核内参PCNA抗体-用于细胞核内参的PCNA单抗
增殖细胞核抗原(Proliferating Cell Nuclear Antigen简称PCNA)由Miyachi等于1978年在SLE(系统性红斑狼疮)患者的血清中首次发现并命名,因其只存在于正常增殖细胞及肿瘤细胞内而得名。
PCNA是一种分子量为36KD的蛋白质,在细胞核内合成,并存在于细胞核内,为DNA聚合酶的辅助蛋白。
由于其在细胞核内稳定表达,因此其抗体被广泛应用于细胞核蛋白的内参抗体。
如何选择合适的细胞核内参抗体?
常用的细胞总蛋白质内参有GAPDH和细胞骨架蛋白β-Actin或β-Tubulin等。
对于一些植物的样本,则需要特别的植物Actin蛋白作为内参。
当实验样品中只是核蛋白,而不是细胞总蛋白提取液时,可以用组蛋白H(Histone H),或者增殖细胞核抗原(PCNA)等为核内参抗体。
除了这些,其它常见的核蛋白内参还有K70, K80, Lamin A和B,在一些文献报道中,Erk2、TATA binding protein(TBP)以及c-Jun、c-Fos等都有使用。
但是需要注意的问题是核蛋白内参的选择需要考虑实际的试验环境,比如在涉及细胞增殖相关试验中,c-Jun由于自身表达变化就不适合做内参;而在凋亡实验时,TBP、Lamin等也不适合作为内参。
另外,我们还需要根据目的蛋白的大小选择合适的核内参,我们推荐内参要与检测的目的蛋白的分子量最好相差5KD以上,因此你需要根据你目的检测蛋白的分子量来选择合适的内参。
PCNA的检测分子量大约在28kD,而Histone H3的检测条带大约在18kD,因此PCNA比较适合用于检测目标蛋白在较大的WB实验,而Histone H3则不适合用于13kD-23kD大小的目的蛋白内参。
另外,虽然PCNA是最合适的核内参抗体之一,但是在某些条件下,一些影响增殖的因素会导致样品间PCNA含量的变化,就不适合作为内参。