高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨
酸钾含量
HPLC in soy sauce and vingar sodium benzoate potassium sorber content
指导老师：张志清教授
学生姓名：敬亚娟
摘要：[目的]用高效液相色谱法测定食醋和酱油中苯甲酸钠和山梨酸钾含量。
【方法】采用RP-HPLC法以Hyperclone BDS C18 柱（150×4.60 nm,5um,phenomenex）为色谱柱；流动相：甲醇：0.02mol/l 乙醇胺（20 :80）；柱温25℃，流速0.8mol/min ，检测波长230nm，进样量(标准进样量：2.5 ，5 ，7.5 ，10 ，15 ul ；样品进样量:5 ul)。
【结果】：食醋中的苯甲酸钠含量为127.15899ug/mol，酱油中的苯甲酸钠含量为723.60033ug/mol，未见则出山梨酸钾。
Abstract: [purpose] with high-performance liquid chromatography (HPLC) in soy sauce and vinegar and sodium benzoate sorbic acid potassium content.【 methods 】 the
RP-HPLC method with Hyperclone BDS using C18 column (150 x 4.60 nm, 5 um, phenomenex) for chromatographic column; Mobile phase: methanol: 0.02 mol/l ethanol amine (20:80); The column temperature 25 ℃, velocity 0.8 mol/min, detected wavelength 230 nm, into the sample weight (standard sample quantity: 2.5, 5, 10, 15, 7.5; the samples into the sample weight ul: 5 ul). 【 results 】 : the content of sodium benzoate feed vinegar 127.15899 ug/mol, soy sauce, sodium benzoate content of
723.60033 ug/mol, did not see out the potassium sorbet.
结论：高效液相色谱法具有高速、高效、高灵敏度的优点，所以数据准确，用外标法计算结果操作简单，计算方便，得出样品中苯甲酸钠的含量。
Conclusion: high performance liquid chromatography with speed, high efficiency, high sensitivity of advantage, so exact data, with external standard method calculation results simple operation, easy calculation, concluded that the content of sodium benzoate samples.
关键词：高效液相色谱法外标法苯甲酸钠山梨酸钾Keywords: high performance liquid chromatography external standard method sodium benzoate potassium sorbet
前言：苯甲酸钠，化学式：C6H5O2Na，是苯甲酸的钠盐，苯甲酸钠是很常用的防腐剂，有防止变质，延长保质期的效果。
山梨酸钾别名2,4-己二烯酸钾，是山梨酸的钾盐，也是防腐剂。
本实验采用RP-HPLC 法对酱油和醋中的苯甲酸钠和山梨酸钾的含量测定，方法简便快速，实用于苯甲酸钠和山梨酸钾的定量分析。
实验目的：
了解高效液相色谱仪基本结构和使用原理，以及初步掌握其操作技能。
学习高效液相色谱保留值定性方法和外标法的标准曲线测定方法。
学习RP-HPLC法对食品中苯甲酸钠和山梨酸钾的含量的测定方法。
实验方法：
采用RP-HOLC法，以Hyperclone BDS C18(150× 4.60mm phenomenex)为色谱柱；甲醇：0.02mol/l乙醇胺（20：80）为流动相，PH=7，柱温25℃，流速0.8ml/min，检测波长230nm，进样量（标准进样量：2.5 ，5 ，7.5 ，10 ，15 ul；样品进样量：5ul）。
实验仪器与试剂：
仪器：高效液相色谱仪【高压输液泵LC-6A，检测器SPD-10A，保温箱CPD-10AS，进样阀7725I】；电子天平；纯水仪；超声波清洗机。
试剂：甲醇为色谱纯、水位超纯水、乙醇胺（乙醇胺溶液：0.02mol/l，称取乙醇胺1.54用水定容1L），稀氨水；苯甲酸钠和山梨酸钾（分析纯）。
实验过程及操作：
开泵20分钟，开检测器，进样分析（进样顺序：先洗针，用有机水洗6次以上，再用水洗6次以上，吸样时针内不可有气泡，Load 位置注入，Inject进样，保持针不动一分钟），取标准样量分别为：2.5,5,7.5,10,15ul，酱油、醋各5ul，一次加入高效液相色谱仪，记录色谱图，分析实验数据。
操作过后关检测器，冲洗仪器，关输液泵。
实验数据及处理：
一．标准样品：
ug/ml
标准品浓度苯甲酸49.4
钠
山梨酸
钾
46.28 苯甲酸钠标准曲线
文件号
进样体积
ul 保留时
间
进样量峰面积
12 2.5 3.665 123.5 430197.406
11 5 3.665 247 947593.438
10 7.5 3.665 370.5 1430164.13
9 10 3.673 494 1893070.5
8 15 3.673 741 2822235.25 以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，做线性回归，得到回归方程y = 3855.5x - 19053
山梨酸钾标准曲线
文件号
进样体积
ul 保留时
间
进样量峰面积
12 2.5 4.498 115.7 525705.875
11 5 4.498 231.4 1166978.25
10 7.5 4.507 347.1 1761366.5
9 10 4.515 462.8 2322898
8 15 4.523 694.2 3432028.75
以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，做线性回归，得到回归方程 y = 4998.2x - 8755.6
二、样品：
样品分
析
文件号
进样体
积ul 保留时
间
进样量峰面积
稀释后浓度
（ug/ml）
样品中苯甲酸
钠浓度（ug/ml）
酱油 5 3.665 72.360033 259931.109 14.47200669 723.60033 食醋 5 3.715 12.715899 29973.15 2.543179873 127.15899 三．色谱图：
实验结果讨论：
根据实验结果可以知道酱油和醋中的苯甲酸钠含量，且样品中未检测出山梨酸钾。
可以分析：1.标准样品和待测样品的保留时间相差无几，保留时间由样品和色谱柱的相互分配所决定。
2.出峰面积与样品量成正比。
结论：从实验结果看来，我们的操作比较成功，色谱图中的基线噪声是无法避免的。
高效液相色谱仪的高效高速等特点也在实验中表现出来了。
参考文献：【1】熊文山；HPLC测定酱油中苯甲酸钠含量；学术期刊：江苏调味食品；2007年第24卷第3期.
【2】魏宝贵；张宇秋；魏兴亚；HPLC内标法同时测定苯甲酸钠、山梨酸钾、糖精的研究；《哈尔滨大学报》；1990年03期.
【3】王瑾；王平；雷春阳；HPLC测定酱油、醋中苯甲酸钠；学术期刊：中国现代医生； 2008第46卷第26期.。