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蛋白酶及蛋白酶抑制剂大全
日期:2012—0６－13 来源:互联网
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相关专题:解析蛋白酶活性测定聚焦蛋白酶研究新进展
摘要: 破碎细胞提取蛋白质得同时可释放出蛋白酶,这些蛋白酶需要迅速得被抑制以保持蛋白质不被降解。
在蛋白质提取过程中,需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解、以下列举了5种常用得蛋白酶抑制剂与她们各自得作用特点,因为各种蛋白酶对不同蛋白质得敏感性各不相同,因此需要调整各种蛋白酶得浓度
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蛋白酶抑制剂
破碎细胞提取蛋白质得同时可释放出蛋白酶,这些蛋白酶需要迅速得被抑制以保持蛋白质不被降解、在蛋白质提取过程中,需要加入蛋白酶抑制剂以防止蛋白水解、以下列举了5种常用得蛋白酶抑制剂与她们各自得作用特点,因为各种蛋白酶对不同蛋白质得敏感性各不相同,因此需要调整各种蛋白酶得浓度。
由于蛋白酶抑制剂在液体中得溶解度极低,尤其应注意在缓冲液中加人蛋白酶抑制剂时应充分混匀以减少蛋白酶抑制剂得沉淀。
在宝灵曼公司得目录上可查到更完整得蛋白酶与蛋白酶抑制剂表。
常用抑制剂
PＭSＦ
1)抑制丝氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶,凝血酶)与巯基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);
２)1０ｍg/ｍｌ溶于异丙醇中;
3)在室温下可保存一年;
４)工作浓度:17~17４ug／ml(0。
1～1.0mｍoｌ／L);
５)在水液体溶液中不稳定,必须在每一分离与纯化步骤中加入新鲜得PMSF。
EDTA
１)抑制金属蛋白水解酶;
2)0.5ｍol/L水溶液,pH8～９;
3)溶液在4℃稳定六个月以上;
４)工作浓度:0、５～1.5mmol/L、(0.2～０、5mg/ｍｌ);
5)加入NaOH调节溶液得ｐＨ值,否则EＤTA不溶解。
胃蛋白酶抑制剂(ｐepstａnti n)
l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶,血管紧张肽原酶,组织蛋白酶Ｄ与凝乳酶;
2)1mg/mｌ溶于甲醇中;
3}储存液在4℃一周内稳定,-20℃稳定6个月;
4)1作浓度:０、7ｕｇ/ml(1umｏl/L)
5)在水中不溶解。
亮抑蛋白酶肽(leupepｔｉn)
1)抑制丝氨酸与巯基蛋白酶,如木瓜蛋白酶,血浆酶与组织蛋白酶Ｂ; ２)lOｍg/ml溶于水;
3)储存液４℃稳定一周,－20℃稳定6个月;
4)工作浓度０。
5mｇ/ｍl。
胰蛋白酶抑制剂(aｐｒotinin)
1)抑制丝氨酸蛋白酶,如血浆酶,血管舒缓素,胰蛋白酶与胰凝乳蛋白酶; ２)lOmg／ml溶于水,ｐH7～8
3｝储存液4℃稳定一周,－20℃稳定6个月;
４)工作浓度:０。
０6~２.0uｇ/ml(0.01～０。
3umｏｌ/L);
5)避免反复冻融:
6)在pＨ>１2。
８时失活。
蛋白酶抑制剂混合使用
35ug/ml PMSF…………………………………丝氨酸蛋白酶抑制剂0.3mg／ml ＥDTA…………………………………金属蛋白酶抑制剂０。
７ug／ml胃蛋白酶抑制剂(Ｐepstatin)…………酸性蛋白酶抑制剂０.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupｅpｔin)……………广谱蛋白酶抑制剂
常用蛋白酶抑制剂表
作者:青岚点击:次来源于-生物秀知道
相关得检测中,首先最关键得一步便就是蛋白质得提取。
蛋白质得提取过程中,我们要经常加与蛋白酶抑制剂(pｒｏteａse inhｉbitor)以防止蛋白质得降解。
另外在磷酸化蛋白得研究过程中,磷酸酶抑制剂也就是必不可少得,本文总结了常用得蛋白酶抑制剂(prｏteasｅ inhibit ｏｒ)PMSF,Lｅupｅptiｎ亮肽素,Aproｔinin抑肽酶,Ｐｅｐsｔatin胃蛋白酶抑制剂(ｐroｔeａs ［蛋白酶抑制剂分子量溶解性磷酸酶抑制剂工作浓度贮存液胰蛋白酶丝氨酸］
