完全异构酶(PS:完全均裂酶:识别位置和切点完全相同。
不完全异构酶:识别位置是相同的，但切割点不同。
)6.连接酶的主要类型有哪些？有什么相同点和不同点？影响连接酶连接效果的主要因素是什么？类型:脱氧核糖核酸连接酶和核糖核酸连接酶的异同；同样的一点:脱氧核糖核酸可以用作模板，进行从5’到3’的核苷酸或脱氧核苷酸聚合。
差异:DNA聚合酶识别脱氧核苷酸，并在DNA复制中发挥作用。
核糖核酸聚合酶聚合核糖核苷酸，并在转录中发挥作用。
7.试着分析提高平端连接效率的可能方法。
(在线答案图例)1.低温下的长期连接效率优于室温下的短期连接。
2.向系统中加入少量载体切割酶，只要连接后原始酶切割位点消失。
这样，可以避免载体的自连接，并且平端连接的效率应该大大提高。
3.足够的向量和插入是最重要的。
4.平端的连接对离子浓度非常敏感。
5.尽可能减少连接反应的体积6.建议把它放在四度冰箱里连接两天。
效率高于14度。
8.基因工程中常用的主要DNA聚合酶是什么？1)大肠杆菌脱氧核糖核酸聚合酶2)克氏片段3)T7脱氧核糖核酸聚合酶4)T4脱氧核糖核酸聚合酶5)修饰的T7脱氧核糖核酸聚合酶6)逆转录酶7)Taq脱氧核糖核酸聚合酶第4章基因克隆载体系统1、作为基因工程的载体，它应该具备哪些条件？对受体细胞具有亲和力或亲和力(可转移性)；！有适当的筛选标志；！具有较高的外源DNA负载量；！具有多个克隆位点；！它具有适合特定受体细胞的复制位点或整合位点。
3.承运人的主要类型是什么？如何在基因工程操作中选择载体？基因工程中常用的载体主要包括质粒、噬菌体和病毒。
这些载体需要人工构建以去除致病基因并赋予一些新的功能，例如用于筛选的标记基因和单限制性内切酶。
4.质粒转化的原理以及影响转化率的因素是什么？一、化学法(氯化钙法)转换原理:正是Ca2和细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构。
后者因热脉冲而收缩，使细胞膜变空。
质粒或DNA重组分子可以进入细胞(感受态细胞)。
电穿孔转化原理:将待转化的质粒或DNA重组连接液加入到电穿孔转化仪的样品池中，在两极施加高压电场，在强电场的作用下，细菌细胞壁和细胞膜之间产生间隙，质粒或DNA重组分子可以进入细胞。
影响转化率的主要因素载体的性质及其空间构象；超螺旋构象的转化率最高。
2)插入尺寸:插入片段越大，转化效率越低。
3)受体细胞的类型和预处理；4)转换方法:电击法高于化学法。
5.选择重组分子的主要方法是什么？对其原理也作了简要描述。
一般来说，重组分子的选择和鉴定方法基本上可以分为以下几种:(1)在构建基于载体遗传标记检测方法基因工程载体系统时，载体DNA分子通常携带某些选择性遗传标记基因，且在转化或转染宿主细胞后，后者可表现出特殊的表型或遗传特征，从而可进行转化体或重组体的初步筛选。
(2)基于克隆DNA序列检测方法-5，简述同尾之间的区别同尾酶:不同来源的鉴定序列是不同的，但是它们可以切掉相同的粘性末端，并且在连接后不能被相关酶同时切掉。
分解酶:识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。
部分异构酶和不完全异构酶(PS:完全均裂酶:识别位置和切点完全相同。
不完全异构酶:识别位置是相同的，但切割点不同。
