但是，如果上面的产品要求MPN<5 /100 克，这是一个极端的例子，如果采用加样量 为3.33克，9管全阴性，也是得不到合适的 结果的，这样的话就应该采用加样量为33.3 克的规范做法。
再举两个极端的例子： 产品要求<5/吨（当然这是不可能的）， 那么如果你采用0.333克加样量，然后进行 换算，是没有任何意义的，如果真要测定， 就需要采用333千克的加样量。当然，这种 情况是不会发生的。
在实验中如何选择合适的稀释度？
MPN表
1、新国标的MPN表的基准问题: 新国标的MPN表采用了3个稀释度，分 别是十倍－百倍－千倍，加样量是3管，每 管1毫升，意味着加入样品的量为0.333克。 在样品加入量为0.333克的情况下，使 用新国标MPN表，得到MPN/克 的数值。
2、改变加样量的问题。 在实际操作中，因为一些原因需要改变 加样量，一般是10倍增加或者降低，同样使 用本表，得到的数值需要做10倍调整。 下面我们一起来看几个例子！ ↓↓
3 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其 他设备和材料如下： 恒温培养箱：36 ℃±1 ℃。 冰箱：2 ℃～5 ℃。 恒温水浴箱：46 ℃±1 ℃。 电子天平：感量 0.1 g。 均质器、振荡器、接种环
无菌吸管：1 mL（具 0.01 mL 刻度）、 10 mL（具 0.1 mL 刻度）或微量移液器 及吸头。 无菌锥形瓶：容量 500 mL。 无菌培养皿：直径 90 mm。 杜氏小管 pH 计或 pH 比色管或精密 pH 试纸。 菌落计数器。
因此，根据《瓶(桶)装饮用纯净水卫生标准》 大肠菌群MPN/100ml： ≤3的标准。此次 实验需要用到双料和单料LST肉汤，其中双 料LST肉汤3管，单料LST肉汤6管，水样量 为10ml、1ml、0.1ml，且每一稀释度接 种3管。
小结
从这个意义上讲，稀释度的选择是根据产品 要求进行的，理论上： 如果要求得到每克产品菌群含量，加样 量应该是0.333克比较合适。 如果要求得到每10克产品菌群含量，加 样量应该是3.33克比较合适。 如果要求得到每100克产品菌群含量， 加样量应该是33.3克比较合适。
当然，对于上面的产品要求MPN<30 /100 克，采用加样量为33.3克，会比较麻烦，大 家可以采用加样量为3.33克，要求9管全阴 性，这样也可以说的过去。
食品中大肠菌群数是指以1毫升（或1克）检 样中大肠菌群最可能数（MPN）来表示。本 实验依据GB 4789.3-2010制定。
三、设备和材料 设备： 恒温培养箱、冰箱、恒温水浴锅、电子天平、 均质器、振荡器、无菌吸管、无菌锥形瓶、 无菌培养皿、菌落计数器、PH试纸、接种 环、杜氏小管、试管等。
7.1.2 液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品 置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的 无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃 珠)或其他无菌容器中充分振摇或置于机械 振荡器中振摇,充分混匀,制成1∶10的样品 匀液。
7.1.5 根据对样品污染状况的估计,按上述 操作,依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。 每递增稀释1次,换用1支1mL无菌吸管或吸 头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过 程不得超过15min。
比如： 加样量为3.33克，这样查表得到的数值，应 该降低10倍。 如果其阳性管为2－1－0，查表为15，这样 的话，结果应该为 MPN 1.5/克，或者MPN 15/10克，或者MPN 150/100克。
再比如： 加样量为0.0333克（这样的情况是， 不使用十倍稀释液，而使用百倍－千倍－万 倍稀释液，各用三管，每管1毫升）。这样 查表得到的数值，应该增高10倍。 如果其阳性管为2－1－0，查表为15， 这样的话，结果应该为 MPN 150/克，或者 MPN 1500/10克，或者MPN 15000/100 克。
食品微生物学检验
大肠菌群计数（GB 4789.3-2010 ）
大肠菌群的定义
大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需 氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
大肠菌群不是细菌学上的分类命名，而是根据 卫生学方面的要求，提出的与粪便污染有关的 细菌，即作为食品、水体等是否受过人畜粪便 污染的指示菌，根据进一步的生化试验，可将 这群细菌再分为大肠艾希氏菌（俗称大肠杆 菌）、弗氏柠檬酸杆菌、肺炎克雷伯氏菌和阴 沟肠杆菌等。
（二）初发酵试验 每个样品,选择3个适宜的连续稀释度的样品 匀液(液体样品可以选择原液),每个稀释度接 种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤,每 管接种1mL，36℃± 1℃ 培养48h±2h, 观察倒管内是否有气泡产生，产气者进行复 发酵实验，未产气者为大肠菌群阴性。
（三）复发酵实验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养 物1 环,移种于煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管 中, 36℃±1℃培养48h±2h,观察产气情况。 产气者,计为大肠菌群阳性管。
矿泉水
10ml 1ml 0.1ml
根据初发酵和复发酵产气情况填写表格，产气记为“+”； 不产气记为“—”，最后根据产气管数对照MPN表格得出 最后的结论。
10版MPN表
03版MPN表
瓶(桶)装饮用纯净水卫生标准》(GB 17324-2003) 细菌菌落总数cfu/ml： ≤20 大肠菌群MPN/100ml： ≤3
