根据 Lambert- Beer定律，以该物质吸收光谱图中的λmax 为入射光，首先配制一个与被测溶液浓度相近的标准溶液cs， 测其As，再将样品溶液推入光路，测其Ax ，则试样溶液的浓 度cx为：
cx

Ax As
cs
此法适于非经常性的分析工作，准确度不如标准曲线法。
例： 维生素B12的含量测定精密吸取B12注射液2.50mL，加水 稀释至10.00mL；另配制对照液，精密称定对照品25.00mg，加 水稀释至1000mL。在361nm处，用1cm吸收池，分别测定吸光 度为0.508和0.518，求B12注射液注射液的浓度（单位ug/mL)
缺点： ⑴仅适合微量分析； ⑵所需仪器相对昂贵。
应用
1
2
1.定性分析 各种物质具有各自不 同的分子、原子和不 同的分子空间结构， 其吸收光能量的情况 也就不会相同，因此， 每种物质就有其特有 的、固定的吸收光谱 曲线
纯度的鉴定
用紫外吸收光谱 确定试样的纯度是比 较方便的。如果一化 合物在紫外区没有吸 收峰，而其杂质有较 强吸收，就可方便的 检出该化合物中的痕 量杂质。
紫外-可见分光光度计的组成
4 检测器 检测器的作用是检测光信号，并将光信号转
变为电信号。现今使用的分光光度计大多采用 光电管或光电倍增管作为检测器。
5 信号显示系统 常用的信号显示装置有自动记录和数字显示
装置等。
仪器
可见分光光度计
仪器
紫外-可见分光光度计
紫外分光光度法的优缺点
优点：⑴灵敏度高,主要用于微量分析； ⑵准确度高,浓度测量相对误差仅有1~3%； ⑶操作简便、迅速，所需设备并不复杂； ⑷应用广泛。
3
结构分析 紫外-可见吸收
光谱一般不用于化合 物的结构分析，但利 用紫外吸收光谱鉴定 化合物中的共轭结构 和芳环结构还是有一 定价值。
22
紫外-可见分光光度法的应用范围
几乎所有的无机元素和在紫外及可见光区有特征吸收的有机物或 有机化合物都能用紫外/可见分光光度法进行测定。目前，紫外可 见分光光度计已成为全世界历史最悠久、使用最多、覆盖面最广的 常规分析仪器。
吸收光谱
透射光 检测器
入射光 不同波长光
紫外-可见分光光度法的原理-定性分析
紫外-可见分光光度法是利用物质对光的吸收光谱，对 物质进行定性分析或定量分析的方法。按所吸收光的波长 区域不同，分为紫外分光光度法和可见分光光度法，合称 为紫外-可见分光光度法。
不同结构的物质吸收光谱也不同，这是对物质进行定性 分析的基础：通过检测吸收光谱来比对鉴定分析物质。
1）对照法
Ci

