肌红蛋白测试标准操作流程
一实验组成
1 实验仪器及器具:
Mini VIDAS全自动分析仪一台、洁净工作台、低速离心机、20~200µl加样器
2 试剂盒组成:
MYO试剂条说明:试剂条上有 10 个孔,用贴有标签的铝箔密封
二实验原理
一步免疫分析夹心方法(sandwich)和最后荧光检测(ELFA)
样品被吸取到含有用碱性磷酸酶(共扼物)标记的抗肌红蛋白抗体的孔中。
样品/共扼物混合物在运行中进出固相包被针SPR数次。
该操作使抗原结合到固定在固相包被针 SPR内壁的免疫球蛋白上,并结合到共扼物上,以形成“夹心”。
没有结合的组分在冲洗步骤中清除。
在最后检测步骤中,将底物(磷酸4 甲基-伞形烷)循环进出固相包被针 SPR。
共扼物酶催化本底物水解成荧光产物(4-甲基伞形酮)。
该产物的荧光在 450nm下测量。
荧光强
度与样品中出现的抗原的浓度成正比。
分析结束的时候,由VIDAS根据储存在存储器中的校正曲线,自动计算结果,然后打印输出
三标本
1 检测样本:
150µl血清或血浆 (肝素锂)
由于EDTA或柠檬酸钠引起所测量的数值的下降,所以不可使用在EDTA或柠檬酸钠上采集的血浆
2 影响因素
没有发现下列因素对分析有显著影响:
(1)溶血 (用血红蛋白形成尖峰样品(spiking)之后:0到292 µmol/l 或 0 到 470 mg/dl)
(2)脂血症(在用脂质形成尖峰样品(spiking)之后:0到 30 g/ml,等价于在三酸甘油酯中)
(3)胆血症(在用胆红素形成尖峰样品(spiking)之后:0到540µmol/l)
(4)肝素(最高达 50IU/ml)
但无论如何,建议不要使用明显溶血、脂血症、胆血症的样本,如可能的话,重新收集样本。
四操作程序
1 标准曲线条码(MLE)输入
在每使用新一批试剂前,必须用每一试剂盒中都有的MLE卡(规格单)将规格(或工厂主校正曲线数据)输入仪器。
步骤如下:
(1)按Master Lot Menu
(2)放入MLE卡片
(3)按Read Master Lot
(4)按A或B
读取完成后,仪器会自动打印相应信息
2 校准曲线
当新一批试剂开启时,在主批次数据 (MLE卡片)输入后,应用试剂盒中的两种校准液执行校准,然后每 14 天应重新校正一次。
(1)按说明书溶解标准品S1和质控品C1
(2)按Status Screen ,选择A或B
(3)键盘输入位置1,按 S,再键入1,回车(自动跳到下一位置)
(4)按s,键入1,回车
(5)重复以上步骤输入C1后,回车
(6)屏幕显示S1,S1, C1
(7)在机器中放入相应试剂条和SPR,并且加入上述校准品
(8)开始测试
测试大约需要20min,结束后机器将自动计算结果并打印
3 标本测试
(1)按Status Screen,选择A或B
(2)键盘输入位置1,按sample id,再键入标本编号,回车(自动跳到下一位置)(3)重复以上步骤
(4)输入完成后,按返回键
(5)屏幕显示已输入的标号
(6)在机器中放入相应试剂条和SPR,并且加入对于待测标本
(7)开始测试
测试大约需要20min,结束后机器将自动计算结果并打印
五结果判读
1 性能
检测范围 5-1000 μg/l
检测下限 < 5 μg/l
日内重复性在183μg/l,CV 1.6%,
在346ug/l,CV3.2%,
在728μg/l,CV 3.0%
日间重复性在183μg/l,CV 3.3%
在346ug/l, CV3.8%,
在728μg/l,CV 4.4%
2 结果解释
期望值:10-46.0 μg/l
根据对197个无心脏病历史的病人进行的评估,95%在10-46.0 μg/l。