胎儿超声软指标异常的染色体微阵列分析【摘要】目的探讨染色体微阵列分析技术(chromosomal microarry analysis，CMA)在超声软指标异常胎儿产前诊断中的应用价值。
方法选取2015年10月至2017年12月于浙江省湖州妇幼保健院产前诊断中心就诊，超声检查发现软指标异常但未合并明确结构畸形的125例患者，包括多项软指标异常孕妇35例，单项软指标异常孕妇90例。
入选病例已排除常见染色体非整倍体异常。
对上述病例羊水行CMA 检测，并分析结果。
结果CMA共检出致病性拷贝数变异(pathogenic copy number variation，pCNV)6例，检出率为4.80％。
其中35例多项软指标异常胎儿中检出pCNVs 3例，检出率为8.57％；90例单项软指标异常胎儿中检出pCNVs 3例，检出率为3.33％；结论与传统染色体核型分析相比，CMA可以提高超声软指标异常胎儿染色体异常的检出率，有较高的临床应用价值。
【关键词】染色体微阵列分析；产前诊断；超声软指标异常Chromosomal Microarray Analysis of Abnormal Fetal Ultrasonographic Soft Markers【Abstract】Objective:To explore the application value of chromosomal microarray analysis (CMA) in prenatal diagnosis of abnormal ultrasonographic soft markers. Methods: Choose in October 2015 to December 2017 in our hospital prenatal diagnosis center visits and abnormal ultrasonographic soft markers of 125 cases of fetus. Therewere 35 cases with multiterm soft markers, 90 cases with single soft 基金项目：染色体微阵列分析技术在中枢神经系统结构异常胎儿遗传学病因中的应用研究（2017GYB45）markers.Abnormal chromosome aneuploidy was excluded in selected cases.CMA test was performed on the above cases, and the results were analyzed. Results: A total of 6 cases of pathogenic copy number variants (pCNVs) were detected by CMA, and the detection rate was 4.80%.Among them, PCNVs were detected in 3 of 35 abnormal fetuses with multiterm soft markers, the detection rate was 8.57%.PCNVs were detected in 3 of 90 abnormal fetuses with single soft markers, and the detection rate was 3.33%.Conclusion:Compared with traditional karyotype analysis, CMA can improve the detection rate of fetal ultrasonographic soft markers chromosomal abnormality and can be used as an effective prenatal diagnosis method.【Key words】Chromosome microarray analysis; Prenatal diagnosis; Abnormal ultrasonographic soft markers染色体微阵列分析技术(chromosomal microarry analysis，CMA)相对于染色体核型分析检出率更高，能够检测出>lkb的拷贝数变异（CNVs）, 对超声提示胎儿结构异常者额外检出率可达6.0%~9.0%[1]。
超声软指标异常为非特异性声像图表现，大部分为正常胎儿，但在染色体异常的胎儿中发生率更高。
我们对125例已排除染色体核型非整倍体异常的超声软指标异常胎儿进行了CMA分析，以探讨CMA 在超声软指标异常胎儿产前诊断中的价值。
1对象与方法1.1对象2015年10月至2017年12月到浙江省湖州市妇幼保健院产前诊断中心超声检查发现软指标异常但未合并结构畸形的孕妇125例行羊水CMA检查。
超声软指标异常主要包括：颈项软组织增厚、侧脑室增宽、轻度肾盂扩张、肠管强回声、心室强光点、长骨偏短、鼻骨缺失或发育不全、脉络膜囊肿、颈部水囊瘤等软指标异常以及羊水量异常和胎儿生长受限。
入选病例已排除常见染色体非整倍体异常。
125例中单项软指标异常者90例，多项软指标异常者35例。
