显微镜油镜使用的原理Ⅲ
油镜使用的原理
1. 香柏油的折射率与玻璃 接近，提高了视野的照明 度。 2 . 提高了显微镜的分辨率
实验材料
显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水纸等。 细菌三型、霍乱弧菌等固定装片
实验程序Ⅰ（显微镜的使用）
主要是油镜的使用
1.用前检查：零件是否齐全，镜头是否清洁。 2.调节光亮度 3.低倍镜观察：粗调、细调 4.依次再进行中倍、高倍观察 5.油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后，提升聚光 镜，在标本中央滴一滴香柏油，使油镜镜头浸入香柏 油中，细调至看清物象为止。 6.换片：另换新片，必须从第三条开始操作。 7.用后复原：观察完毕，上悬镜筒，先用擦镜纸擦去 镜头上的油，然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残 留的油，最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体 全部复原。
实验报告
油镜与普通物镜在使用方法上有何不同？ 应特别注意些什么？
使用油镜时，为什么必须用香柏油？ 镜检标本时，为什么先用低倍镜观察，
而不是直接用高倍镜或油镜观察？
实验二
细菌基本形态和特殊结构的观察
目的要求 实验材料 实验程序 实验报告
目的要求
1.用油镜结合细菌三型等染色片，观察细 菌基本形态（球形、杆形和螺旋形）， 边观察边绘图。
2. 辨认细菌的特殊构造 变形杆菌的周鞭毛 铜绿假单胞菌绿脓杆菌丛鞭毛 破伤风芽胞梭菌芽孢 肺炎球菌荚膜
实验材料
显微镜、香柏油、二甲苯、擦镜纸、吸水 纸等。
细菌三型：葡萄球菌、大肠杆菌、霍乱弧 菌等示教片。
细菌特殊结构：变形杆菌、绿脓杆菌、破 伤风梭菌等细菌的特殊结构示教片。
基本形态的观察
金黄色葡萄球菌
实验程序Ⅱ（显微镜的使用）
显微镜保养和使用中的注意事项： 1.不准擅自拆卸显微镜的任何部件,以免损坏。 2.镜面只能用擦镜纸擦，不能用手指或粗布，以保证 光洁度 3.观察标本时，必须依次用低、中、高倍镜，最后用 油镜。当目视接目镜时，特别在使用油镜时，切不可 使用粗调节器，以免压碎玻片或损伤镜面。 4.观察时，两眼睁开，养成两眼能够轮换观察的习惯， 以免眼睛疲劳，并且能够在左眼观察时，右眼注视绘 图。 5.拿显微镜时，一定要右手拿镜臂，左手托镜座，不 可单手拿，更不可倾斜拿。 6.显微镜应存放在阴凉干燥处，以免镜片滋生霉菌而 腐蚀镜片。
基本形态的观察
溶血性链球菌
基本形态的观察
大肠杆菌
基本形态的观察
霍乱弧菌
特殊结构的观察Ⅰ
鞭毛 变形杆菌
特殊构造的观察Ⅱ
荚 膜
肺炎球菌（荚膜染色）
特殊构造的观察Ⅲ
芽孢
破伤风梭菌
枯草芽孢杆菌
实验报告
镜下绘出细菌三型 镜下绘出所见细菌的特殊结构
实验三 细菌的革兰氏染色
目的要求 革兰氏染色原理 实验材料 实验程序 实验报告
实验一 显微镜油镜的使用
目的要求 显微镜油镜使用的原理 实验材料 实验程序 实验报告
显微镜油镜使用的原理Ⅱ
显微镜的放大倍数和分辨率
1.放大倍数=接物镜放大倍数× 接目镜放大倍数 2. 显微镜的分辨率 是表示显微 镜辨析物体（两端）两点之间距 离的能力，可用公式表示为： D=λ/2n·sin(α/2 ) 式中D：物镜分辨出物体两点间 的最短距离。 ：可见光的波长（平均0.55m) n: 物镜和被检标本间介质的折 射率。 ：镜口角（即入射角）。
操作图示：
培养基配方：
牛肉膏 蛋白胨 氯化钠 蒸馏水 固体培养基：加2-3%的琼脂 半固体培养基：0.法 2.掌握革兰氏染色法步骤
革兰氏染色的基本原理
革兰氏染色是丹麦医生 C.Gram（革兰）于 1884年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法。
根据细菌细胞壁的组分和结构不同，通过革 兰氏染色法可将所有的细菌区分为两大类G+和 G-
实验材料
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)斜面培养物 大肠杆菌(E.coli)培养物 革兰氏染色液 显微镜
革兰氏染色的过程– 制片
A. 加生理盐水
B. 涂成薄膜
C. 固定菌体
细菌涂片制备过程
革兰氏染色的过程– 染色
大肠杆菌
金黄色葡萄球菌
注意事项
革兰氏染色注意载玻片要洁净，滴无菌水和取菌不宜过多，涂片要
均匀，不宜过厚；热固定温度不宜过高，（以玻片背面不烫手为宜）， 否则会改变甚至破坏细胞形态；水洗时不要直接冲洗涂面，而应使水从 载玻片的一端流下，水流不宜过急，过大，以免涂片薄层脱落。 革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节， 脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染为阴性菌。 美蓝染色注意染液不宜过多或过少，否则在盖上盖玻片的时,菌液会溢 出或出现大量气泡而影响观察；同样，盖玻片的不宜平着放下，以免产 生气泡影响观察。 霉菌直接制片注意挑菌和制片时要小心，尽可能保持霉菌的自然生长 状态，加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。
前，革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌应分别是什么颜色? 你认为革兰氏染色中，哪一个步骤可以省去而不影响 最终结果？在什么情况下可以采用？
实验四
细菌分离培养
实验材料 实验程序 目的要求 实验报告
目的要求
了解培养基制备过程及常用培养基的种类 学会细菌的接种方法及无菌操作法 学会微生物的分布情况，建立无菌观念 了解常用消毒灭菌方法并验证其杀菌作用 了解药敏试验的操作方法
实验报告
1．绘图说明经革兰氏染色后大肠肝菌和金黄色葡萄球 菌的染色结果。
实验报告
思考题：
你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其 中最关键的环节是什么？
你的染色结果是否正确？如果不正确，请说明原因。 进行革兰氏染色时，为什么特别强调菌龄不能太老，
用老龄细菌染色出现什么问题？ 革兰氏染色时，初染前能加碘液吗?乙醇脱色后复染之
实验用品
小试管 培养皿 吸管 三角玻扒 烧杯 量筒 玻棒 药匙 剪刀
高压灭菌器 营养 半固体 蛋白胨水 天平 玻璃吸管 标签贴纸 铁丝 电炉
实验程序
（一）培养基的配制
同学们先将试管贴好标签。注明培养基名称，组别， 日期。标签粘贴位置在离管口1/3管身处。 注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。