分光光度法
液相色谱法
总黄酮 吸收度（Ａ）
含量（％）
三对照品 单对照品 测定法（％） 测定法（％）
０．６５４０
３２．７０
２６．５６
２５．９１
０．６２３０
３１．０２
２５．２５
２５．６０
０．６５１０
３２．４０
２５．９６
２５．２０
０．８１５０
４０．７０
３２．０２
３１．８０
０．７７４０
３８．６０

２９．５０
２９．０３
文献中有采用紫外可见分光光度法［６￣７］，也有采用高效液 相色谱法来测定银杏叶总酮的含量［８￣９］。我们在实验中，分别 采用紫外可见分光光度法和高效液相色谱法对银杏叶提取
物总黄酮进行含量测定：ＵＶ 测得总黄酮平均含量 ３３．８７％， ＨＰＬＣ 以三对照品法测得为 ２６．５７％，ＲＳＤ＝２．１２％。经分析与 比较认为，紫外可见分光光度法作为一种简便、准确的质量 控制方法，可应用于工厂的实际生产工作中。 1、材料与仪器 １．１、材料
０．５６１０
２７．８２
２０．１５
２０．７５
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表 ２ 不同对照品测定银杏叶总黄酮含量结果
样本来源（６ 月中旬 三对照品
单对照品
采摘） 郑州 ４ 年幼苗 郑州 ３ 年幼苗 郑州 ２ 年幼苗 嵩县 ２０ 年以上 嵩县 ４ 年幼苗
２．２．１．２ 测定条件选择 以芦丁为对照品，取银杏叶提取物约 ０．０２ｇ 置于 １０ｍｌ
量瓶中，同上操作，以试液作空白，分别加入 ＮａＮＯ２ 溶液 （０．１－ ０．４ｍｌ），Ａ１ （ＮＯ３）３ 溶 液 （０．１－ ０．４ｍｌ） 和 ＮａＯＨ 溶 液 （０．５－ ４．０ｍｌ），测得的吸收度基本不变，说明黄酮类化合物与 三价铝离子形成的络合物是稳定的。在系统中分别加入芦丁
K ey wor ds：Ginkgo biloba Ｌ．； ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ； ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｇｒａｐｈ； ＨＰＬＣ； ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ； Ｒｅｆｉｎｉｎｇ ｐｒｏｃｅｓｓ．
银杏 Ginkgo biloba L．古代孑遗植物，其功效最早记载于 《神农本草经》，具有润肺、平喘、止咳等功效。系为银杏科银 杏属植物，又名公孙树，为我国特有树种。银杏叶为银杏的干 燥叶，其提取物中主要含有黄酮类化合物和二萜类化合物， 它们具有改善心脑血管循环、抑制血小板凝聚酶、抗菌、抗病 毒、抗癌等作用［１］。近年来有许多对银杏叶提取物的研究报道 ［２￣５］，为了充分开发我国丰富的银杏资源，探索一种操作稳定、 简便、有效成分提取完全、含杂质较少的工艺，我们以银杏叶 总黄酮的提取率为指标对银杏叶提取工艺和精制工艺进行 了深入的研究与探讨。旨在提高总黄酮的收率及产品的质 量。为工业化生产提供参考依据。
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阵列检测器，ＲＣＭＣ１８（８．０×１．０ｃｍ，粒度：５μｍ）径向加压柱 （美国 Ｗａｔｅｒｓ 公司）；树脂柱（有机玻璃柱，高 ５５ｃｍ，上端直 径 １１ ｃｍ，下端直径 ８ｃｍ）；ＣＬ－ ２５ 型蠕动泵（北京宣武超滤设 备厂）；ＰＴＧＣ Ｐｒｅｐ 超滤柱（美国 Ｍｉｌｉｐｏｒｅ 公司）。 2、实验方法与结果 ２．１、银杏叶提取物的制备
测定法（％） １．５０ １．７９ １．５８ ０．８５ １．５２
测定方法（％） １．５５ １．７４ １．５１ ０．８１ １．４７
２．３ 提取工艺条件的选择
２．３．１ 色谱条件
色谱柱：ＲＣＭＣ１（８ ８．０×１．０ｃｍ，粒度：５μｍ）径向加压柱； 流动相：甲醇 － ０．４％磷酸溶液（５５：４５）；流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；进样
效液相色谱法对提取物中的银杏叶总黄酮进行含量测定，并相互比较。选择一种快速、简便、准确的方法，作为银杏叶总黄酮
