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风疹病毒

`赛润 ELISA classic风疹病毒 IgG/IgM目录1.用途2.诊断意义3.赛润 ELISA classic- 检测原理4.试剂盒组成5.检测所需物质,试剂盒未提供6.储存和稳定性7.赛润 ELISA classic的检验步骤7.1注意事项7.2样品准备和储存7.3试剂盒反应试剂的准备工作7.4检测程序概要7.5检测过程8.检测结果评估8.1 4PL单点定量法8.2检验有效性标准8.3计算赛润 ELISA classic风疹病毒 IgG/IgM(定量)8.4检测结果分析9. 性能特性9.1重复性9.2 敏感性和特异性10. 风疹病毒IgG抗体的亲和力评估11. 警告11.1警告和安全措施11.2废料处理12.参考文献V9.03/07-1赛润 ELISA classic风疹病毒 IgG/IgM酶联免疫测定法体外诊断人体抗体(IgG/IgM)- 只限用于体外诊断-IgG试剂盒(定量)编号 ESR129GIgM试剂盒(定量)编号ESR129M检测评估标准: Dade Behring BEP ® III / BEP ® 2000, DSX, 手动操作1.用途赛润 ELISA classic风疹病毒 IgG/IgM用于定性和/或定量检测人体内血清、脑脊液或血浆中抗风疹病毒的抗体。

检测抗风疹病毒IgG和IgM对于风疹病毒的血清学研究具有特殊的价值,如判断机体免疫状态及初次感染。

2.诊断依据风疹病毒是一种人类病原体,属于RNA病毒的披膜病毒科,可通过飞沫和直接接触等方式传播,潜伏期一般为10-21天。

大约50%的感染病例初期伴有弥散性斑疹,随后这些微小的斑疹可能融合。

出生后感染通常并无大碍,有25-30%的患者尽管出现心肌炎,神经炎,耳炎,支气管炎,脑炎等并发症,也属于亚临床感染。

风疹病毒感染的临床诊断都应有血清学证据的支持,因为皮疹和关节炎这些临床症状也可以由其它病毒引起。

(见1.,2.)妊娠期风疹感染可能导致胎儿受到严重损伤及多系统疾病。

因此,妊娠期风疹的诊断就尤显重要。

当其他的检验系统(如血细胞凝集抑制实验)的结果为弱阳性或可疑,不能由此判断免疫状态的时候,免疫球蛋白G-酶联免疫吸附试验(IgG-Elisa)在确认检验结果和判断免疫状态方面就非常重要了。

通常来讲,IgM-Elisa (免疫球蛋白 M-酶联免疫吸附试验)的阳性结果是初次感染的指标。

患者感染后,抗风疹病毒的IgM抗体通常存在1-2个月,但也可能在可检测水平上维持一年。

由于风疹再次感染也可能产生IgM(免疫球蛋白M)抗体,在这种情况下,对所有IgM检测结果阳性的患者取双份血进行检测是至关重要的,而且我们也应清醒的认识到,没有任何一个血清检测的特异性和敏感性是100%(见2.,3.)。

