`赛润 ELISA classic风疹病毒 IgG/IgM目录1.用途2.诊断意义3.赛润 ELISA classic- 检测原理4.试剂盒组成5.检测所需物质，试剂盒未提供6.储存和稳定性7.赛润 ELISA classic的检验步骤7.1注意事项7.2样品准备和储存7.3试剂盒反应试剂的准备工作7.4检测程序概要7.5检测过程8.检测结果评估8.1 4PL单点定量法8.2检验有效性标准8.3计算赛润 ELISA classic风疹病毒 IgG/IgM（定量）8.4检测结果分析9. 性能特性9.1重复性9.2 敏感性和特异性10. 风疹病毒IgG抗体的亲和力评估11. 警告11.1警告和安全措施11.2废料处理12.参考文献V9.03/07-1赛润 ELISA classic风疹病毒 IgG/IgM酶联免疫测定法体外诊断人体抗体（IgG/IgM）- 只限用于体外诊断-IgG试剂盒（定量）编号 ESR129GIgM试剂盒（定量）编号ESR129M检测评估标准: Dade Behring BEP ® III / BEP ® 2000, DSX, 手动操作1.用途赛润 ELISA classic风疹病毒 IgG/IgM用于定性和/或定量检测人体内血清、脑脊液或血浆中抗风疹病毒的抗体。

检测抗风疹病毒IgG和IgM对于风疹病毒的血清学研究具有特殊的价值，如判断机体免疫状态及初次感染。

2.诊断依据风疹病毒是一种人类病原体，属于RNA病毒的披膜病毒科，可通过飞沫和直接接触等方式传播，潜伏期一般为10-21天。

大约50%的感染病例初期伴有弥散性斑疹，随后这些微小的斑疹可能融合。

出生后感染通常并无大碍，有25-30%的患者尽管出现心肌炎，神经炎，耳炎，支气管炎，脑炎等并发症，也属于亚临床感染。

风疹病毒感染的临床诊断都应有血清学证据的支持，因为皮疹和关节炎这些临床症状也可以由其它病毒引起。

（见1.，2.）妊娠期风疹感染可能导致胎儿受到严重损伤及多系统疾病。

因此，妊娠期风疹的诊断就尤显重要。

当其他的检验系统（如血细胞凝集抑制实验）的结果为弱阳性或可疑，不能由此判断免疫状态的时候，免疫球蛋白G-酶联免疫吸附试验（IgG-Elisa）在确认检验结果和判断免疫状态方面就非常重要了。

通常来讲，IgM-Elisa (免疫球蛋白 M-酶联免疫吸附试验)的阳性结果是初次感染的指标。

患者感染后，抗风疹病毒的IgM抗体通常存在1-2个月，但也可能在可检测水平上维持一年。

由于风疹再次感染也可能产生IgM（免疫球蛋白M）抗体，在这种情况下，对所有IgM检测结果阳性的患者取双份血进行检测是至关重要的，而且我们也应清醒的认识到，没有任何一个血清检测的特异性和敏感性是100%（见2.,3.）。

鉴于风疹感染对胎儿带来的严重后果，抗风疹IgM检测为阳性的怀孕患者，应该用另一种反应原理的酶联免疫吸附试验对IgM再次进行检测。

此外，也应进行其他的确认检测，如IgA(免疫球蛋白A)抗体试验，免疫印迹或亲和力试验。

（见2.）。

多数情况下，妊娠期的初次感染不会导致胎儿子宫内感染。

因此，为评价可能引起胎儿损伤的风险（5.），应该进行产前诊断（4.）。

3.赛润ELISA classic - 检验原理用抗原包被微量板孔，制成固相载体。

加患者血清到板孔中，其所含的抗体特异性地与固相载体中存在的抗原结合，形成免疫复合物。

除去多余物质后，加入碱性磷酸酶标记的IgG、IgA和IgM抗体，使之与上述免疫复合物反应。

洗板，除去多余的结合物，加入底物（对硝基苯磷酸盐）。

其与酶结合的免疫复合物反应，产生有颜色产物，颜色强度与特异性抗体含量成正比。

4.试剂盒的组成5.检测所需物质，试剂盒未提供- 普通实验室所配的仪器装置- IgM检测：另需赛润含对照抗原的类风湿因子Rf—吸附剂 (Rf－吸附剂/对照抗原(产品编号T200/20ml))- 分光光度计，波长405纳米，建议参考波长范围620纳米- 690纳米（例如650纳米）- 37℃温箱- 湿盒- 蒸馏水。

