精密度
13.21% 12.05% 12.04%
12.31%
14.03%
10.05% 14.34% 11.26%
微粒子发光法
分析敏感度
特异性
adr 0.1IU/mL adw 0.1IU/mL ay 0.2IU/mL
10 mIU/mL 1# ≥1:64 2# ≥1:128 3# ≥1:32 1# ≥1:32 2# ≥1:64 3# ≥1:64 1# ≥1:128 2# ≥1:128 3# ≥1:256
3、包涵体抗原，抗原性弱 4、缺乏构像表位 5、原核表达分子量小，抗原表位有限 6、抗原非糖基化，稳定性差 7、信号放大能力有限 8、固相载体形成的空间位阻
新型丙肝化学发光试剂的关键技术
1、包被和标记实现双特异，以降低假阳性 率，并提高分析敏感度。
2、通过整体系统优化，进一步扩大阴阳反 差，使结果判读泾渭分明。
2、pichia pastoris表达系统带来以下优势 （1）非包涵体而可溶性表达，抗原性强 （2）因糖基化而提高稳定性 （3）分子量大，抗原表位丰富 （4）具有构像抗原表位，而提高检出率
3、磁微粒子标记抗原增加抗原抗体的反应强度
新型丙肝化学发光试剂 检测国家参考品符合率对比
方法学 阳性符合率 阴性符合率 最低减出限
肝纤维化四项 透明质酸 Ⅲ型前胶原N端肽 Ⅳ型胶原蛋白 层粘连带白
全自动、管式、直接化学发光法 ---------------特异性强、性能稳定 超长时间无人值守
（1）试剂区15个试剂位， （2）样本区12 ╳ 12 = 144 个样本位 （3）码垛区一次性装载720个反应杯
测试中可随时添加，随时替换
0.014
0.017
1.736
2.833
1.619
Anti HCV重组 NS3 抗原
❖ NS3 HCV病毒的最重要的抗原
❖ 通过酵母真核系统成功的表达NS3抗原, 多重折叠以达到高度的免疫活性
❖ 高纯度; 易于直接标记
2、针对Fab端的单特异性抗体标记物
一般二抗和单特异抗体的对比
国标
二抗类型
P27
关键的
雅培 免疫项目
甲状腺功能 甲状腺素 三碘甲状腺原氨酸 游离甲状腺素 游离三碘甲状腺原氨酸 促甲状腺素
性腺激素 人绒毛膜促性腺激素 催乳素 雌二醇 卵泡刺激素 黄体生成素 孕酮 睾酮
传染病 乙型肝炎病毒前S1抗原 乙型肝炎病毒e抗体 乙型肝炎病毒e抗原 乙型肝炎病毒核心抗体 乙型肝炎病毒表面抗体 乙型肝炎病毒表面抗原 丙型肝炎抗体（HCV） 梅毒抗体（TP） 人类免疫缺陷病毒抗体
▪磁微粒、直接化学发光反应
反应充分 速度更快
酶标板，板式
磁微粒，纳米级，均相
Y
CLIA
Y
板式载量
微粒子化学发光法抗体载量优势
微粒子化学发光原理
分配样品, 磁颗粒 和试剂
在磁场中 清洗去除 孵育 未结合物质 使反应物 结合
加入 激发液
产生 信号
信号 检测
磁性微粒子及其分离技术
磁性微粒子技术的优点： ▪ 快速分离结合相与游离相 ▪ 提高与Ag或Ab包被亲和力 ▪ 提高接触表面积/反应容量比例，实现微量分析 ▪ 不需要抗体分离步骤，杜绝干扰与交叉反应 ▪ 允许共价耦合反应，因此可以检测大/小分子的各种物质成分 ▪ 能应用各种分析设计与反应模式，扩大应用范围
L1、L2阳性 L3阳性，L4阴性
(-/-)20/20 (+/+)20/20 (-/-)20/20 (+/+)10/10
精密度
8.03% 7.45% 8.03%
8.20%
10.34%
7% 10% 7.98%
试剂性能多中心临床评估（乙肝）
乙肝 HBsAg Anti-HBs hiv Anti-HBe Anti-HBc
新型丙肝化学发光试剂技术策略---灰区的解决
1、酵母真核表达抗原，高效减少灰区标本
eg: E.coli与Pichia pastoris 检测
国标 国标品
表达载体
N2
N4 N24 P1
P5 P21
大肠杆菌
（原核表达）
0.260
0.149
0.235
0.742
2.659
0.706
毕赫酵母
（真核表达）
0.060
4.50% 1.79%
AFP
批内 批间
4.91% 2.14%
HBsAg
试剂性能多中心临床评估
HIV
HCV
相关性 显著相关 显著相关
相关系数 0.99 0.93
线性系数 0.98 0.99
参比试剂：雅培
试剂性能多中心临床评估
HIV
HBsAg
相关性 显著相关 显著相关
相关系数 0.97 0.96
线性系数 0.92 0.95
1、关于灵敏度的两个概念
（1）分析灵敏度 决定因素： a.单个抗原决定族的抗原性强弱。 b.试剂盒的信号放大能力
（2）流行病学敏感度 决定因素： a.抗原片段的种类是否齐全。 b.是否含构像抗原。 c.分析灵敏度的高低。
• 2、抗原片段种类不全
C E1E2/NS1 NS2 NS3 NS4a NS4b NS5a NS5b
S1, S2阴性, S3,S4,S5,S6阳性 L1、L2阳性， L3阴性，L4阴性
传统酶免法 特异性
(-/-)20/20 (+/+)3/3
(-/-)20/20 (-/-)15/15 (+/+)9/10
(-/-)15/15 (+/+)9/10
(-/-)15/15 (+/+)14/15
(-/-)29/30 (+/+)29/30 (-/-)18/20 (+/+)20/20 (-/-)20/20 (+/+)10/10
典》规定反应时间至少要2小时30分钟；而全自动微粒子化学发光
试剂则不到30分钟即可完成。 ❖ 稳定性更好 ❖ 特异性更好
大部分国际一流厂家也都采用直接发光法：
罗氏 西门子 雅培
…….