鉴于风疹感染对胎儿带来的严重后果,抗风疹IgM检测为阳性的怀孕患者,应该用另一种反应原理的酶联免疫吸附试验对IgM再次进行检测。

此外,也应进行其他的确认检测,如IgA(免疫球蛋白A)抗体试验,免疫印迹或亲和力试验。

(见2.)。

多数情况下,妊娠期的初次感染不会导致胎儿子宫内感染。

因此,为评价可能引起胎儿损伤的风险(5.),应该进行产前诊断(4.)。

3.赛润ELISA classic - 检验原理用抗原包被微量板孔,制成固相载体。

加患者血清到板孔中,其所含的抗体特异性地与固相载体中存在的抗原结合,形成免疫复合物。

除去多余物质后,加入碱性磷酸酶标记的IgG、IgA和IgM抗体,使之与上述免疫复合物反应。

洗板,除去多余的结合物,加入底物(对硝基苯磷酸盐)。

其与酶结合的免疫复合物反应,产生有颜色产物,颜色强度与特异性抗体含量成正比。

4.试剂盒的组成5.检测所需物质,试剂盒未提供- 普通实验室所配的仪器装置- IgM检测:另需赛润含对照抗原的类风湿因子Rf—吸附剂 (Rf-吸附剂/对照抗原(产品编号T200/20ml))- 分光光度计,波长405纳米,建议参考波长范围620纳米- 690纳米(例如650纳米)- 37℃温箱- 湿盒- 蒸馏水。

6.储存及稳定性7.赛润 ELISA classic的检验步骤7.1注意事项只有全部使用赛润 ELISA classic试剂才能保证检测效果,因为所有试剂都是有关联的,不能混用其他制造商的产品。

尤其是标准血清,对照血清以及酶标记物,必须使用试剂盒配备的,不要使用其它批号产品。

稀释缓冲液,洗液,终止液和底物溶液可用于所有赛润 ELISA classic试剂盒。

ELISA classic试剂盒内所有试剂均必须正确地存放。

应在未开封的情况下,保存于2-8℃,并在有效期(见标签说明)内使用。

详细的稳定性和储存资料在“6. 储存及稳定性”内将加以详述。

每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。

这些试剂如果未经规定被稀释或改动都会导致检测的敏感性的降低。

在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。

所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染,避免试剂受到微生物污染,因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。

请从标记处剪开密封袋。

如果铝袋破损或者已开启装有干燥剂的铝袋而未以夹子封紧的,则不要继续使用微孔条。

开始试验前,将所有试剂置于室温。

从试剂管中吸取试剂的时候,应注意使用无菌技术以防污染。

为避免假阳性结果,吸加酶结合物时,吸嘴应确保不接触或喷洒于小孔的顶避,注意不要盖错瓶盖或管盖。

试验结果的可重复性依赖于充分混匀试剂。

使用前振荡装有对照血清的小管和所有稀释过的溶液(例如使用混合器)。

小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。

请注意在吸取标本 / 对照血清,酶结合物或底物时,第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果长,将会导致不同的“预孵育”时间,从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。

只有严格遵守赛润ELISA classic试剂的试验说明才会得到最佳的检测结果。

如果实验中未严格遵守质量控制认证文件上的有效性特异准则,则试验结果无效。

洗涤不充分将影响试验结果:应该小心进行洗涤。

洗涤步骤应遵守相关洗涤器(平底孔,孔直径7毫米,深10.9毫米)指导手册进行,所有的孔内均应加入相同体积的洗涤缓冲液。

洗涤结束时,应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打,以确保所有孔内均无洗涤缓冲液。

避免产生泡沫!如果使用自动洗板机,注意正确操作。

7.2检验前的准备工作和储存避免使用高血脂、溶血或黄疸的标本,尽管在我们的检测中没有发现有副影响。

明显被污染的标本(血清或血浆)不能用于检测。

样品不应加热灭活。

7.2.1样品准备赛润 ELISA classic风疹病毒 IgG开始试验前,患者的待测样品必须以稀释缓冲液稀释如下(V1+V2):稀释后及加入微孔板前,样品必须充分混匀。

赛润 ELISA classic风疹病毒 IgM类风湿因子抗体是自身IgM型的抗体,可与IgG免疫复合物结合。

非特异性风湿因子抗体的存在将导致IgM检测的假阳性结果。

另外,也存在弱结合的病原体特异性IgM抗体被强结合的IgG抗体取代的可能性。

在这种情况下,IgM的检测将得到假阴性的结果。

因此,在进行IgM检测前应用类风湿因子吸附剂对血清作预处理。

特别类风湿因子Rf—吸附剂(产品编号T200,20ml)不仅包含抗人IgG抗体,还含有一定量的对照抗原,对照抗原同时能与类风湿因子及可识别宿主细胞膜成份的抗体结合。

