山东省科学技术奖—科技进步奖公示内容一、项目名称Kinesin家族成员调控肿瘤侵袭转移的分子机制研究二、申报奖种山东省科技进步奖三、申报单位青岛大学山东大学齐鲁医院山东大学四、推荐单位意见该项目阐述了沉默Kif2a对Tca8113细胞增殖和侵袭转移能力的影响，揭示沉默Kif2a对舌癌增殖及侵袭转移的抑制作用并阐述了沉默Kif2a通过Rho/ROCK信号转导通路调控肿瘤细胞侵袭转移的机制，为以细胞骨架为靶点的抗肿瘤转移治疗提供新型靶分子和理论依据。
立项新颖，具有创新性，课题按时顺利完成，达到预期研究目标，并发表相关SCI论文多篇，建议推荐申报科技进步奖。
五、项目简介1、首先在原有研究结果基础上，通过MTT实验、克隆生成实验、流式细胞术、划痕实验、Transwell小室实验观察了Kif2a基因沉默对舌癌细胞Tca8113细胞增殖及侵袭迁移能力的影响。
结果显示，Kif2a基因沉默能显著抑制舌癌的增殖和侵袭转移能力。
进一步研究了临床常用化疗药物5-氟尿嘧啶（5-Fu）与Kif2a 基因沉默对裸鼠移植瘤生长的协同抑制效应，Kif2a基因沉默能显著增强5-Fu 对Tca8113细胞的增殖抑制效应,增加Tca8113细胞对5-Fu的药物敏感性。
2、构建细胞移植瘤裸鼠模型。
活体、实时观察Kif2a基因沉默对裸鼠移植瘤生长的作用，记录裸鼠生存期并绘制生存曲线。
结果显示Kif2a基因沉默显著抑制裸鼠移植瘤的生长。
3、Real time RT-PCR及Western blot技术检测空白对照组、阴性对照组及Kif2a 干扰组细胞内Rho家族成员RhoA、ROCK1、Rac1及Cdc42基因的表达情况。
结果发现，与阴性对照组比较，Kif2a干扰组细胞内RhoA、ROCK1、Rac1及Cdc42的基因表达水平显著下降。
4、应用Rho/ROCK信号通路特异性抑制剂LY-27632和激动剂溶血磷脂酸LPA，人工划痕实验及transewll小室显示Kif2a基因沉默抑制Tca8113细胞迁移，表明Kif2a可能通过RhoA/ROCK信号通路调控细胞的迁移能力。
5、Kif2a干扰组细胞中PI3K、Akt及Bcl-2基因mRNA及蛋白的表达水平均显著降低，而Bax基因的mRNA及蛋白表达水平显著升高，由此推测Kif2a基因沉默可能通过PI3K/Akt信号通路相关分子影响细胞的凋亡，特别是通过调控Bcl-2/Bax的比值。
6、构建稳定敲除Kif2a基因的Tca8113细胞裸鼠转移瘤模型，并采用免疫组化染色方法检测转移瘤组织内RhoA、ROCK1、Rac1及Cdc42等蛋白表达的变化。
结果显示Kif2a基因沉默显著抑制RhoA、ROCK1、Rac1及Cdc42的表达，表明Kif2a 基因沉默抑制Tca8113细胞的侵袭转移能力，这一作用可能是通过调控Rho/ROCK1信号通路而实现的。
本研究首次阐述舌鳞癌中Kif2a基因沉默对细胞侵袭转移能力的影响。
该研究结果将丰富Kif2a的研究，并为口腔肿瘤抗转移治疗提供新的思路及理论依据。
首次阐述Kif2a可能通过自身解聚微管改变细胞骨架，并通过Rho蛋白家族及Rho/ROCK信号转导通路调控肿瘤侵袭转移的分子机制，为舌癌筛选以细胞骨架为靶点的抗肿瘤转移治疗的新型靶分子提供重要的线索和理论依据。
六、客观评价：该项目阐述了沉默Kif2a对Tca8113及SAS细胞增殖和侵袭转移能力的影响，揭示沉默Kif2a对舌癌增殖及侵袭转移的抑制作用并阐述了沉默Kif2a通过Rho/ROCK信号转导通路调控肿瘤细胞侵袭转移的机制，为以细胞骨架为靶点的抗肿瘤转移治疗提供新型靶分子和理论依据。
立项新颖，具有创新性，课题按时顺利完成，达到预期研究目标，并发表相关SCI论文多篇，具有较高的临床意义。
七、推广应用情况：项目应用单位名称：青岛大学附属医院应用单位注册地址：青岛市市南区江苏路16号应用起止时间：2013-2015年具体应用情况：主要用于口腔肿瘤标志物的检测，并免疫组化检测口腔癌原发灶及淋巴结内转移灶中Kif2a的表达，用于肿瘤分期及预后判断。
主要知识产权证明目录：1.L Zhang,Wang CQ,F Liu,ZQ Dong,P Zhao,XN Dong,FC Wei,X Qu,FGXiang.Effect of human Dachshund homolog1on the proliferation,migration,and adhesion of squamous cell carcinoma of the tongue.Oral Surgery,Oral Medicine,Oral Pathology,Oral Radiolog2016;121:58-66.(通讯作者)2.Wang CQ,Wang CG,Wei ZM,Li YJ,Wang WH,Li X,Zhao J,Zhou X,Qu X,Xiang FG.Suppression of motor protein KIF3C expression inhibits tumor growth and metastasis in breast cancer by inhibiting TGF-βsignaling.Cancer Lett.2015;368(1):105-14.(IF=5.621)3.Wang CQ,F G Xiang,Y J Li,X M Xing,N Wang,J H Chi,W J Yu,Relationbetween the expression of Mitotic Centromere-associated Kinesin and the progression of squamous cell carcinoma of the tongue.Oral Surgery,Oral Medicine,Oral Pathology,Oral Radiolog2014;117:353-360.4.Wang CQ,YJ Li,ZM Wei,CJ Zhu,X Qu,FC Wei,XM Xing,W J Yu,Stablegene-silence of Kif2a synergistic with5-Fluorouracil suppresses oral tongue squamous cell carcinoma growth in vitro and in vivo.Oral Surgery,Oral Medicine, Oral Pathology,Oral Radiolog2013Jul;116(1):49-54.5.Wang CQ,Qu X,Zhang XY,Zhou CJ,Liu GX,Dong ZQ,Wei FC,Sun SZ.Overexpression of Kif2a promotes the progression and metastasis of squamous cell carci noma of the oral tongue.Oral Oncol.2010Jan;46(1):65-9.6.Jianli Wang，Siqin Ma，Rong Ma，Xun Qu，Wenjun Liu，Cuixia Lv，Song Zhao，Yunyun Gong。
