注意：多线 Ar 离子激光器功率较高，请务必按照操作步骤开关机，否则会造成该激光器 使用寿命的缩短，并有可能导致激光器的损坏。
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第三章 共聚焦图像拍摄
（一） NIS-Elements C 软件开启和操作界面简介 1．1 打开和关闭 Camera Settings 窗口
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（二） 明视场透射光操作要点
1） 打开电源开关，并打开显微镜透射光卤素灯电源开关； 2） 把滤色块移到空位； 3） 把起偏器，检偏器移出光路； 4） 把聚光器转盘切换到 A 状态； 5） 检查柯勒照明（柯勒照明调节方法参看附录 1） ； 6） 检查出光端口。
Plan Apo VC Plan Apo VC
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第二章 共聚焦开关机操作指南
（1 ） （2 ） （3 ） （4 ） （5 ） （6 ） （7 ） （8 ）
Ti-E 电动倒置荧光显微镜； A1 共聚焦显微镜总控制器； A1 共聚焦显微镜光谱探测模块 A1 共聚焦显微镜标准 4 通道探测模块； A1 共聚焦显微镜扫描头； A1 共聚焦显微镜 4 激光台； A1 共聚焦显微镜激光器电源柜； A1 共聚焦显微镜透射光探测器；
（二） A1R-si 关机顺序
1. 请先确认关闭软件，再关闭共聚焦控制器（此条请特别注意） ； 2. 依次关闭显微镜各个控制部件电源； 3. 依次关闭各个激光器之后，关闭激光器电源总开关； 4. 关掉 UPS 或接线板总开关（遇到如停电等特殊情况时进行此步骤） 。
（三） 激光器的开关机顺序
各个激光器的开关是独立的。下面分别加以介绍：
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北京大学化学学-大约 30 秒后，液晶面板会有数字显示 17 左右--把左侧开关○ 5 由 standby 拨到 operate，液晶面板显示数值 40 左右，打开完成； 关机：把左侧开关由 run 拨到 standby--3a 上的钥匙开关转到垂直位置--等几分钟， 待风扇停止转动之后，把电源开关拨到 OFF 位置。 （4）543nm 激光器（开关内置在激光底座电源中）
首先要打开激光器电源盒前面钥匙旋钮，然后根据需要打开相应的激光器。 （1）640nm 激光器电源操作面板 开机：电源开关拨到 ON 位置--钥匙开关拨到 I 位置; 关机：钥匙开关拨到 O 位置--电源开关拨到 OFF 位置 （2）405nm 激光器电源操作面板 开机：电源开关拨到 ON 位置--钥匙开关拨到 I 位置; 关机：钥匙开关拨到 O 位置--电源开关拨到 OFF 位置 （3）488nm 多线 Ar 离子激光器 开机：确认开关○ 5 处于 Standby 位置后，将钥匙开关○ 6 转到 on 位置，这时风扇开始
注意：该系统配置透射和荧光光闸，在做相应操作时，应将对应光闸打开。光闸开关可在遥 控器上设定。
落射光照明 光闸按钮 透射光光闸 按钮
汞灯光闸按钮 （电动型号）
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显微镜光路调节和照明注意事项
（一） 柯勒照明的调节方法
1） 选择 10X 物镜； 2） 调焦，使标本清晰成像； 3） 缩小视场光阑（显微镜视图 2 位置） ； 4） 上下调节聚光器（显微镜视图 3 位置） ，使视场光阑边缘清晰； 5） 调节聚光器对中旋钮，使其居中； 6） 放大视场光阑，使其刚刚外切于视野。
39-42 43-46
47-51 52-53
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第一章
（一） 认识显微镜各个部件
Ti-E 显微镜操作指南
（1） 滤光片：包括 D---毛玻璃；NCB---色温 平衡片；ND---减光片； “GIF”---绿色滤 光片和用于 PFS 的红外滤光片； （2） 视场光阑； （3） 聚光器升降旋钮； （4） 起偏器（DIC 用） ； （5） 聚光器对中旋钮； （6） 孔径光阑； （7） 聚光器模块（包括明视场，DIC） ；
当 NIS-Elements 启动时，Camera Settings 窗口自动打开；随着 NIS-Elements 关闭而自动关闭。
1.1.1 启动 Camera Settings 窗口
双击 NIS-Elements 图标。
图 1.1-1 NIS-Elements 图标 硬件首先进行初始化，桌面上出现[Now initializing]对话框。硬件初始化结束后，该对话框自动关 闭。
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Ti-E 物镜，DIC 插片，DIC 棱镜对照表
Ti-E: Combinations of objective and DIC prism
Objective Plan Apo Plan Apo Plan Apo 10× VC 20× 40× 60× 100× DIC Slider 10× 20× 40×Ⅰ 60×I 100×I N1/N2 N1 N2 N2 N2 N2