7.3 复发酵试验(证实试验) 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养 物1 环,移种于煌绿乳糖胆盐肉汤(BGLB)管 中, 36℃±1℃培养48h±2h,观察产气情况。 产气者,计为大肠菌群阳性管。 7.4 大肠菌群最可能数(MPN)的报告 按7.3确证的大肠菌群BGLB阳性管数,检索 MPN表(见附录B),报告每g(mL)样品中大肠 菌群的MPN值。
7.2 初发酵试验 每个样品,选择3个适宜的连续稀释度的样品 匀液(液体样品可以选择原液),每个稀释度接 种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨(LST)肉汤,每 管接种1mL(如接种量超过1mL,则用双料 LST肉汤),36℃± 1℃ 培养24h±2h,观察 倒管内是否有气泡产生,24h±2h产气者进 行复发酵试验(证实试验),如未产气则继续培 养至48h±2h,产气者进行复发酵试验。未 产气者为大肠菌群阴性。
培养基和试剂： 月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤（LST）、煌绿 乳糖胆盐肉汤（BGLB）、无菌生理盐水、 NAOH和HCL标准溶液。
四、操作步骤： 1、液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置 盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无 菌锥形瓶中振摇,充分混匀,制成1∶10的样 品匀液。 2、样品匀液的PH值应在6.5~7.5之间，必 要时可用标准溶液调节PH值。
这样的话，就需要增加加样量，变成加样量 为3.33克，如果全部是阴性0-0-0，得到结 果为<0.3/克，或者是<3/10克，或者是 <30/100克。这样的结果才能符合要求。 如果更精确的操作，应该是加样量为 33.3克。这样如果全部是阴性0-0-0，得到 <3/100克，结果为2-1-0，得到MPN 15/100克，也是合格产品。
第一法 大肠菌群 MPN 计数法
操作步骤 7.1 样品的稀释 7.1.1 固体和半固体样品:称取25g样品,放 入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的 无菌均质杯内 ,8000r/min~10000r/min 均质1min~2min,或放入盛有225mL磷酸 盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中,用拍 击式均质器拍打1min~2min,制成1∶10的 样品匀液。
4 培养基和试剂 月桂基硫酸盐胰蛋白胨（Lauryl Sulfate Tryptose，LST）肉汤、煌绿乳糖胆盐 （Brilliant Green Lactose Bile，BGLB） 肉汤、结晶紫中性红胆盐琼脂（Violet Red Bile Agar，VRBA） 磷酸盐缓冲液、9毫升无菌生理盐水、 无菌 1 mol/L NaOH、无菌 1 mol/L HCl
3、用1mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1∶10样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入9mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注 意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇 试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打,使其 混合均匀,制成1∶100的样品匀液。
4、根据对样品污染状况的估计,按上述操作, 次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递 增稀释1次,换用1支1mL无菌吸管或吸头。 从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不 得超过15min。
第二法 大肠菌群平板计数法
矿泉水中大肠菌群的测定
一、实验目的 1、了解大肠菌群在食品检验中的意义 2、掌握矿泉水中大肠菌群的检验原理和测 定方法； 3、熟练稀释分离和无菌操作技术
二、实验原理 大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气， 需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便 指标来评价食品的卫生质量，并推断食品是 否污染肠道致病菌。
产品要求<10000/克（1万/克），如果你 采用0.333克加样量，即便是9管全部产气， 得到>1100/克，这也是没有任何意义的， 还是没有办法来判断产品是否合格。这里就 可以看做是要求<1000/0.1克，或者 <100/0.01克，或者是<10/0.001克，采 用的方法应该是加样量为0.0333克，或者 是0.00333，或者是0.000333克。
7.1.3 样品匀液的pH 应在6.5~7.5之间,必 要时分别用1mol/LNaOH 或1mol/LHCl调 节。 7.1.4 用1mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1∶10样品匀液1mL,沿管壁缓缓注入9mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中(注 意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇 试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打,使其 混合均匀,制成1∶100的样品匀液。
3、关于和产品标准对应的问题。 大家应该注意到，这个问题其实是一个 稀释度的选择问题。另外，这个问题也可以 回答是否可以直接换算的问题。