KIF2A silencing inhibits the proliferation and migration of breast cancer cells and correlates with unfavorable prognosis in breast cancer.BMCcancer2014,14:4617.赵洁，王成勤，赵涵，董娴宁乳腺癌免疫组化全自动染色与手工染色的体会临床与实验病理学杂志2014年1月；30（1）：96-98（通讯作者）8.Xia Y,Wang YW,Jiang YX,Yu WJ,Li YJ,Xiang FG,Wang CQ.Primaryintravascular large B cell lymphoma of the endometrium.Acta Histochem.2014 Jun;116(5):993-6.（通讯作者）9.Wang N,Feng Y,Wang Q,Liu S,Xiang L,Sun M,Zhang X,Liu G,Qu X,Wei F,Neutrophils infiltration in the tongue squamous cell carcinoma and its correlation with CEACAM1expression on tumor cells,2014,PLoS One9:e8999110.Wang N,Wang QJ,Feng YY,Shang W,Cai M,Overexpression of Chemerin wasassociated with tumor angiogenesis and poor clinical outcome in squamous cell carcinoma of the oral tongue,Clinical Oral Investigation,2014,18:997-1004. 11.Jianli Wang,Xiuli Xiao,Jianmin Wang,Naazneen Iqbal,Laurie Baxter,Kristin A.Skinner,David G.Hicks,Steven I.Hajdu,and Ping Tang*.Predictors of Nipple–Areolar Complex Involvement by Breast Carcinoma:HistopathologicAnalysis of787Consecutive Therapeutic Mastectomy Specimens.Ann Surg Oncol,19(4):1174–1180,2012.（SCI收录4.654）12.JianLi Wang,Xun Qu,WenJun Liu,YanYan Wang,CuiXia Lv,JingZhongSun,ShanZhen Sun,Rong Ma*.Clinicopathological Significance of CEACAM1 Gene Expression in Breast Cancer.Chinese Journal of Physiology,54(5):332-339, 2011.（SCI收录）13.Liang W,Wang J,Wang C,Lv Y,Gao H,Zhang K,Liu H,Feng J,Wang L andR.Ma*,"Detection of high-risk human papillomaviruses in fresh breast cancer samples using the hybrid capture2assay,"J Med Virol,vol.85,no.12,pp.2087-92,Dec2013.（SCI收录2.47）14.Zhao S,Yuan Q,Hao H,Guo Y,Liu S,Zhang Y,Wang J*,Liu H,Wang F,Liu K,Ling EA,and Hao A*.Expression of OCT4pseudogenes in human tumours: lessons from glioma and breast carcinoma.J Pathol.223(5):672-82,2011.(SCI收录5.2)15.Song Zhao,Xiaodong Gai,Yongmei Wang,Weili Liang1,Haidong Gao,KaiZhang,Huimin Wang,Yanhong Liu,Jianli Wang*,and Rong Ma*.Diagnostic Values of Carcinoembryonic Antigen,Cancer Antigen15-3and Cancer Antigen 125Levels in Nipple Discharge.Chinese Journal of Physiology2015,58(6): 385-392,16.Song Zhao*,Lanwei Xu*,Wenjun Liu,Cuixia Lv4,Kai Zhang,Haidong Gao,Jianli Wang,Rong parison of the expression of prognostic biomarkers between primary tumor and axillary lymph node metastases in breast cancer.Int J Clin Exp Pathol2015;8(5):5744-574817.Yan-Rong Lv,*,Jian-Li Wang,*Kai Zhang,Hai-Dong Gao,Jing-Zhong Sun,Yun-Yun Gong,and Rong Ma.Human Papilloma Viruses(HPVs)noCo-Existence in Breast Cancer and Cervical Cells in the Same Patient.Chinese Journal of Physiology57(2):105-106,201418.王崇杰、王建丽、牟洁、王燕燕、张凯、高海东、吕翠霞、刘文君、张庆慧、马榕.乳腺癌术前核芯针穿刺检测ER、PR、C-erbB-2、Ki-67的临床研究。