)6.连接酶的主要类型有哪些？有什么相同点和不同点？影响连接酶连接效果的主要因素是什么？类型:脱氧核糖核酸连接酶和核糖核酸连接酶的异同；同样的一点:脱氧核糖核酸可以用作模板，进行从5’到3’的核苷酸或脱氧核苷酸聚合。
差异:DNA聚合酶识别脱氧核苷酸，并在DNA复制中发挥作用。
核糖核酸聚合酶聚合核糖核苷酸，并在转录中发挥作用。
7.试着分析提高平端连接效率的可能方法。
(在线答案图例)1.低温下的长期连接效率优于室温下的短期连接。
2.向系统中加入少量载体切割酶，只要连接后原始酶切割位点消失。
这样，可以避免载体的自连接，并且平端连接的效率应该大大提高。
3.足够的向量和插入是最重要的。
4.平端的连接对离子浓度非常敏感。
5.尽可能减少连接反应的体积6.建议把它放在四度冰箱里连接两天。
效率高于14度。
8.基因工程中常用的主要DNA聚合酶是什么？1)大肠杆菌脱氧核糖核酸聚合酶2)克氏片段3)T7脱氧核糖核酸聚合酶4)T4脱氧核糖核酸聚合酶5)修饰的T7脱氧核糖核酸聚合酶6)逆转录酶7)Taq脱氧核糖核酸聚合酶第4章基因克隆载体系统1、作为基因工程的载体，它应该具备哪些条件？对受体细胞具有亲和力或亲和力(可转移性)；！有适当的筛选标志；！具有较高的外源DNA负载量；！具有多个克隆位点；！它具有适合特定受体细胞的复制位点或整合位点。
3.承运人的主要类型是什么？如何在基因工程操作中选择载体？基因工程中常用的载体主要包括质粒、噬菌体和病毒。
这些载体需要人工构建以去除致病基因并赋予一些新的功能，例如用于筛选的标记基因和单限制性内切酶。
4.质粒转化的原理以及影响转化率的因素是什么？一、化学法(氯化钙法)转换原理:正是Ca2和细菌外膜磷脂在低温下形成液晶结构。
后者因热脉冲而收缩，使细胞膜变空。
质粒或DNA重组分子可以进入细胞(感受态细胞)。
电穿孔转化原理:将待转化的质粒或DNA重组连接液加入到电穿孔转化仪的样品池中，在两极施加高压电场，在强电场的作用下，细菌细胞壁和细胞膜之间产生间隙，质粒或DNA重组分子可以进入细胞。
影响转化率的主要因素载体的性质及其空间构象；超螺旋构象的转化率最高。
2)插入尺寸:插入片段越大，转化效率越低。
3)受体细胞的类型和预处理；4)转换方法:电击法高于化学法。
5.选择重组分子的主要方法是什么？对其原理也作了简要描述。
一般来说，重组分子的选择和鉴定方法基本上可以分为以下几种:(1)在构建基于载体遗传标记检测方法基因工程载体系统时，载体DNA分子通常携带某些选择性遗传标记基因，且在转化或转染宿主细胞后，后者可表现出特殊的表型或遗传特征，从而可进行转化体或重组体的初步筛选。
(2)基于克隆的DNA序列的检测:λ噬菌体、YAC、BAC、粘粒等。
基因文库构建的一般步骤如下:(1)染色体DNA 大片段的制备(1)酶切法(2)物理切割法(2)载体与基因组DNA大片段的连接(1)粘性末端的直接连接(2)人工连接法(3)受体的转导(4)重组c DNA的筛选:以核糖核酸为模板合成的互补脱氧核苷酸序列。
CDNA文库:从某一生物基因组转录的所有基因都被反向转录，产生各种不同的基因，这些基因分别与克隆载体重组，并储存在受体细菌群体中，这种群体被称为基因文库。
cDNA文库和基因组文库的区别在于cDNA文库具有时效性。
cDNA文库的特点和优势:分离的目的基因可直接用于表达；它比DNA文库小得多，而且易于构建。
