微柱凝胶法做ABO、Rh血型实例
• 红细胞抗原与相应抗体在微柱凝胶介质中发生凝 集发应
ABO、Rh血型鉴定质量控制
• 1、技术上的失误
• 假阴性
①抗体试剂与红细胞比例不对应。 •
②红细胞悬液过淡。 • ③离心速度、时间不够。 • ④忽略观察溶血现象，因溶血也是阳性反应。
2.微柱凝胶技术
• 微柱凝胶技术是液相技术与固相技术的巧妙组合，是凝胶 过滤技术、离心技术、红细胞凝集试验技术（特异性抗体 抗原反应）的完美结合。通过对凝胶种类的选择和凝胶浓 度的调节来控制分子筛孔径大小,使分子筛只允许游离红 细胞通过,从而达到分辩凝集红细胞和非凝集红细胞的目 的。微柱凝胶技术是目前最易大规模推广、最适于常规试 验的最好血型血清学试验技术。
抗B
抗 AB（O 型血清）
A 型红 细胞
B 型红 细胞
O 型红 细胞
+-
+
- + - A型
-+
+
+ - - B型
++
+
- - - AB 型
--
-
+ + - O型
鉴定ABO血型常用方法
• 1. 生理盐水凝集法
盐水介质
• 原理：Ag+Ab
AgAb
用生理盐水为介质，检测的是IgM性质抗体 • 玻片法 • 试管法
ABO血型分型原则
血型
红细胞上抗原 血清中抗体
A
A
抗B
B
B
抗A
O
无
抗A，抗B
AB
A、B
无
血型鉴定前的准备
一、标本的采集 1.红细胞悬液标本 门诊血型常用手指血做正定性。但现在已经不提倡了。 • 采集EDTA-K2抗凝的静脉血 • 离心，取红细胞用生理盐水洗涤 • 配制红细胞悬液：2％红细胞悬液用于抗体效价的测定； 5 ％红细胞
悬液用于血型鉴定、交叉配血试验， • 2.血浆或血清标本
血型及配血标本的要求
• 护士根据送检单的要求，双人核对采集标本。 • 采集后立即送检。 • 输血科工作人员注意核对接收标本 • 两个小时内要完成血型的检验。 • 配血标本要三天内的。 • 标本要保存七天。
ABO血型鉴定方法
• 血型鉴定
抗原+抗体反应
输血科的基本原 则和知识培训
一 复习：有关血型的简单知识与概念
• 血型是人体血液的一种遗传性状，各种血液成分包括红细胞、白细胞、 血小板及某种血浆蛋白在个体之间均具有抗原成分的差异，受独特的 遗传基因控制。
• 由若干个相互关联的抗原抗体组成的血型体系，称为血型系统。 • 血型被认为是指各种血液成分的遗传多态性标记。 • “免疫血液学”在临床医学、人类学、遗传学、法医学、考古学等方面的应用日趋广
泛， 尤其是在输血、器官移植、骨髓源自植等临床实践中发挥着重要作用。人类最重要的几个血型系统
• 红细胞血型系统 ABO血型系统 Rh血型系统
• 其他血型系统 白细胞抗原系统 血小板抗原及抗体 血清蛋白成分的抗原特异性
血型抗原与抗体的几个特性
• A或B抗原在胚胎期及出生时便能检出，但敏感性较低，到20岁左右时 才达高峰。抗原性终身不变，但到老年敏感性有所下降。
• ABO血型系统抗体有免疫抗体和天然抗体之分。 抗体有抗A和抗B两种。 人在出生前尚未产生抗体，出生后3-6个月才开始出现，至青春期达高 峰。产生抗体的功能可延续终身，但其效价随着年龄增长而逐渐降低。 天然抗体可能是由一种无觉察的抗原刺激而产生。 血型抗体是免疫球蛋白，免疫性抗体主要是IgG，天然抗体主要是IgM。
• 正向定型（direct typing）:
已知特异性抗体（标准血清） 检测红细胞上的未知抗原
反向定型（indirect typing):
已知血型的标准红细胞 检测血清中的未知抗体
ABO血型正、反向鉴定及结果判断
正向定型 （标准血清+被检查红细胞）
反向定型 （标准红细胞+被检查血
清）
结果 判读
抗A
三、方法 1、从被检者静脉，制成血清或血浆。 2、试管的准备，同标准血清鉴定法 3、在A管放标准A型红细胞1滴，B管放标准B型红细胞1滴，在O型管放
标准o型红细胞1滴。 4、各加被检血清2滴，分别混匀，离心后判断结果同前。
ABO血型正、反向鉴定及结果判断
正向定型 （标准血清+被检查红细胞）
反向定型 （标准红细胞+被检查血
正定型血型鉴定操作程序图（玻片法）
血型鉴定
试管法
1、每个被检者准备小试管1支，贴好名签，加入等渗盐水1ml。从毛细血 管采血配成5%的红细胞悬液，注意血液不能凝结。
2、每个被检者准备小试管3支，分别贴上A、B标签，并标上姓名，按标 签分别加抗A、B抗体2滴。
3、两管各加被检红细胞悬液1滴混匀。 4、放在离心机内，用1000~3000转/分，1分钟，观察现象。
清）
结果 判读
抗A
抗B
抗 AB（O 型血清）
A 型红 细胞
B 型红 细胞
O 型红 细胞
+-
+
-
+
- A型
-+
+
+
-
- B型
++
+
-
-
- AB 型
--
-
+
+
- O型
问题
在特殊环境，没有标准血清和标准 红细胞，仅知一个A型（或B型）人时， 若用血液，怎么来鉴定人的血型？
已知A型红细胞+被检者血清 已知A型血清+被检得红细胞
微柱凝胶种类
• （一）中性胶（又称空白胶，仅含有葡聚糖凝 胶）：用做检测IgM抗体与相应抗原红细胞的反 应。如ABO反定型。
• （二）特异性胶（如加入过抗-A、抗-B、抗-D等 特异性抗体的凝胶）：利用包被的抗体检测相应 抗原。
• （三）抗球蛋白胶（包被了单特异性或多特异性 抗人球蛋白试剂的凝胶）。用于检测IgG抗体与相 应抗原红细胞的反应。
加被检红细胞悬液
加试剂抗体血清
离心
相对应的抗原抗体反应
观察结果
镜下的凝集与非凝集
反向定型
一、用途：当没有合适的标准血清，或用标准血清鉴定出现可疑结果时， 可用此法核对。
二、标准红细胞悬液的配置：分别取已知敏感性高的标准A、B、0、三 型 人的红细胞红洗涤三次，配成5%的红细胞悬液（若无标准红细胞， 可用5个A型，2个B型，2个O型人红细胞，分别按型混合，代作已知 标准红细胞）
微柱凝胶技术原理
• 当抗原抗体反应时红细胞发生凝集（包括已致敏 的红细胞通过抗人球蛋白的桥连作用发生的凝 集），在一定的离心力作用下，凝集的红细胞不 能通过凝胶间隙而留在凝胶分离柱上层或分散在 凝胶分离柱中，此为阳性反应；而未凝集的红细 胞在离心力的作用下可通过凝胶间隙而沉积于凝 胶分离柱的底部，此为阴性反应。