6.储存及稳定性7.赛润 ELISA classic的检验步骤7.1注意事项只有全部使用赛润 ELISA classic试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。

尤其是标准血清，对照血清以及酶标记物，必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。

稀释缓冲液，洗液，终止液和底物溶液可用于所有赛润 ELISA classic试剂盒。

ELISA classic试剂盒内所有试剂均必须正确地存放。

应在未开封的情况下，保存于2-8℃，并在有效期（见标签说明）内使用。

详细的稳定性和储存资料在“6. 储存及稳定性”内将加以详述。

每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。

这些试剂如果未经规定被稀释或改动都会导致检测的敏感性的降低。

在储存及孵育过程中避免将试剂暴露在强光中。

所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和污染，避免试剂受到微生物污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。

请从标记处剪开密封袋。

如果铝袋破损或者已开启装有干燥剂的铝袋而未以夹子封紧的，则不要继续使用微孔条。

开始试验前，将所有试剂置于室温。

从试剂管中吸取试剂的时候，应注意使用无菌技术以防污染。

为避免假阳性结果，吸加酶结合物时，吸嘴应确保不接触或喷洒于小孔的顶避，注意不要盖错瓶盖或管盖。

试验结果的可重复性依赖于充分混匀试剂。

使用前振荡装有对照血清的小管和所有稀释过的溶液（例如使用混合器）。

小心吸取试剂并严格遵守给定的孵育时间和温度。

请注意在吸取标本 / 对照血清，酶结合物或底物时，第一个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果长，将会导致不同的“预孵育”时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。

只有严格遵守赛润ELISA classic试剂的试验说明才会得到最佳的检测结果。

如果实验中未严格遵守质量控制认证文件上的有效性特异准则，则试验结果无效。

洗涤不充分将影响试验结果：应该小心进行洗涤。

洗涤步骤应遵守相关洗涤器（平底孔，孔直径7毫米，深10.9毫米）指导手册进行，所有的孔内均应加入相同体积的洗涤缓冲液。

洗涤结束时，应将微孔板倒扣于纸巾上并轻轻敲打，以确保所有孔内均无洗涤缓冲液。

避免产生泡沫！如果使用自动洗板机，注意正确操作。

7.2检验前的准备工作和储存避免使用高血脂、溶血或黄疸的标本，尽管在我们的检测中没有发现有副影响。

明显被污染的标本（血清或血浆）不能用于检测。

样品不应加热灭活。

7.2.1样品准备赛润 ELISA classic风疹病毒 IgG开始试验前，患者的待测样品必须以稀释缓冲液稀释如下（V1+V2）：稀释后及加入微孔板前，样品必须充分混匀。

赛润 ELISA classic风疹病毒 IgM类风湿因子抗体是自身IgM型的抗体，可与IgG免疫复合物结合。

非特异性风湿因子抗体的存在将导致IgM检测的假阳性结果。

另外，也存在弱结合的病原体特异性IgM抗体被强结合的IgG抗体取代的可能性。

在这种情况下，IgM的检测将得到假阴性的结果。

因此，在进行IgM检测前应用类风湿因子吸附剂对血清作预处理。

特别类风湿因子Rf—吸附剂（产品编号T200,20ml）不仅包含抗人IgG抗体，还含有一定量的对照抗原，对照抗原同时能与类风湿因子及可识别宿主细胞膜成份的抗体结合。