方法学 项目
HBsAg
HBsAb HBeAg
HBeAb
HBcAb
HCV HIV TP
传染病试剂传统酶免法和微粒子化学发光法对比
灵敏度 97.92% 95.98% 95.24% 90.77% 91.54%
特异性 100% 97.38% 100% 97.21% 98.9%
符合率 99.78% 96.69% 99.59% 95.36% 94.48%
参比试剂：雅培I2000
免疫测定试剂的关键点
❖ 作为免疫反应，抗原抗体的选择是整个免疫分析特异性 和总体表现的关键
N=500， 参比试剂：雅培I2000
丙型肝炎抗体诊断试剂
丙肝病毒复杂的基因结构： 决定了抗体谱的差异，从而为丙肝抗体检测敏感度的提高带来了困难。
丙肝诊断试剂目前存在的问题
❖ 1、灰区标本的困惑 ❖ 2、阳性标本的漏检
问题形成的技术原因---灰区的形成
1、重组抗原的原因 （1）融合蛋白 （2）大肠杆菌杂蛋白
一般单抗
0.560
L3 0.160
N2 0.230
N4 0.162
N18 0.071
N24 0.214
L4 0.065
单特异抗体
0.892 0.321 0.065 0.043 0.014
0.102
0.009
3、板式固相载体升级为管式磁微粒子包被
★ 包被量更富足 ★ 管式液相反应更充分 ★ 更有效的解决术： 便于分离，反应均匀，提高灵敏度
❖ 2）泉涌内外壁清洗技术： 最小的交叉污染率
❖ 3）试剂盒盖设计： 减少人工操作误差和交叉污染，避免试剂挥发影响结果准确性
❖ 4）试剂冷藏系统： 保证在仪器操作的过程中试剂能够一直保持稳定
❖ 5）磁性分离技术： 保证了清洗效率，对于灵敏度要求极高的标记免疫分析是十分
4、光信号检测，提高信噪比
信号放大代替靶标放大，减少靶标放大带来的非特异性 反应，远远大于ELISA的信噪比。
60 50 40 30 20 10
0 ELISA
CLIA
本底噪音 信号
新型丙肝化学发光试剂---降低漏检率
1、在CORE、NS3、NS4、NS5的基础上增加了E1区 ，保证抗原片段的齐全
2、第二抗体的非特异反应 （1）酶标抗体对固相载体的直接吸附 酶标二抗对于丙肝抗体是非特异的，和各种人IgG均能反应结 合。 （2）个别标本中IgG浓度过高 多聚体的混合：E-E、E-Ab、E-Ab-E、E-Ab-E-Ab ，既 引起本底背景，又阻遏抗原抗体反应
问题形成的技术原因---阳性标本的漏检
糖代谢类 胰岛素 C-肽
肿瘤标志物
甲胎蛋白
癌胚抗原
前列腺特异性抗原
游离前列腺特异性抗原
糖类抗原125 糖类抗原15-3 糖类抗原19-9 β2微球蛋白 铁蛋白 神经元特异性烯醇化酶 人钙结合蛋白 肿瘤相关抗原72-4 鳞状上皮癌相关抗原 细胞角蛋白CYFRA 21-1
心血管及心肌标志物 N末端脑钠肽 肌钙蛋白Ⅰ 肌酸激酶同工酶 C反应蛋白 心肌脂肪酸结合蛋白 脂蛋白相关磷脂酶 A2 髓过氧化物酶 肌红蛋白
急诊功能 • 真正的
，急诊样本，随到随测。
• 测试速度高达220测试/小时 • 原试管上样，无需倒管。
• 全封闭反应舱，有效减少外界环境干扰和污染
• 全中文软件，图标式界面，操作更简便
• 综合测试成本低
管式、微粒子包被技术，反应速度更快，结果更准确。
❖ ELISA法检测乙肝表面抗原、梅毒、艾滋、丙肝按照2010年《药