因此,无须再进行微量孔包被对照抗原的平行试验。

在进行以下SERION ELISA classic IgM检测时,此类RF—吸附剂需作为附加试剂另行购买:巨细胞,单纯疱疹病毒,麻疹,腮腺炎,风疹病毒,刚地弓形虫,带状疱疹病毒首先应该使用稀释缓冲液(V2)对类风湿因子吸附剂(Rf-吸附剂/对照抗原)(V1)进行如下稀释:然后将患者的待测样品(V1)在此Rf-稀释缓冲液(V3)中进行稀释:7.2.2样品储存密封的患者样品可在冰箱中2-8℃保存7天。

≤ -20℃可保存更久。

避免样品反复冻融。

已稀释的样品可在2-8 ℃保存一星期。

7.3 试剂和反应试剂的准备工作7.3.1 微孔条微孔条置于一框架内,并与干燥剂一同封于铝袋之中。

应将不需要的微孔条取下并重新放入铝袋。

将袋口折叠2-3次,并以夹子夹紧,确保铝袋的密封性。

7.3.2 对照血清 / 标准血清对照和标准血清立即可用,不必进一步稀释。

试验时,可直接使用。

对于每次试验和每批检测体系,无论使用的微量板数目的多少,均应包括阴性阳性对照孔。

临界值血清应作双份测定。

如果是定量试验,标准血清也应作双份。

不要用RF吸附剂处理对照血清!7.3.3 抗人 IgG, IgA 或IgM抗体稀释液,用 AP标记(即用)禁止将不同试剂盒的酶标抗体混合。

同一试剂盒才能具最佳检测效果。

7.3.4 洗液以1:30稀释浓缩洗涤缓冲液(V1)至终体积V2。

例如:7.3.5 样品的稀释缓冲液(即用)7.3.6底物(即用)试验时戴手套以避免污染。

必须以无菌枪尖吸取底物溶液。

7.3.7 终止液(即用)7.4 检测程序概要定量的风疹病毒IgG / IgM进行IgM检测时先用类风湿因子吸附剂预处理血清,请参见7.2.1;室温孵育15分钟或4℃过夜样品稀释液(病人血清)1+100↓将稀释的样本,和立即可用的对照血清 / 标准血清,加到微量孔内(100微升)洗涤↓加入立即可用的酶标记抗体溶液(100微升)↓洗涤↓加入底物溶液(100微升)加入终止液(100微升)↓7.5检测过程7.5.1 将检测所需数目的微孔条放到微孔板框上并准备好一张草签。

7.5.2 在微量孔内分别加入100微升的已稀释样本或立即可用的对照血清。

留一个孔为底物空白使用,例如:7.5.3 将样品于湿盒内37℃(±-1℃)孵育60分钟(±5分钟)。

7.5.4 孵育后以洗液缓冲液洗涤板孔(使用自动洗板机或手工洗板):- 吸去或甩去洗液- 每孔内加入300微升洗液- 吸去或甩去洗液- 重复洗涤过程3次(共4次!)- 将微孔板翻转过来在纸巾上拍打,使微孔中不再含有液体7.5.5加入酶标记抗体。

于适当孔内(底物空白除外)加入100微升 IgG / IgM / IgA酶标记抗体7.5.6 湿盒内37℃(±1℃)孵育30分钟(± 1分钟)*。

7.5.7 孵育后,以洗液清洗板孔(洗涤见上)7.5.8 加入底物于每孔内加入100微升底物溶液(包括底物空白孔)7.5.9 湿盒内37℃(±1℃)孵育30分钟(±1分钟)*。

7.5.10 终止反应每孔内加入100微升终止液,轻微振荡微孔板以混合溶液。

*注意:在特殊的工作环境下有必要对孵育时间进行调整。

7.5.11 读取消光度以底物空白为空白对照液, 60分钟内读取405纳米的OD值,建议参考波长范围为620纳米-690纳米(例如650纳米)。

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