• 酚红在Leabharlann pH值时呈现黄色,在pH6.6至8.0间 会呈现橙色，在高pH值时呈现红色。
• 酚红只是起指示酸碱度的作用，有酚红较 方便但没有也无妨。有人主张最好不用酚 红，可能对细胞生长不利，有时也会影响 一些检测结果。
• 此外酚红有雌激素样作用，所以如果做相 关的实验最好不加。
• 对于Hank`s与D-hank`s液的配制，不同的 文献有不同的配方
其他缓冲系统
• 碳酸盐缓冲系统 • 一般细胞培养液的pH在7.0-7.4之间。由于
碳酸盐pH缓冲系统是一种生理pH缓冲系统， 大多数培养液用它来保持稳定的pH。为了 维持稳定的pH，培养箱中的二氧化碳需要 维持在2-10%之间，以保持培养液中溶解的 二氧化碳的浓度。
• HEPES缓冲系统
• HEPES，即4-羟乙基哌嗪乙磺酸
青霉素与链霉素
• 一般合称双抗。 • 青霉素主要对革兰氏阳性菌有效。 • 链霉素对许多革兰阴性杆菌作用良好
• 配制胰酶液或者是胰酶/EDTA的基础液都是 D-hanks 液，而不能使用Hank`s液。 这是 由于钙离子和镁离子会影响胰蛋白酶的活 性，也会阻碍EDTA的作用。
PBS
• 磷酸盐缓冲液
磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於
它们是二级解离，有二个pKa值，所以用它们配制的缓冲 液，pH范围最宽：
D-Hank`s液配方
• D-Hanks液
NaCl
4.5g
KCl
0.2g
NaHCO3
0.175g
Na2HPO4·12H2O
0.076g
KH2PO4
0.03g
葡萄糖
0.5g
0.4%酚红
2.5ml
将上述成分依次溶解或加入到双蒸水中，最
后加双蒸水定容至500ml，以5.6%NaHCO3调整
pH 值至7.4，4℃冰箱保存备用。
• Hank’s液 • D-Hank`s液 • PBS • EDTA • 胰蛋白酶 • 青霉素、链霉素
Hank`s液与D-Hank`s液
• Hank`s液是常见的平衡盐溶液(BSS)之一。 D-Hank`s液则是无钙镁离子的Hank`s液 （也有资料认为除了不含钙镁离子之外也 不含葡萄糖）。BSS与细胞生长状态下的 pH值、渗透压及无菌状态一致，且配方简 单，是组织培养基本用液，常用于配制培 养基及其他用液，或洗细胞等，细胞在这 种BSS中可生存几个小时。
• 我们可以看到，两者最主要的区别就是Dhank`s液中没有钙镁离子。
Hank`s液与D-Hank`s液
用途上的比较
• Hank`s液是组织培养基本用液，常用于配 制培养基及其他用液，或洗涤组织、细胞 等。细胞在Hank`s液中可以在一段时间内 维持一定的活力。另外Hank`s液还可以用 于终止EDTA的作用。
赖的细胞黏着糖蛋白 ）。而EDTA可以通过 螯合金属离子，破坏Ca2+或Mg2+依赖性的 细胞黏着。 • 胰蛋白酶
水解细胞间的蛋白质，方便形成细胞悬 液。
• 消化细胞时可以只使用胰蛋白酶，也可以 胰蛋白酶与EDTA同时使用。
• 胰蛋白酶的消化作用可以通过加入血清终 止。
• EDTA的作用可以通过加入Hank`s液终止。
• HEPES在pH7.2-7.4之间有很强的缓冲能力， 当透气的培养器皿被拿到二氧化碳培养箱 外面的时候，由于空气中二氧化碳浓度很 低，培养液中碳酸盐缓冲系统就会失去效 果，这时候HEPES缓冲系统就能继续保持 pH的稳定。
EDTA与胰蛋白酶
• EDTA，常用的阳离子螯合剂。 组织细胞间存在钙黏蛋白（一类Ca2+依
•
NaH2PO4： pKa1＝2.12， pKa2＝7.21
•
Na2HPO4： pKa1＝7.21， pKa2＝12.32
• 配酸性缓冲液： 用 NaH2PO4，pH＝1～4，
• 配中性缓冲液： 用混合的两种磷酸盐，pH＝6～8，
• 配碱性缓冲液： 用 Na2HPO4，pH＝10～12。 因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，一般情况下用钾盐比
钠盐好（使用SDS-PAGE时除外）。
PBS与Hank`s液的用途区别
• PBS：磷酸缓冲盐溶液——具有pH缓冲作用的等 渗盐溶液。多用于非活体。
• Hank`s：平衡盐溶液——无机盐和葡萄糖浓度接 近大部分动物（植物）细胞的水平，可作为动 （植）物细胞短期培养（保存）。多用于活体。
• Hank`s液中盐成分较PBS复杂，且有葡萄糖，可 为细胞提供简单的营养，而PSB中只有磷酸根， 钠，钾，氯离子，只是最简单的盐平衡缓冲液， 不能为细胞提供暂时的营养。
Hank`s液配方
• Hank`s液（原液）
原液甲： NaCl
160g
KCl
8g
MgSO4·7H2O
2g
MgCl2·6H2O
2g
上述试剂加入800ml双蒸水。溶解。
CaCl2 2.8g溶于100ml双蒸水
上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。
原液乙： Na2HPO4·12H2O
3.04g
KH2PO4
1.2g
葡萄糖
20g
加入800ml双蒸水，溶解。
0.4%酚红溶液
100ml
上述二液混合，加双蒸水至1000ml，再加2ml氯仿防腐，4℃保存。
使用时甲，乙原液按下列比例配成 Hanks 液
使用液：原液甲1份、原液乙1份、双蒸水18份滤过，20min灭菌，放4℃冰箱保 存，使用前用NaHCO3调整pH值。