真菌的致病性
真菌的基本特性：菌丝、孢子、培养特性
标本采集注意事项
常用的检查方法：显微镜检查、分离培养、 生化实验
思考题：
1.简述真菌的致病性特点。 2.真菌标本采集是有哪些注意事项？ 3.形态学检查和培养在真菌检查中的意义。
目的要求
（一）掌握毛癣菌属、表皮癣菌属和小孢子丝 菌生物学特性、微生物学检验方法及鉴定。 （二）熟悉浅部真菌感染的种类
微生物检验
1．标本采集采集新发生的皮肤损害边缘皮屑；指甲 近尖端下面甲屑；拔取无光泽病发。
2．直接显微镜检查 皮屑10%KOH液；指甲25%KOH/25%NaOH处理 镜检可见透明、有隔，常有分支的菌丝及成链的关节孢子
皮肤癣菌感染的毛发
三.分离培养 标本 70%乙醇或在青、链霉素混合液
内处理5min 生理盐水洗3次 接种沙 氏琼脂斜面25℃培养观察菌落特征。 四.其他鉴定试验
意义
直接镜检阳性表示：
①有诊断意义。 ②看到的就是真菌的形态，可确定某些致病性真菌 的属或种。 ③判断某些真菌种的致病性等,如皮肤癣菌、曲霉等。
局限性：
①阴性结果不能排除真菌感染；
②有假阳性结果。
常用的染色方法
• 常用的染色方法有革兰染色、瑞氏染色、荧光染色， 乳酸酚棉蓝染色、还有墨汁负染色等。
（2）各种分泌物和排泄物 （3）血液和体液 （4）脓汁及渗出物
注意 （1）采集的标本要适宜
（2）在用药前采集标本 （3）采集的标本量要足 （4）严格无菌操作 （5）采集的标本立即送检
实验室检验
1. 镜检真菌形态 2. 真菌抗原检测 3. 真菌分离培养与鉴定 4. 真菌核酸检测 5. 真菌毒素检测
• 癣病标本多用KOH湿片检查法
低抗力 不强，加热60~70℃ 强 ， 有 的 可 耐 短时间即可死亡 100℃数小时
Categories of spore
sexual spore:
分生孢子
asexual spore 叶状孢子
孢子囊孢子
大分生孢子
小分生孢子 芽生孢子
厚膜孢子 关节孢子
芽生孢子
厚膜孢子
关节孢子
孢子囊孢子
标本 （1）皮肤的角质性物质
• 对检测骨髓和外周血中的荚膜组织胞浆菌，需作瑞 氏染色或姬氏染色后镜检。
• 检测病人脑脊液标本中新生隐球菌，需作墨汁负染 色后检查，背景为黑色，新生隐球菌和荚膜不着色
（二）、真菌抗原检测
• 白假丝酵母菌甘露聚糖抗原、隐球菌多糖 荚膜抗原、组织胞浆菌循环多糖抗原
• 常用的方法有胶乳凝集试验、ELISA、半 定量放射免疫法
表面感染真菌
糠秕马拉色菌
皮肤癣真菌
毛癣菌属 表皮癣菌属 小孢子菌属
皮下组织感染真菌
着色真菌 孢子丝菌
• 位置：寄居于人体皮肤和毛干的最表层。 因不接触组织细胞，很少引起宿主细胞反 应。
• 嗜脂性酵母样菌
• 代表：秕糠马拉色菌(Malasseziafurfur)
• 症状：皮肤表面出现花斑癣（汗斑）
真菌鉴定
菌种鉴定是一个复杂过程，仅观察菌落形态是远远 不够的，还需作生化反应，分子生物学鉴定，必要 时将菌种送有关单位鉴定。 1.糖(醇)类发酵试验
2.同化碳源试验
3.同化氮源试验
核酸检测 毒素的检测 动物试验
抗真菌药物分类--化学结构分类
1.多烯类抗生素，如两性霉素B、制霉菌素、 曲古霉素等。
微生物检验第十二 章真菌
原核细胞型微生物与真核细胞型微生物比较
原核细胞型微生物
细胞核结构 核膜 核仁 分裂方式 细胞质结构 质膜 内膜 核糖体 呼吸系统
无 无 主要以二分裂
常缺乏固醇 较简单，有中介体
70S 质膜或中介体
真核细胞型微生物
有 有 有丝分裂，减数分裂
常有固醇 复杂，有内质网和高尔基体
80S 线粒体
2.吡咯类，包括酮康唑、伊曲康唑、氟康唑、 伏立康唑、克霉唑、益康唑等。
3.其他类如氟胞嘧啶。
直接检查 检测抗原 直接镜检
固定标 墨汁负 KOH 本染色 染色法 法
脑
毛发
脊 液
指甲
皮屑
临床标本
分离培养
分 子
动病 物理
检 测
生
实检
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
抗
物
验查
体
沙氏培养基
学 检
测
25℃
37℃
观察菌落 镜检、生化反应
小结
毛发穿孔试验 脲酶试验 特殊营养需要试验
毛发穿孔试验
• 将头发发剪成lcm长，置于已加入25ml蒸馏 水和2—3滴10％酵母浸膏液的平皿内，高 压灭菌。将待检皮肤真菌接种于平皿内， 置25℃孵育四周，每周检查一次，每次取 数根毛发置载玻片上，经乳酚棉蓝染色后， 置低倍镜下观察。若毛发有裂口或陷凹者 为阳性，否则为阴性。
• 临床上常见的有 红色毛癣菌(trichophyton rubrum) 须癣毛癣菌(T.mentagrophytes,又称石膏样毛癣菌) 许兰毛癣菌(T.schoenleinii,又称黄癣菌) 紫色毛癣菌（T.violaceum） 断发毛癣菌（T.tonsurans）
毛癣菌：菌落灰白、红、橙或棕色, 表面呈绒毛状、粉粒状或蜡样。 大分生孢子细长棒状薄壁。菌丝有 螺旋状、球拍状、鹿角状和结节状
微生物检验
1．直接显微镜检查可采用透明胶带粘贴 取材法，将透明胶带直接贴于皮肤表面， 数分钟后揭下，直接贴于载玻片上镜检 或经棉蓝染色或革兰染色后镜检。可见 孢子和菌丝。孢子为圆形或卵形，厚壁， 芽颈较宽，常成簇分布；菌丝粗短，呈 腊肠样。
2．分离培养与鉴定
毛癣菌属
• 毛癣菌属（Trichophyton）属半知菌亚门－丝孢菌目 －丛梗孢菌科，有20余种，其中14种能引起人和动 物的感染。
• Dimorphism （二相性真菌）
Unicellular
机体内寄生37℃ yeast
含动物蛋白培养基
普通培养基25℃
Multicellular
mold
沙保氏培养基25℃
Morphology of Spore
真菌繁殖结构，一条菌丝可生成 多个孢子
孢子
芽胞
作用 真菌繁殖结构
细菌休眠结构，
抵御不良环境
（三）、真菌的分离培养
真菌培养是目前准确鉴定真菌的可靠方法 真菌的培养特点：三低两高
平皿培养 大试管培养
玻片培养
菌落的性状是鉴别真菌的重要特征
①菌落性质：酵母菌还是霉菌
②菌落大小：病原性真菌菌落小，而条件致 病性真菌菌落大
③菌落颜色 病原性真菌颜色淡， 污染真菌 颜色深；
④致病性真菌菌落下沉，有时使培养基开 裂；污染性真菌菌落不下沉,很少引起开裂。