近年来，大多数的胰岛素生产商换用重组的非动物来源的胰蛋白酶来制备AOF 201305 生物制药周 3的重组胰岛素。
例1：重组人胰岛素过程中的AOF
供 仅 容
AOF 3胰岛素： 参会
参 表 代
未经 ， 考
本人 者 作
， 许 允
翻 不得
印
载 转 、
此内
1）若培养基中含有蛋白胨、酵母粉等，原料供 应商保证原料生产过程的无动物源性。 2 ）重组胰蛋白酶和重组羧肽酶B为动物源性的 重组酶。
Contents
参 表 代 未经 ， 考 本人 者 作
， 许 允
翻 不得
印
载 转 、
此内
容仅
会 参 供1
背景介绍
2
大肠杆菌表达系统中的动物源性问题
3
动物细胞表达系统中的动物源性问题
AOF生物药物的发展方向
201305 生物制药周
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什么叫做动物源性？非动物源性？ ， 概念的应用范围 ：药物及其生产用原料； 经 ，未 考 动物源性原料 ： 参 表 会代 参 供 1 ）直接来源于动物：如牛肉膏，骨粉，牛血清…… 仅 容 此内 2）部分来源于动物：如植物蛋白胨的生产过程中用 牛/猪蛋白酶消化所得…… 动物源性药物： 1）直接来源于动物或人：如血液制品，人白蛋白、 人免疫球蛋白等 2）直接来源于动物：如猪胰岛素、胰蛋白酶、糜蛋 白酶、肝素、透明质酸，等等……在药典中称为 生化药物
无蛋白培养基： 无血清、无蛋白成分，化学组分确定 等特点 （合成培养基）
主要成分包括：各种必需氨基酸，小 肽，维生素，微量元素，离子等
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例2：疫苗、抗体研发过程中的AOF
仅 容 内 会 参 供
抗体下游纯化
参 表 代
未经 ， 考
本人 者 作
， 许 允
翻 不得
印
载 转 、
此
蛋白A亲和层 析： 用于做亲和层析的蛋白A，为非抗体亲和纯化。
1
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例1：重组人胰岛素过程中的AOF
Insulin 广泛用于在哺乳细胞培养中，延迟细胞 参 代表 会 凋亡，增加产量。 参 供 仅 容 此内 重组Insulin应用于糖尿病的治疗。
未经 ， 考 本人 者 作 ， 许 允 翻 不得
印
载 转 、
AOF1胰岛素：
重组胰岛素通常是一个AOF1 的物质
AOF
AOF 2: 所有成分均为重组或非动物源性。 AOF 3: 所有成分均为重组或非动物源性。且均 采用非动物源性组分和过程生产。
AO：animal origin AOF: animal origin free
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大肠杆菌生产过程中的 AOF问题 翻印
载 转 、
例1：重组人胰岛素过程中的AOF
印
载 转 、
可能的病毒污染：目前，使用猪胰蛋
白酶的疫苗生产企业要按照2010版药典 规定检测可能的病毒含量，如猪细小病 毒，但仅列出一种。
供 仅 容
可能细菌、真菌、支原体污染：
将影响细胞的生长和产品质量。
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动物源性胰蛋白酶对细胞培养的影响
会 参 两个方面： 二是纯度 仅供 此内 容 参 表 代 未经 ， 考 本人 者 作 ， 许 允 翻 不得
印
载 转 、
杂质：因为历史的原因，用于组织培养的胰
蛋白酶活性定为1:250，其实，1:250的胰蛋白 酶中90%以上为杂质。
杂质的成分主要为来源于胰腺的脂类、蛋白和核酸等，在胰蛋 白酶处理细胞的过程中，可能会透过细胞膜，可能对细胞的生 长形成影响，特别是在科研中，用细胞来鉴定一些活性物质的 作用时，可能会影响真实效果的检测。
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许 允 本人 者 作
翻 不得
印
载 转 、
动物源性制品的潜在危险 ---病毒---人畜共患病
参 表 • 参 牛 — 疯牛病—BSE病毒 会代 供 仅 容 此内 • 猪---口蹄疫—手足口病： • 猪---流感/甲流感/H1N1: 该病毒非常活跃， 可由人传染给猪，猪传染给人，也可在人 群间传播。 • 禽类---禽流感 • 等等 未经 ， 考 本人 者 作 ， 许 允 翻 不得 印
此
生物制药的非动物源性
仅 容 内
会 参 供
参 表 代
未经 ， 考
本人 者 作
， 许 允
翻 不得
印
载 转 、
Dr. Suxia Li Professor East China University of Science and Technology, Shanghai, China
201305 生物制药周
201305 生物制药周
翻印 2010版中国药典第三部 得 ，不
载 转 、
2010版药典对安全性问题更加重视。增修订细菌内毒素检查 未经 ， 考 参 的品种达 112种；药典三部增订了逆转录酶活性检查法等。 代表
此 仅 容 内
许 允 本人 者 作