所有胎儿父母均进行产前遗传咨询并签署知情同意书。
1.2方法1．2．1样本采集在超声引导定位下行羊膜腔穿刺术后留取羊水2管，各8 mI，1管用于CMA 检测，另1管备用。
抽取胎儿父母外周血各2管，每管4 mL，1管用于CMA检测，另1管备用。
1．2．2染色体微阵列分析检测将提取的全基因组DNA经过扩增、标记、杂交、洗涤染色后扫描，获取数据并加载于配套ChAS v3．0软件进行结果判读。
1．2．3CNV致病性判读具体判断标准如下：(1)包含有已知微缺失/微重复综合症的关键区域，带有OMIM致病基因，或遗传自表型异常的亲属在多个文献或数据库中报道有临床意义，则定义为致病性CNVs (pathogenic CNVs，pCNVs)；(2) 在多个文献或数据库均提示良性变异，存在于正常个体中，或遗传自表型正常的父母，并且片段大小一样定义为正常多态性CNVs(benign CNVs，bCNVs)；(3)该CNVs在数据库中偶有描述，但致病性有争议定义为临床意义不明的CNVs (variants of unknown significance，VOUS)[2]。
2 结果2．1 超声软指标异常胎儿的CMA检测结果125份孕妇羊水CMA样本全部检测成功，成功率为100％。
检出pCNVs样本6例，异常率为4.80％；VOUS样本3例，占2.40％；bCNVs及未检出>300 kb CNVs 样本共116例，占92.80％。
（见表1）表1 CMA检测为CNVs的具体情况B超表现染色体区段片段大小变异类型查询结果双亲验证妊娠结局1 心室强光点，羊水少8q13.3 906.8Kb 缺失致病耳-面-颈综合征(Otofaciocervicalsyndrome 1)和鳃-耳综合征(Branchiooticsyndrome 1)等与母同引产2 FGR、肠道回声增强Xp11.4p11.23 6.8Mb 缺失致病新发引产3 颈部水囊瘤Xp22.31 1.6MB 缺失致病X-连锁的鱼鳞症新发引产4 心室强光点、羊水少4q35.1q35.2 715KB 重复致病新发新生儿无异常5 侧脑室增宽20p12.1575KB 重复致病新发引产6 NT增厚22q11.22 262KB 缺失致病新发新生儿无异常7 心室强光点、NF增厚Xp22.33646kb 重复临床意义不明新发新生儿无异常8 脉络膜小囊肿9q33.3344KB 缺失临床意义不明新发新生儿无异常9 心室强光点5p15.33 344KB 缺失临床意义不明与母同新生儿无异常2．2 CMA检测发现CNVs的验证结果6例pCNVs 中5例为新发的突变，1例与母相同。
其母表现为面部异常，听力障碍，考虑为腮-耳-肾综合征（表1中1）。
具体染色体微缺失情况见图1。
3例VOUS中2例为新发变异，1例与表型正常的母亲相同（表1中9），3例新生儿均未见明显异常。
图1: 表2例1 验证结果：8号染色体缺失详图.内含EYA1基因。
A胎儿检测结果.B孕妇检测结果2．3单项及多项非结构异常胎儿的CNVs检测结果比较在125例胎儿超声软指标异常中，多项异常35例，CMA检出pCNVs 3例，检出率为8.57％；单项超声非结构异常90例，CMA检出pCNVs 3例，检出率为3.33％。
3讨论传统的染色体G显带核型分析被称为产前诊断的“金标准” [3]。
它的局限性表现在分辨率较低、需要进行细胞培养、耗时长等。
产前超声筛查孕周多集中于孕22～24周，甚至可能到晚孕才会发现一些超声异常，此时染色体核型分析已错过了检查时机。
而染色体微阵列分析无需进行细胞培养，适宜孕周范围更大，分辨率高，在产前诊断中的价值已得到了充分的肯定[4]。
2013年美国妇产科学会(American College of Obstetrics and Gynecology，ACOG)建议当胎儿存在一个或多个超声异常并需要进行侵入性产前诊断时，推荐染色体微阵列分析技术，且可以替代染色体核型分析[5]。
但是CMA检测也有一定局限性,如不能检测染色体平衡易位、倒位及复杂性重排，不能检测出点突变和小片段插入，可能检出临床意义不明的CNV等。
同时因CMA检查费用较高，临床医生应掌握合理的适用范围。
总结本次研究结果，排除常见染色体核型非整倍体异常的125例样本中pCNVs检出率为4.80%,虽然比例不高，但是因我国孕产妇基数大，软指标异常并不少见，其中涵盖的微缺失／微重复综合征的数量不容小觑。
由于CMA技术仅在为数不多的产前诊断中心可以开展，且费用较高，而且这些介入性产前诊断据国内外报道造成的胎儿丢失率为0．5％～2％，如果对所有超声软指标异常者都进行介入性产前诊断，显然会增加不必要的资源浪费以及胎儿的丢失率。
本组资料中单项软指标异常pCNVs 检出率为3.33％，而对于两项以上超声软指标异常者，检出率明显升高（8.57％），但由于例数较少，统计学意义不明显。
对于合并有多个软指标异常的胎儿可以考虑行介入性产前诊断及CMA检测以提高检出率。
随着芯片分辨率的提高，pCNVs及VOUS的检出率也随之提高。
当CMA检测提示为pCNVs时，需提供专业的遗传咨询。
如果为明确的染色体微缺失或微重复综合征，应建议父母行CMA检测以明确该CNVs是否为新发，并对再次生育进行风险评估。