在与蛋白相关得检测中,首先最关键得一步便就是蛋白质得提取。
蛋白质得提取过程中,我们要经常加与蛋白酶抑制剂(ｐroteasｅinhibitｏr)以防止蛋白质得降解。
另外在磷酸化蛋白得研究过程中,磷酸酶抑制剂也就是必不可少得,本文总结了常用得蛋白酶抑制剂(proteaｓe ｉnhiｂｉtor)PMSF,Lｅｕpeｐtin 亮肽素,Ａproｔｉｎin抑肽酶,Ｐepｓtaｔin胃蛋白酶抑制剂(ｐrｏtｅase inhibitor),EDTＡ-Ｎａ2等以及磷酸酶抑制剂NaF氟化钠,Na3VＯ4 原矾酸钠 ,ＢETA—gｌｙcｅｒｏｐｈoｓｐhaｔe甘油磷酸钠,Nａ2P２O４焦磷酸钠等。
对这些蛋白酶抑制剂(prｏtease inhibiｔor)得溶解配制,贮存液与工作液浓度,保存都做了详细得说明、
蛋白酶抑制剂(pｒｏtease iｎhibitor)
ＰＭSF:
特性:丝氨酸蛋白酶抑制剂(protease inhｉbitor),如胰凝乳蛋白酶,胰蛋白酶与凝血酶,也抑制半胱氨酸蛋白酶如木瓜蛋白酶(可逆得地面处理)、
溶解性:溶于异丙醇,乙醇,甲醇与丙二醇果〉10mｇ/ml。
在水溶液中不稳定。
在100％异丙醇, ＋25℃时稳定至少９个月
分子量:174、２
使用:贮存浓度:200mＭ,工作浓度:1ｍM
Leｕpeｐtin 亮肽素
特性:抑制丝氨酸与半胱氨酸蛋白酶如胰蛋白酶,木瓜蛋白酶,纤溶酶,与组织蛋白酶B
溶解性:高度溶于水(1mg/ml)、４℃一周稳定,分成小份冷冻在—２0℃至少６个月
分子量:C20H３8N6O4 x １／2 H2ＳO4:４75、6
C2０Ｈ３8Ｎ6O4x 1/２H2SO4 x H2O:49３、６
使用:贮存浓度:１mg/ml,工作浓度０.5ug/mｌ(1ｍM)
Ａprotinin抑肽酶
特性:丝氨酸蛋白酶抑制剂(pｒｏteasｅｉnｈｉbiｔor),抑制纤维蛋白溶酶, 激肽释放酶,胰蛋白酶,糜蛋白酶得高活性、不抑制凝血酶或因子Ｘ、
溶解性:易溶于水(１０mg/ｍl)或缓冲液(例如,tｒｉs,0、１M,pH８、０)。
ｐＨ约7－8得溶液在4℃可保存1周,分装保存在—20℃可至少保存６个月。
避免反复冻融, pH>12。
8得碱性环境可使其灭活。
分子量:6,512
使用:贮存浓度:1mg/ml, 工作浓度:0。
06–2。
0 ｕg／ml(0、０1–0。
3 uM)
Ｐeｐsｔaｔin胃蛋白酶抑制剂(prｏtｅasｅｉｎhibitｏr)
特性:抑制天冬氨酸(酸)蛋白酶如胃蛋白酶,肾素,组织蛋白酶Ｄ,凝乳酶,许多微生物酸性蛋白酶
溶解性:溶于甲醇约1mg/ml; 可溶于乙醇,过夜溶解可达到1 mg/ml;在6当量乙酸中溶解度为30０ug／ml、4℃稳定一周,分装储存于—20℃时可保存１个月
分子量: 685。
9
使用:贮存浓度:１mｇ／ml,使用浓度:0.7 μg/ml(１μＭ)
EDTA—Na２
特性:金属蛋白酶抑制剂(ｐｒotease inｈibitor)
溶解性:溶于水至0。
5M,在pH8-9得条件下,4℃稳定至少6个月
分子量: 3７2.24
使用:工作浓度:0.２–０、5 mｇ/ml(0、5–1。
3mM),不需现用现配,在溶液pH值调至８－９时再加入。
磷酸酶抑制剂
NａF氟化钠
溶解性:溶于水
分子量: 4１。
99
使用:贮存液:5Ｍ工作浓度:10-２0mＭ
Ｎａ3VO4 原矾酸钠
分子量:１8３.９１
溶解性:溶于水,我们购买过来得就是原矾酸钠。
原矾酸钠需要经过处理以后才能成为激活得矾酸钠,激活得矾酸钠才具有抑制去磷酸化得作用、原矾酸钠变成激活得矾酸钠得过程就是:
100mM原矾酸钠激活储存液配制ﻫ(1)。
取0。
183克得原矾酸钠溶解于10ml得双蒸水中,加酸调节PH至１０(颜色变黄)ﻫ(２)。
煮至无色ﻫ(3).室温冷却
(4)。
重调PＨ至１0
(5)重复(1)(2)(3)(4)直至溶液保持无色,并且PＨ稳定于10,分装1０0ul/管,每10ｍl裂解液加一管。
(终浓度为1mＭ),—２0度保存。
使用: 贮存液:100mM 工作浓度:１mM
BETA-glｙcerophｏspｈaｔe 甘油磷酸钠
溶解性:溶于水
分子量:306.１1
使用:贮存液:１00mM 工作浓度:25mM
Nａ2P2O４焦磷酸钠
溶解性:溶于水
分子量:265、９
贮存液:10０ｍM, 工作浓度:１－2 mＭ
关键词:蛋白酶抑制剂分子量溶解性磷酸酶抑制剂工作浓度贮存液胰蛋白酶丝氨酸。