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紫外检测器 荧光检测器来自1、光-波长白炽透明的太阳是由波长小于10nm到1011nm的一组电磁波组成。
太阳
电磁波
2、什么样的物质有紫外、可见吸收
分子的电子结构和分子吸收光后电子状态的变化等可用
分子轨道在任何情况下都是
成键轨道比反键轨道稳定。电子跃迁发生在基态分子轨道（成键）和反键轨道之间，处于基态的电子吸收一
苯丙氨酸（Phe，F） λmax = 257nm
酪氨酸（Tyr，Y） λmax = 275nm
色氨酸（Trp，W） λmax = 280nm
3、紫外检测器
选 择 波 长
发射紫外光的灯 （汞、氘、氙灯）
原理：光源发出的光通过棱镜分解折射出不同波长的光，经过 狭缝调节后，只能让对某组分有最大吸收波长的光通过狭缝照 射到样品上，样品池中的组分吸收了该波长的光，使其通过样 品池后强度下降，使得检测器中的光电敏感元件输出电流发生 变化，这种改变就是测定的结果，这种改变符合比尔定律。
优点：有了参比池可以减小紫外检测器的噪声， 抵抗外来干扰，提高检测器的灵敏度
3、紫外检测器
棱镜发在样品池后，不需 要在棱镜后加狭缝
检测器是排成 一组阵列 的二极管，如256个二组 管，每个可看成一个单 元。
被测定组分通过样品池后照射到多色器上被分解折射成不同波长 单色光。每个二极管都接收到波长不同，强度不等的光，被测组 分通过样品池后的吸收紫外光的情况能够由多色器全波长分解扫 描表现出来，不需要设定特定的波长。
二极管阵列检测器可显示三维色谱图，能够检查 色谱峰的纯度。可同时进行多波长测定。重现性 好。但是灵敏度一般你于普通的紫外检测器。
4、荧光检测器
如果电子吸收了多余的能量，冲出了紫外吸收的范围到达更高的 能阶，在回到低能阶的路途中因与其它分子的碰撞或其它原因， 这些高能电子不会很快消失，当它们到达一个特定的次高能阶时， 一下子降到一个特定的次低能阶，这个过程发出的光就是荧光， 吸收能量的分子中的电子被激发从低能阶到高能阶，在跃迁的过程中电 亦称发射荧光。 子吸收了能量使紫外光的强度降低。这是紫外吸收的原理。
优点
10~1000倍。
需要的样品最少
一定是这类化合物的分子中的电子被激发后能吸收多 余能量达到更高能阶，所以才能用荧光检测器检测。
λ发射荧光＜λ激发荧光（电子撞击失去一部分能量）
激发荧光能阶≈紫外吸收的能阶 举例：糖基化：激发波长260nm，发射波长420nm
4、荧光检测器
荧光检测器多采用90°角的光路，这样避开了激发光和发射光之间的
干扰。所用灯与紫外检测器一样，一般用氙灯，也是光电倍增管作为
敏感器。
有极高的灵敏度和良好的选择性，灵敏度约为紫外的
3、紫外检测器
原理：双光路一路是样品池，一路是参比池， 两路对等，光源以完全相等的两束光投射到测 量池和参比池上，若两池中都是纯流动相（有 的参比池中充满空气作为参比物），它们的吸 收值是相等或几乎没有吸收，则两光照射到光 电敏感器上的强度相等，无信号输出。即使有 噪音也相互抵消，基线平稳。当有组分进入样 品池，吸收紫外光使两边的光电敏感接受到的 照射强度不等，像天平失衡，电路上着重电泳 补偿，于是有信号。
定能量的光子后，可发生 σ- σ*、 σ-π*、π-σ*、π-π*、n-σ*、n-π*、各跃迁所需能量不同。
2、什么样的物质有紫外、可见吸收
41、、πσ--πσ*跃*所迁需是能双量键最中大π，电不子易由激π发成，键如轨饱道和向烃反，键只轨含道有的σ跃键迁，，其能跃量迁比出n→现π在*远跃紫迁外大区，，比波n-长σ* 小小，于因20此0n这m，种例跃如迁A也ma大xC部H4分=1出25现nm在等在。近紫外区，其εmax较大，大多数是强吸收峰。根据π-π*产 生2、的n体-σ系*跃不迁同，，杂吸原收子带O可、表N、示S以、下X都几含种有：n非键轨道，如C-Cl，C-OH等都发生n-σ*跃迁，其跃 （迁1所）需、能共量轭比非σ封-闭σ体*小系中但的是π主-要π还*（是K在带）20如0n丁m以二下烯。CH2=CH-CH=CH2，λmax=217nm。 （3、2）n→、πB带*跃（迁苯，吸只收有）分芳子香中族同和时杂存环在芳杂香原族子化（合有物n光非谱键的轨特道征）吸和收双。键芳π环电的子B时带才吸有收可在能发生 2n3-0π~2*7跃0n迁m，，如如苯C=乙O，烯N，=Nλ，mNa=xO=等24，4n其m、吸λ收m能ax量=2小82，nm大。部分在200~700nm之间，但是εmax较小， （是3弱）吸、收封。闭共轭体系（如芳香族和杂环芳香族化合物）