仅与编码序列相关；无法反映内含子；构建不能反映核糖体识别的启动子、终止子和序列的cDNA文库的一般步骤:(1)总RNA提取(2)mRNA分离和纯化(1)原理:从总核糖核酸(核糖核酸、核糖核酸等)中分离并纯化出核糖核酸。
)通过使用含有聚腺苷酸尾的信使核糖核酸。
(2)信使核糖核酸柱的分离和纯化(3)合成信使核糖核酸(1)合成信使核糖核酸第一链(2)降解信使核糖核酸模板(3)合成信使核糖核酸第二链(合成信使核糖核酸第二链有四种方法:自导向合成、置换合成、导向合成和引物衔接合成)。
(4)cDNA与载体相连:(5)包装噬菌体颗粒并化学合成用于转染或质粒转化的基因(导入宿主中进行繁殖):寡核苷酸单链的化学合成；探针的化学合成；连接器和接头的合成；基因的半合成；全长基因化学合成目标基因的分离；感兴趣的序列是已知的:通常，聚合酶链反应或分子杂交用于分离和克隆目标基因。
目标序列未知:差异表达序列；对于无差异表达的靶序列，可以采用文库筛选法、功能蛋白分离法和序列克隆法。
第七章高级动物基因工程1.基因导入细胞的方法物理方法:裸DNA的直接注射、电穿孔和显微注射的化学方法:磷酸钙共沉淀，DEAE-(1)染色体DNA大片段的制备①酶促裂解②物理裂解②载体与基因组DNA大片段之间的连接①内聚端直接连接②人工连接③受体转导(4)重组c DNA的筛选:以核糖核酸为模板合成的互补脱氧核苷酸序列。
CDNA文库:从某一生物基因组转录的所有基因都被反向转录，产生各种不同的基因，这些基因分别与克隆载体重组，并储存在受体细菌群体中，这种群体被称为基因文库。
cDNA文库和基因组文库的区别在于cDNA文库具有时效性。
cDNA文库的特点和优势:分离的目的基因可直接用于表达；它比DNA文库小得多，而且易于构建。
仅与编码序列相关；无法反映内含子；构建不能反映核糖体识别的启动子、终止子和序列的cDNA文库的一般步骤:(1)总RNA提取(2)mRNA分离和纯化(1)原理:从总核糖核酸(核糖核酸、核糖核酸等)中分离并纯化出核糖核酸。
)通过使用含有聚腺苷酸尾的信使核糖核酸。
(2)信使核糖核酸柱的分离和纯化(3)合成信使核糖核酸(1)合成信使核糖核酸第一链(2)降解信使核糖核酸模板(3)合成信使核糖核酸第二链(合成信使核糖核酸第二链有四种方法:自导向合成、置换合成、导向合成和引物衔接合成)。
(4)cDNA与载体相连:(5)包装噬菌体颗粒并化学合成用于转染或质粒转化的基因(导入宿主中进行繁殖):寡核苷酸单链的化学合成；探针的化学合成；连接器和连接的合成基因的半合成；全长基因化学合成目标基因的分离；感兴趣的序列是已知的:通常，聚合酶链反应或分子杂交用于分离和克隆目标基因。
目标序列未知:差异表达序列；对于无差异表达的靶序列，可以采用文库筛选法、功能蛋白分离法和序列克隆法。
第七章高级动物基因工程1.基因导入细胞的方法物理方法:裸DNA的直接注射、电穿孔和显微注射的化学方法:磷酸钙共沉淀，DEAE:腺病毒，SV40，腺相关病毒，逆转录病毒，人类痘苗病毒，疱疹病毒等。
逆转录病毒(单链核糖核酸病毒)的优势:a、宿主范围广(几乎所有类型的哺乳动物细胞)b、效率高，能感染大量细胞，通常一次能感染106 ~ 107个细胞c，外源DNA在整合过程中不重排，单位点少，拷贝整合率低(一般不超过5个)的缺点:A.只有分裂细胞B被感染，携带外源基因的长度是有限的(8kb)，载体病毒基因具有潜在的致病性。
例如，在载体和人内源性逆转录病毒(HERV)序列之间存在潜在的D和重组危险，以产生具有传染性的人逆转录病毒词范例。