大黄中游离蒽醌类 成分的提取、分离 与鉴定（二）
实验目的
1. 通过大黄酚及大黄素甲醚的分离试验，掌 握硅胶柱色谱的操作技术。 2. 掌握蒽醌类化合物的化学鉴定及色谱鉴定 技术。

实验原理



大黄中游离蒽醌的极性大小顺序为：大黄酸>大黄 素>芦荟大黄素>大黄素甲醚>大黄酚。前三种可用 pH梯度萃取法分离。 大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用 硅胶柱色谱法进行分离。 总蒽醌及各种分离成分可用色谱法进行鉴别。同时 硅胶柱色谱洗脱液可用色谱法鉴别后，合并单一成 分的洗脱液。来自注意事项


①大黄中的蒽醌类成分大部分与糖结合，以蒽醌的形式存在 于植物组织中。所以要用酸水解使其生成苷元。蒽醌苷元可 溶于氯仿、苯及乙醚等有机溶剂，用苯时应注意苯蒸气的挥 发，严防中毒； ②所得的氯仿液中如带有酸水液，应该用分液漏斗分出弃去， 并用蒸馏水回洗一次除去酸性以免影响梯度萃取。氯仿提取 液放置中如有沉淀析出，可滤取之，该沉淀多为大黄素，余 液进行下一步分离试验用。 ③ 分离萃取时一定注意乳化层的分出，不要混入，并且每步 最好用新鲜CHCl3，回洗碱水液。回洗液应弃去，可除去混 入碱液中的大黄素甲醚和大黄酚。 留取5ml的三氯甲烷提取液做总样，供最后层析鉴定用。
仪器、材料与试剂


实验试剂及试药： 大黄药材粗粉2Kg，氯仿500ml 10瓶，浓硫酸2瓶，浓盐酸2 瓶，冰醋酸，苯，乙酸乙酯，碳酸钠（5% Na2CO3溶液 3000ml），碳酸氢钠（5% NaHCO3溶液3000ml），氢氧 化钠（5% NaOH溶液1000ml），氢氧化钾，醋酸镁试剂等。 实验仪器设备： 500ml圆底烧瓶10个，冷凝回流管10只，500ml分液漏斗10 只，500ml烧杯20只，100-250ml量筒10只，常压漏斗（510cm斗径10只），定性滤纸（10cm）2盒，毛细管点样器1 盒，玻璃喷瓶4套，广谱PH试纸5盒，纱布一卷，多孔水浴 锅5台，旋转蒸发仪2台。


2. 游离蒽醌类化合物的鉴定 1）.化学检识：分别取总蒽醌提取物少许，用乙醚溶解，做 如下反应： A：碱液试验：取试液1ml，加10%NaOH数滴，观察颜色。 B．醋酸镁反应：取试样1ml，加醋酸镁试剂数滴，观察现象。 2）.薄层鉴定： 吸附剂：硅胶-CMC-Na板 展开剂：石油醚-乙酸乙酯-甲酸（15:5:1）上层溶液。 展开方式：上行展开。 显色： 可见光下显示黄色斑点，记录斑点出现位置；浓氨水 熏蒸，显示红色斑点。观察记录斑点位置，记录图谱并计算 Rf。
实验步骤

1. 硅胶柱色谱分离大黄酚及大黄素甲醚
（1）装柱：取一玻璃层析柱，垂直固定在铁架台上，在
管的下端垫入少量棉花，装入100～200目硅胶（约1/3高， 湿法装柱）。 （2）上样：将样品置于小蒸发皿中，用少量石油醚分散， 另加用3倍量硅胶拌和均匀，并于水浴上缓缓蒸去溶剂。 然后将含有样品的硅胶装入色谱柱的上端，并盖一圆形 滤纸。 （3）洗脱：将色谱柱活塞打开，洗脱剂为石油醚（沸程 30-60℃）-乙酸乙酯（25∶1）混合液。 （4）收集：洗脱液3ml一份，分别收集，用硅胶薄层板 跟踪检查，合并相同成分，回收溶剂，用甲醇重结晶， 分别得到大黄素甲醚好大黄酚精制品。 薄层色谱检查条件：硅胶G-CMC-Na薄层板，石油醚-乙 酸乙酯（9:1）展开，可见光下显示黄色斑点，紫外光下 显示亮黄色斑点，氨气熏，显示红色斑点。
实验报告

按照实验报告要求认真填写，并认真完成下 次实验的预习《牡丹皮中丹皮酚的提取、分 离与鉴定》。
课外作业

1.五种游离羟基蒽醌化合物的酸性和极性与 结构有什么关系？Rf值顺序如何？