物理方法 化学方法
cell suspension culture 物理方法
体积选择法 通过细胞体积大小分级，直接将处于相同周期的细胞进行 分选，然后将同一状态的细胞继代培养于同一培养体系中，从 而可能保持相同培养体系中的细胞具有较好的一致性。这种方 法的优点是操作简单，分选细胞维持了自然生长状态，因而不 会有其它处理所带来的对细胞活力的影响 。 低温处理法 冷处理也可以提高培养体系中细胞同步化的程 度。收集细胞，在4摄氏度温度下处理数天，添加 新鲜培养液。
cell suspension culture
细胞初始培养
根据培养基在容器中的运动方式来区分，有4中振荡 培养方法： 旋转培养：培养瓶呈360º的缓慢旋转移动，使细胞培 旋转培养 养物保持均匀分布和保证空气供应。 往返振荡培养：机器带动培养瓶在一直线方向往返振 往返振荡培养 荡。 旋转振荡培养：机器带动培养瓶在平行面上作旋转振 旋转振荡培养 动。 搅动培养：利用搅拌棒不断转动，使培养基被搅动。 搅动培养
cell suspension culture 化学方法
饥饿法
饥饿也是调整细胞同步化的方法之一。在一个培养体系中， 如果细胞生长的基本成分丧失，而导致细胞因饥饿而分裂受 阻，从而停留在某一分裂时期。当在培养基中加入所缺乏的 成分或者将饥饿细胞转入完整培养基中继代培养时，细胞分 裂又可以重新恢复。饥饿导致的细胞分裂受阻，常常使细胞 不能合成DNA，即不能进入S期；或细胞分裂不能进行，即不 能进入M期。
连续培养是通过控制加入定量的营养物质使细胞 连续培养 生长率和细胞密度保持不变的一种培养方式，主要 用于研究和生产次生代谢物质 。 连续培养主要用 于大规模细胞培 养，通过添加新 鲜培养液和排放 已利用的培养液 来平衡营养水平， 使培养细胞长期 处于静止期状态。
cell suspension culture 开放式和封闭式区别
培养初期悬浮细胞处于 滞后期，细胞很少分裂； 进入对数生长期后，细 胞分裂活跃数目迅速增 加；经过3~4个细胞世 代之后，培养基中某些 营养物质已经耗尽，或 是有毒代谢产物的积累， 增长逐渐缓慢，进入静 止期后，增长完全停 止。
细胞数 静止期 减慢期 滞后期
对数生长期
cell suspension culture
生工学院09级 班 生工学院 级2班 李丽华
悬浮培养基
cell suspension culture
• •
细胞悬浮培养的定义 单细胞制备的方法
• 悬浮培养的条件 件
• 细胞初始培养
•
细胞悬浮培养的类型
• 悬浮培养细胞的同步化
•
国内悬浮培养技术产业化存在的挑战和展望
cell suspension culture
cell suspension culture
展望
应该认识到，快速实现悬浮培养技术在疫苗生产中的 应用只是搭建了一个升级的工艺平台，而不是最终目的， 行业和企业发展真正的动力是新药、新疫苗、新工艺以 及配套技术的创新。例如： 无血清培养病毒生产技术的 开发，包括无血清培养基的开发；利用合适的培养基和 转染或驯化技术实现贴壁细胞的悬浮培养构建；新宿主 细胞表达品种开发，如同一种产品采用新的宿主细胞表 达或是开发一种高效表达的宿主细胞适应几种产品的表 达；利用基因工程技术，开发更安全的疫苗品种；以及 生物制品相关的关键技术和产品国产化，如个性化细胞 培养基、生物反应器、微载体、纯化装置、佐剂等。
定义1 定义 ：细胞悬浮培养是指将单个游离细胞或小细胞
团在液体培养基中进行培养增殖的技术。 应用学科：细胞生物学（一级学科）；细胞培养与细 胞工程（二级学科）
定义2 定义 ：在流动的液体培养基中培养非贴壁的悬浮细
胞或小细胞团的细胞或组织的培养方法。细胞附着在 微运载体上的培养也是一种悬浮培养。 应用学科：生物化学与分子生物学（一级学科）；方 法与技术（二级学科）
开放式中：在注入新鲜培养基的同时，培 养细胞随同培养液一起流出。 封闭式中：排出液中的细胞用机械方法收 集后，又放入原培养基，所以其培养细 胞数目不断增加。
cell suspension culture 悬浮培养细胞的同步化
细胞同步化是指同一悬浮培养体系的所有细 细胞同步化 胞都同时通过细胞周期的某一特定时期 。
cell suspension culture 细胞悬浮培养的类型: 细胞悬浮培养的类型
分批培养（ 分批培养（batch culture） ） 连续培养(continuous culture) 连续培养
cell suspension culture
分批培养是指细胞在一定容积的培养中进行培 分批培养 养，目的是建立单细胞培养物。
cell suspension culture 单细胞制备的方法 ：只有薄壁组 注意
机械法 酶解法 愈伤组织诱导法
织排列松散，细胞 间接触点很少时用 机械法分离叶肉细 胞才能取得成功。
cell suspension culture 悬浮培养的条件
一个成功的悬浮细胞培养体系必须满足三个基 本条件： 一是悬浮培养物分散性良好，细胞团较小； 二是均一性好，细胞形状和细胞团大小大致相同； 三是生长迅速。
国内悬浮培养技术产业化的挑战
国际上反应器悬浮培养技术已广泛用于生物制药 生产，且在高表达细胞株的构建、个性化培养基的研 发等方面不断发展。大量新建反应器和产物表达量的 提高已导致反应器容量过剩，发达国家市场出现饱和、 向发展中国家扩展的趋势。各大生物制药巨头开始通 过合作或购并等方式进入新兴的中国市场。制药巨头 赛诺菲-安万特看中中国兼具研发和新兴市场这两种特 质，在药品研发、生产、包括动物疫苗生产等领域在 中国进行了大量投资；而诺华公司则在2009年底，通 过收购中国第二大甲流疫苗供应商—浙江天元生物股 权，快速进军中国疫苗行业。
抑制法
通过一些DNA合成抑制剂处理细胞，使细胞滞留在DNA 合成前期，当解除抑制后，即可获得处于同一细胞周期----G1期的同步化细胞。
cell suspension culture 国内悬浮培养技术产业化存在的 挑战和展望
1、 国内悬浮培养技术产业化的挑战 2、展望 展望
ห้องสมุดไป่ตู้
cell suspension culture