十七、生产及检定用动物 2、培养细胞用牛血清应来源于无牛海绵状脑病地区的健康 牛群，其质量应符合本药典的有关规定 3、消化细胞用的胰蛋白酶应证明无外源性或内源性病毒污 染。
载 转 、
药品的安全性保障得到进一步加强。凡例中规定所有来源于人 ，未 考 参 表 或动物的供注射用的原料药均增订“制法要求”。 会代
此内 容 参 供 仅
经
总则十四： （2）来源于动物组织提取的药品，其所用动物种属要明确，所 用脏器均应来自经检疫的健康动物，涉及牛源的应取自无牛海 绵状脑病地区的健康牛群；来源于人尿的药品，均应取自健康 人群。上述药品均应有明确的病毒灭活工艺要求以及质量管理 要求。 （3）直接用于生产的菌种、毒种、来自人和动物的细胞、 DNA重组工程菌及工程细胞，来源途径应经国务院药品监督管 理部门批准并应符合国家有关的管理规范。
1）用重组技术生产的重组蛋白，但培养过程中使 用动物源性的培养基，如蛋白胨。 2）切割胰岛素原所用的酶为动物源性的。
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例1：重组人胰岛素过程中的AOF
未经 AOF 2 胰岛素 ： ， 考 会 参 供 本人 者 作 ， 许 允 翻 不得
印
载 转 、
此
仅 容 内
出于对疯牛病病毒TSE和其它动物源性污染的担心增加，很多生物制药 公司开始非动物源性原料。
会 参 供
参 表 代
未经 ， 考
本人 者 作
， 许 允
翻 不得
印
载 转 、
现代疫苗及抗体生 产 : 培养基：无血清培养基，无蛋白培养基
胰酶：一般不用，为悬浮培养，不需消化。
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动物源性胰蛋白酶对细胞培养的影响
两个方面： 一是安全性 参会
参 表 代 此内 未经 ， 考 本人 者 作 ， 许 允 翻 不得
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未经 ， 考 本人 者 作 ， 许 允 翻 不得
印
载 转 、
消化效果与活性相关
未经 原料生产商： ， 考 会 参 供 参 表 代
本人 者 作
， 许 允
重组胰蛋白酶
翻 不得
印
载 转 、
仅 容 上海雅心生物技术有限公司 此内
重组人胰蛋白酶酶，重组猪胰蛋白酶 （重组大肠杆菌生产，冻干粉）
避免蛋白A亲和柱介质在反复使用过程的污染，如 果使用耐碱性的蛋白A亲和柱则可避免这一问题。
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例2：疫苗、抗体研发过程中的AOF 我国的现状
此 仅 容 内
传统疫苗生产:
培养基：小牛血清 胰酶：1:250胰酶，来源于猪、牛胰腺。
因国外限制牛胰蛋白酶的制备和应用，现仅用猪胰蛋白酶。
[1 ]
载 转 、
此
仅 Trypsin 容 内
Carboxypeptidase B
Trypsin
2007-10-22
[1]. Simon Heller , Plamen Kozlovski , Peter Kurtzhals Diabetes Research and Clinical Practice 78 (2007) 149 –158
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例2：疫苗、抗体研发过程中的AOF
种子
此内 容仅 会 参 供 代
表参
未经 ， 考
本人 者 作
， 许 允
翻 不得
印
载 转 、
Origin Cell lines
Master Cell bank
Working cell bank
培养基
无血清培养 基：
无血清，含有蛋白如：胰岛素、白蛋白、 传递蛋白、生长因子等。
会 参 供
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翻印 2010版中国药典第三部 得 ，不
载 转 、
生物制品生产检定用动物细胞基质制备及检定规程 未经 ， 一、对生产用细胞库细胞基质总的要求 考 参 代表 （一）细胞株 /系历史的资料 会 参 供 仅 2、细胞株 /系培养历史的资料 容 此内 应提供细胞培养液的详细成分，如使用人或动物源成分，如血 清、胰蛋白酶、乳蛋白水解物或其他生物学活性的物质，应具有 这些成分的来源、制备方法、质量控制、检测结果和质量保证的 相关资料。 （二）细胞库的建立 1、原材料的选择 细胞培养液中不得含有人血清。 消化细胞用胰蛋白酶应进行检测，证明其无细菌、真菌、支原体 或病毒污染。特别应检测胰蛋白酶来源的动物可能携带的病毒， 如猪细小病毒等。
美国罗氏公司
重组猪胰蛋白酶 （重组酵母生产，液体）
其他：印度
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AOF生物药物的发展方向
无血清培养基、无蛋白培养基及其其它无动物 参 表 会代 源性原料的深入研发、推广和应用，降低成 参 供 仅 容 本。 此内 在疫苗生产过程中，从政策上，限制或者禁止 小牛血清的使用，提高安全性。 加快我国非动物源性生物药物的研发，替代传 统的第一代的动物源性的生物药物。 无血浆重组蛋白替代血液制品，如重组凝血酶 替代血浆提取凝血酶、重组白蛋白替代人血浆 提取的白蛋白等……