2.5 10

25.001000 1000
0.508 0.518

Ci

98.1 g
/
mL
17:52:37
2.吸收系数法
当其为百分吸收系 数E1%时
C=A/E1%L
吸光度的测量：紫外-可见分光光度计
光源
0.575
单色器 吸收池 检测器 显示
紫外-可见分光光度计的组成
1 光源 在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：
800 600 500
400
3．吸收池
吸收池也称比色皿，用于盛放参比溶液或待测 溶液。它是由无色透明、耐腐蚀、化学性质相同、 厚度相等的玻璃制成的，按其厚度分为0.5 cm， 1 cm，2 cm，3 cm和5 cm。在可见光区测量吸 光度时使用玻璃吸收池，紫外区则使用石英吸收 池。使用比色皿时应注意保持清洁、透明，避免 磨损透光面。
UV的测定范围
临床分析 色彩測定 环境分析
生物化学分析
有机化学分析
无机化学分析 光学测定
有机化学分析 无机化学分析 光学测定 生物化学分析 环境分析 色彩測定 临床分析
紫外-可见分光光度法的应用范围
紫外-可见分光光度法的应用范围涉及化学化工、医疗卫 生、冶金地质、食品饮料、农业化肥、畜牧水产、机械制造、 计量科学、环保、制药、生物、材料、石油等领域中的科研、 教学、生产中的质量控制、原材料和产品检验等各个方面，进 行定性分析、定量测定、纯度检查、动力学研究等等。
标准曲线法(工作曲线法)
⑴测定步骤 ①首先配制一系列被测物的标准溶液，测其
吸光度，绘出A-c工作曲线； ②在相同条件下，测出被测物的吸光度Ax; ③根据Ax的值在工作曲线上查处cx的大小。
⑵适用范围 大批重复试样的分析。
未知物的 吸光度
未知物 的浓度
紫外可见分光光度法的定量方法
单一组分的测定 （1）标准对照法
紫外-可见分光光度法的原理及应用
紫外-可见分光光度法的原理
物质对光的选择吸收
当一束光照射到某种物质的固态物或溶液上时，一部 分光会被吸收或被反射，不同的物质对于照射它们的光束 的吸收程度是不同的，对某个波长的光吸收强烈，对另外 波长的光吸收很小或不吸收，我们把这种现象称为光的选 择吸收。
一切物质都会对可见和不可见光中的某些波长的光进 行吸收。 物质呈现各种各样颜色，就是它们对可见光
紫外-可见分光光度法的原理-定量分析
利用标准曲线法定量分析
在一定波长（λmax）下测定某物质的标准系列溶液 的吸光度作标准曲线，然后测定样品溶液的吸光度值，由 标准曲线求得样品溶液的浓度或含量。
最大吸收波长
吸 光 度
波长范围
0.80
Ax 0.60
0.40
0.20
0.00
cx
0 1.0 2.0 3.0 4.0 c(mg/mL)
可见光光源，如钨灯和卤钨灯；ห้องสมุดไป่ตู้外光源，如氢 灯和氘灯。
根据测定时所选用的光源： ➢可见分光光度法(400800nm) ➢紫外分光光度法(200400 nm)➢红外分光光度法(800nm50m)
氙灯
氢灯
钨灯
2 单色器 单色器以棱镜或光栅分光，提供单色光。
白光 入射狭缝 准直透镜
λ1
棱镜
λ2
聚焦透镜 出射狭缝
吸 光 度
波长范围
利用标准物质定性分析
在相同条件下，测定未知物 的吸收光谱，与标准物的吸收光 谱进行比较，如果两吸收光谱的 形状和吸收峰的数目、位置、拐 点等完全一致，就可初步判定未 知物与标准物是同一种物质。
紫外-可见分光光度法的原理-定量分析
Lambert – Beer 光吸收定律：当一束平行单色光通过均匀 的样品时，其吸光度与吸光组分的浓度、吸收池的厚度乘积
中某些特定波长的光线选择吸收的结果。
紫外-可见分光光度法的原理
物质的结构决定了物质在吸收光时只能吸收某些特定波 长的光。我们可以利用测量物质对某种波长的光的吸收来了 解物质的结构特性。
用经过分光后的不同波长的光依次透过该物质，通过测 量物质对不同波长的光的吸收程度（吸光度），以波长为横 坐标，吸光度为纵坐标作图，就可以得到该物质在测量波长 范围内的吸收曲线。这种曲线体现了物质对不同波长的光的 吸收能力，称为吸收光谱。
成正比.
L
入射光 I0
透射光 It
C
吸收系数
吸光系数
❖ 1．定义
❖ 一定条件下，吸光物质在单位浓度及单位 液层厚度时的吸光度，叫这个物质的吸光系数。
❖ 2．两种表示方法
❖ (1) 摩尔吸光系数(ε )：一定波长下，吸光 物质的溶液浓度为1mol/L，液层厚度为1cm时， 溶液的吸光度。
❖ (2)百分吸光系数(ελ)：一定波长下，吸光 物质的溶液浓度为1g/100ml(1%)，液层厚度为 1cm时，溶液的吸光度。