因此，无须再进行微量孔包被对照抗原的平行试验。

在进行以下SERION ELISA classic IgM检测时，此类RF—吸附剂需作为附加试剂另行购买:巨细胞，单纯疱疹病毒，麻疹，腮腺炎，风疹病毒，刚地弓形虫，带状疱疹病毒首先应该使用稀释缓冲液(V2)对类风湿因子吸附剂(Rf-吸附剂/对照抗原)(V1)进行如下稀释：然后将患者的待测样品(V1)在此Rf-稀释缓冲液(V3)中进行稀释：7.2.2样品储存密封的患者样品可在冰箱中2-8℃保存7天。

≤ -20℃可保存更久。

避免样品反复冻融。

已稀释的样品可在2-8 ℃保存一星期。

7.3 试剂和反应试剂的准备工作7.3.1 微孔条微孔条置于一框架内，并与干燥剂一同封于铝袋之中。

应将不需要的微孔条取下并重新放入铝袋。

将袋口折叠2-3次，并以夹子夹紧，确保铝袋的密封性。

7.3.2 对照血清 / 标准血清对照和标准血清立即可用，不必进一步稀释。

试验时，可直接使用。

对于每次试验和每批检测体系，无论使用的微量板数目的多少，均应包括阴性阳性对照孔。

临界值血清应作双份测定。

如果是定量试验，标准血清也应作双份。

不要用RF吸附剂处理对照血清！7.3.3 抗人 IgG, IgA 或IgM抗体稀释液，用 AP标记（即用）禁止将不同试剂盒的酶标抗体混合。

同一试剂盒才能具最佳检测效果。

7.3.4 洗液以1：30稀释浓缩洗涤缓冲液（V1）至终体积V2。

例如：7.3.5 样品的稀释缓冲液（即用）7.3.6底物（即用）试验时戴手套以避免污染。

必须以无菌枪尖吸取底物溶液。

7.3.7 终止液（即用）7.4 检测程序概要定量的风疹病毒IgG / IgM进行IgM检测时先用类风湿因子吸附剂预处理血清，请参见7.2.1；室温孵育15分钟或4℃过夜样品稀释液（病人血清）1+100↓将稀释的样本，和立即可用的对照血清 / 标准血清，加到微量孔内（100微升）洗涤↓加入立即可用的酶标记抗体溶液（100微升）↓洗涤↓加入底物溶液（100微升）加入终止液（100微升）↓7.5检测过程7.5.1 将检测所需数目的微孔条放到微孔板框上并准备好一张草签。

7.5.2 在微量孔内分别加入100微升的已稀释样本或立即可用的对照血清。

留一个孔为底物空白使用，例如：7.5.3 将样品于湿盒内37℃（±-1℃）孵育60分钟（±5分钟）。

7.5.4 孵育后以洗液缓冲液洗涤板孔（使用自动洗板机或手工洗板）：- 吸去或甩去洗液- 每孔内加入300微升洗液- 吸去或甩去洗液- 重复洗涤过程3次（共4次！）- 将微孔板翻转过来在纸巾上拍打，使微孔中不再含有液体7.5.5加入酶标记抗体。

于适当孔内（底物空白除外）加入100微升 IgG / IgM / IgA酶标记抗体7.5.6 湿盒内37℃（±1℃）孵育30分钟（± 1分钟）*。

7.5.7 孵育后，以洗液清洗板孔（洗涤见上）7.5.8 加入底物于每孔内加入100微升底物溶液（包括底物空白孔）7.5.9 湿盒内37℃（±1℃）孵育30分钟（±1分钟）*。

7.5.10 终止反应每孔内加入100微升终止液，轻微振荡微孔板以混合溶液。

*注意：在特殊的工作环境下有必要对孵育时间进行调整。

7.5.11 读取消光度以底物空白为空白对照液， 60分钟内读取405纳米的OD值，建议参考波长范围为620纳米-690纳米（例如650纳米）。