含量测定的常用方法，并加以推广应用。同时以高效液相色谱法为测量手段，以总黄酮的收率为指标，对银杏叶的提取与精制
工艺进行研究和探讨，确定了提取溶剂、时间、次数及浓缩、干燥温度等提取工艺参数，比较了树脂吸附一次洗脱和二次洗脱
以及超滤与树脂吸附相结合的精制工艺对产品质量及银杏叶总黄酮收率的影响。结果满意。
关键词：银杏叶；总黄酮；分光光度法；高效液相色谱法；提取工艺；精制工艺
中图分类号：TQ461
文献标识码：Ａ
文章编号：１００６－ ２８８２（２０１３）０３－ ４１７－ ０４
Study on the Extraction and Separation of Total Flavonoids from Ginkgo Biloba L. Extract
银杏叶提取物样品制备：精密称取银杏叶提取物 ０．１ｇ， 加甲醇 ２０ｍｌ 使其完全溶解，加入 １．５ｍｏｌ／Ｌ 盐酸 ２０ｍｌ，摇匀， 回流 ２ 小时，冷却，转入 ５０ｍｌ 量瓶中并用甲醇定容，过滤备 用。
银杏叶样品的制备：取银杏叶 １．５ｇ，在索氏提取器中用 甲醇提取 ８ 小时，６０℃以下浓缩至 １５ｍｌ，加入 １．５ｍｏｌ／Ｌ 盐酸 ２０ｍｌ，混匀，回流 ２ 小时，冷却，转入 ５０ｍｌ 容量瓶中并用甲醇 定容，过滤备用。 ２．２．２．３ 样品测定
含量 ２０ 倍的各种糖类如蔗糖、乳糖、葡萄糖，再测其收度，变 化也很小，说明糖类不干扰黄酮的测定。用试剂作空白消除 了显色前黄酮颜色的干扰。测试温度均为 ２５℃，以消除温度 对络合物稳性的影响。 ２．２．１．３ 样品的测定
精密称取银杏叶提取物约 ０．０２ｇ，置 １０ｍｌ 量瓶中加 ３０％ 乙醇溶液，按上述方法操作并用 ３０％乙醇定容，测定，用回归
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银杏叶提取物总黄酮的提取分离及工艺的研究
刘雪飞
哈尔滨奥霖药业有限公司（１５０３００）
摘 要：本文首先是银杏叶提取物的制备，我们采用 ７０％乙醇热回流提取工艺提取银杏叶，用紫外可见分光光度法和高
Liu Xuefei Harbin Aolin Pharmaceutical.,ltd （150300）
Abstr act: Ｔｈｅ Ginkgo biloba Ｌ． ｅｘｔｒａｃｔ ｗｅｒｅ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｏｆ ７０％ ｅｔｈａｎｏｌ ｔｈｅｒｍａｌ ｒｅｃｙｃｌｉｎｇ ｅｘｔｒａｃｔ ｆｒｏｍ G. biloba ｌｅａｖｅｓ． Ｗｅ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ ｉｎ ｔｈｅ ｌｅａｖｅｓ ｏｆ G. biloba ｂｙ ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ－ ｖｉｓｉｂｌｅ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ ａｎｄ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ （ＨＰＬＣ） ｔｏ ｆｉｎｄ ｔｈｅ ｍｏｓｔ ａｐｐｒｏｐｒｉａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ， ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｂｅ ｃｏｎｓｉｄｅｒｅｄ ａｓ ａ ｒｅｇｕｌａｒ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ ｔｈｅ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｃｏｎｔｅｎｔ． Ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ G. biloba ｗａｓ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｄ ｕｓｉｎｇ ＨＰＬＣ， ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｃｅｓｓ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｓｕｃｈ ａｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｒｅａｇｅｎｔｓ， ｔｉｍｅ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｃｏｎｄｅｎｓｉｎｇ ａｎｄ ｄｒｙｉｎｇ ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｓｏ ｏｎ ｗｅｒｅ ｏｐｔｉｍｉｚｅｄ ｔｏ ａｃｑｕｉｒｅ ｈｉｇｈｅｒ ｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓ． Ｗｅ ａｌｓｏ ｃｏｍｐａｒｅｄ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｒｅｓｉｎ ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｕｌｔｒａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｒｅｓｉｎ ａｄｓｏｒｐｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｑｕａｌｉｔｙ ａｎｄ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ Ｇ． ｂｉｌｏｂａ．
方程计算总黄酮的含量，结果见表 １。
２．２．２ 高效液相色谱法 ２．２．２．１ 色谱条件
色谱柱：ＲＣＭＣ１８（８．０×１．０ｃｍ，粒度：５μｍ）径向加压柱； 流动相：甲醇 － ０．４％磷酸溶液（５５：４５）；流速：１．０ｍｌ／ｍｉｎ；进样 量：１０μ１；检测波长：３６０ｎｍ；柱温：２５℃。 ２．２．２．２ 样品的制备
量：１０μ１；检测波长：３６０ｎｍ；柱温：２５℃。外标法测定。
２．３．２ 样品的制备
银杏叶提取物样品制备：精密称取银杏叶提取物 ０．１ｇ，
加甲醇 ２０ｍｌ 使其完全溶解，加入 １．５ｍｏｌ／Ｌ 盐酸 ２０ｍｌ，摇匀，
银杏叶（河南省银杏科学技术开发中心提供）；银杏叶提 取物 （河南鲁山县银杏叶提取厂和本实验室提供）；ＤＭ１３０ 树脂（山东齐鲁抗生素厂）；芦丁、槲皮素（中国药品生物制品 检定所）；山柰酚、异鼠李素（Ｓｉｇｍａ 公司）；甲醇、乙醇、丙酮 （为工业原料或分析纯）；其它试剂均为分析纯。 １．２、仪器
ＵＶ－ ４６００ 型紫外可见分光光度计 （瑞典 Ｐｈａｒｍａｃｉａ 公 司）；高效液相色谱仪，配备有 ６００Ｅ 型泵系统，９６６ 型二极管
（１）三对照品测定方法 银杏叶提取物酸水解后主要为 ３ 中甙元：槲皮素、山柰 酚、异鼠李素，按上述色谱条件可将这 ３ 种甙元完全分开，用 外标法进行含量分析，以 ３ 个对照品对 ６ 份银杏叶提取物和 ５ 份银杏叶样品进行测定，结果见表 １，表 ２。 （２）单对照品测定法 标准曲线：将浓度分别为 ０．００５、０．０１、０．０２、０．０４、０．０６、 ０．０７ｍｇ／ 的槲皮素对照品溶液分别进样，以面积（Ａ）对相应的 进样量 Ｑ（μｇ） 计算回归方程：Ａ＝３．８００×１０６Ｑ＋１．５５０×１０４， ｒ＝０．９９９８，槲皮素 ０．０５－ ０．７０μｇ 范围内呈良好的线性关系。 按上述方法对银杏叶提取物及银杏叶样品总黄酮含量 测定，峰面积乘以校正因子 ２．５１，再求出含量，结果见表 １， 表 ２。 精密度测定：取浓度为 ０．０２ｍｇ／ｍｌ 的槲皮素对照品溶 液，按上述条件重复进样 ６ 次，每次 １０μｌ 测得其精密度 ＲＳＤ＝３．２％（ｎ＝６）。 回收率测定：精密称取银杏叶提取物 ０．１ｇ，加入槲皮素 对照品 ２ｍｇ，按上述方法测槲皮素的回收率，得平均回收率 为 ９７．９％，ＲＳＤ＝２．１２％（ｎ＝５）。 表 １ 分光光度法和液相色谱法测定银杏叶提取总黄酮 含量比较