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图 1.1-4 初始状态的 NIS-Elements 窗口和 Camera Settings 窗口
1.1.2 关闭 Camera Settings 窗口
NIS-Elements 关闭时，Camera Settings 也自动关闭。
1.2
Camera Settings 窗口结构
（二） 长寿命汞灯电源的注意事项
1） 电源打开以后，大约 10 分钟左右光源达到稳定状态； 2） 电源关闭以后，至少要等 10 分钟才能重新打开。
（三） 物镜盖玻片矫正环的调节方法
1） 调焦，使图像相对最清楚； 2） 把矫正环向一个方向转动一定角度，此时图像变模糊，调焦，使图像相对最清楚； 3） 判断此时的图像质量是否有所改善。如有改善，则按照该方向再旋转一定角度；如质量 下降，则反方向旋转； 4） 重复 2）和 3）直到图像质量改善之后又有所下降； 5） 反方向旋转，回到倒数第二次的位置即可。
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激光扫描共聚焦显微镜
（A1R-si）
操 作 指 南
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目 录
第一章：Ti-E 显微镜操作
显微镜光路调节和照明注意事项 Ti-E 物镜，DIC 插片，DIC 棱镜对照表
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6 7
第二章：共聚焦开关机 第三章：共聚焦图像拍摄
（1）主菜单栏； （2）上图标工具栏； （3）左图标工具栏； （4）窗口排布选择； （5）控制窗口边栏； （6）图像显示区域； （7）状态栏
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Camera Settings 是用于设置共聚焦扫描参数的窗体，主要包括：设定激光光源和强度、调整图像 亮度、光刺激设定、扫描方法、扫描精度／速度等。
图 1.2-1 Camera Settings 窗体
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北京大学化学学院中级仪器实验室 表 1.2-1 Camera Settings 窗体功能列表 功能名称
（３） （４） （５） （６）
滤色块和染料 图像获取画面用于设定 PMT 亮度、 激光功率和针孔大小。 图像获取／光刺激设定 扫描参数设置 遥控器选择图标 光刺激画面中设置用于刺激的激光的功率。 选取扫描方法、精度、速度等。 用于标识当前处于遥控器控制下的通道。
1.3
NIS-Elements 的操作界面
（8） 滤色块转盘（包括 DIC 检偏器） ； （9） 手动荧光光闸； （10） 电动焦距调节旋钮； （11） ND 减光片； （12） 遥控器； （13） 透射光电源； （14） 汞灯荧光光源； （15） PFS 控制器 （16） HUB 控制器
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遥控器示意图(根据具体配置有些图标可能不显示) 1） 2） 3） 4） 5） 6） 7） 物镜切换按钮； 滤光块，DIC 检偏器切换按钮； DIC 检偏器快速切换按钮； 光路端口切换按钮； PFS 开关控制按钮； 聚光器转盘切换按钮； 透射光源控制按钮*。
*请注意：CNTL 按钮灯亮，则可以通过遥控器或电脑控制软件来调节透射光源强度，此时显微 镜底座左侧光源开关和调节旋钮锁定；CNTL 功能关闭，可以通过显微镜底座开关和旋钮来控制 透射光源。
NIS-Elements C 软件开启和操作界面简介 NIS-Elements C 的实时图像获得基本操作 图像拍摄 探测模式（标准探测器）设置
8-10 11-38
11-15 16-23 24-27 28-38
第四章: 图像的保存和查看 第五章：图像分析
附件一、多维拍摄功能和操作方式介绍 附件二：图像格式批量转换操作
注意： 开机时， 必须是先打开硬件 （包括显微镜， 激光器， 共聚焦总控制器） ， 再打开 NIS-Elements 软件；关机时，必须是先关掉软件，再关掉硬件。
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（一） A1R-si 开机顺序
1. 打开 UPS 或接线板总电源开关（一般都处于开机状态） ； 2. 打开需要使用的激光器，不使用的激光器可以不打开（具体见后面） ； 3. 打开共聚焦控制器左侧面板右上角的控制器开关； 4. 依次打开电脑，显微镜的长寿命汞灯电源，卤素灯电源，电动载物台控制电源； 5. 打开显微镜底座右后端的 HUB 控制部件电源； 6. 待确认控制器打开的状态下， 双击桌面 NIS-Elements 3.0 快捷图标， 选择 Nikon A1/C1 confocal 选项进入软件，开始共聚焦操作。
（１） （２） 图像获取 扫描模式选择